H E X A G O N PSA
Prueba inmunocromatogrfica de un solo paso (One
Step) para la Deteccin Forense de Semen
Cada caja contiene:
- 20 Inmunocromatoplacas.
- 20 Pipetas pasteur desechables.
- Instrucciones de uso.
Principio de la Prueba
En el Protocolo Forense de Investigacin de Manchas que se presumen
de origen Seminal, se hace necesaria la utilizacin de Pruebas de
Orientacin o Presuncin (Fosfatasa cida) y Pruebas de Confirmacin
(Observacin de Espermatozoides o Deteccin del Antgeno Prosttico
Especfico).
El Anfgeno Prosttico Especfico (PSA) tambin conocido como p30,
es una glicoprotena producida por la glndula prosttica, la cul hoy en
da, esta siendo utilizada por las Ciencias Forenses como un marcador de
la presencia de lquido seminal an y cuando el individuo sea
azoosprmico o presente vasectoma.
El HEXAGON PSA es una prueba inmunocromatogrfica de un solo
paso para la deteccin de p30 la cul contiene anticuerpos fijos y
mviles Anti PSA humano y anticuerpos Anti IgG de ratn como prueba
de control. Una muestra de los indicios que se presume es semen, es
transferida a un medio de extraccin (agua estril o Buffer 1X HEPES).
El extracto o sobrenadante es adicionado gota a gota a la
inmunocromatoplaca, en donde en caso de contener la muestra p30, se
presenta la formacin de un complejo inmunolgico anticuerpo-
antgeno-anticuerpo (sndwich) revelado por la formacin de una lnea
de color rosa-violeta en el rea de prueba (T), debido a la acumulacin
en dicho sitio de los anticuerpos mviles Anti-PSA humana marcados
con partculas de color. Una segunda lnea color rosa-violeta en el rea
de control (C) nos indica un buen funcionamiento de los reactivos y un
adecuado procedimiento del estudio.
Reactivos
- 20 Inmunocromatoplacas individualmente selladas en blister
de aluminio con desecante que constan de un conjugado
mvil de una sustancia color rosa y anticuerpos
monoclonales (anti-PSAh, ratn); anticuerpos fijos
policlonales anti-PSAh (ratn) y anticuerpos anti-IgG de
ratn (cabra).
Almacenamiento y Estabilidad
El kit de prueba es estable hasta su fecha de caducidad cuando es
almacenado entre 2 y 25 C. Este no debe de usarse despus de su fecha
de caducidad. Se debe evitar su congelamiento y exponerlo a
temperaturas mayores de 30 C.
Caractersticas de la Prueba
La prueba es especfica para PSA humano.
La sensitividad de la prueba es de 4 ng PSA/mL aproximadamente
equivalente a una dilucin del lquido seminal de 1:450,000.
Las muestras completas de semen contienen aprx. 1,800,000 ng
PSA/mL.
Una muestra positiva tpicamente es detectada entre los 58 minutos,
pero un resultado negativo no deber de ser confirmado antes de que
pasen 10 minutos. No leer resultados despus de 20 minutos.
Recoleccin de la Muestra
- En caso de Manchas sobre telas, tomar trozos de 5X5 mm del
centro de las mismas.
- En caso de Hisopos, se puede utilizar nicamente la mitad.
- Depositar las muestras en tubos de ensayo para
microcentrfuga de 2 mL o en tubos de ensayo normales de 5
mL.
- Adicionar 1 mL de HEPES (0.24%, pH 7.2) o 1 mL de agua
estril, tapar y extraer por 2 horas a temperatura ambiente.
La muestra as recolectada es estable a temperatura ambiente y debe de ser
analizada inmediatamente o bien congelarse a -20 C para su posterior
anlisis.
Procedimiento e Interpretacin
- Centrifugue la muestra a 13 K rpm por 1 minuto.
- Saque la inmunocromatoplaca de su empaque y colquela sobre
una superficie plana y nivelada.
- Tome 200 L o aplique 3 gotas del supernadante dentro de la
apertura redondeada de la placa.
- Espere aproximadamente 5 minutos y lea los resultados.
- La intensidad del color de la lnea de prueba depende de la
concentracin de PSA en la muestra.
Los resultados negativos debern de confirmarse hasta despus de
transcurridos 10 minutos.
Negativo (Fig. 1)
Aparece solamente una lnea rosa de Control (C) en la parte superior de la
ventana rectangular, indicativo de que la prueba se realizo correctamente y
que los reactivos funcionan.
Positivo (Fig. 2 y 3)
Aparece una segunda lnea rosa de prueba en la parte baja de la ventana
rectangular, indicativo de la presencia de hemoglobina humana en la
muestra.
Invalido (Fig. 4)
No aparece ninguna lnea, o bien no aparece la lnea de control y la de
prueba s. Repetir la prueba utilizando una nueva placa siguiendo
cuidadosamente estas instrucciones.
Referencias:
Hochmeister, M. N., Borer, U., Budowle, B., Dirnhofer, R., Gehrig, C., Rudin, O., and Thali, M.
Evaluation of prostate-specific antigen (PSA) membrane test assays for the forensic identification of
seminal fluid, Journal of Forensic Sciences (1999) 44:1057-1060.
Johnson E. D. and Kotowski T. M. Detection of prostate-specific antigen by ELISA, Journal of
Forensic Sciences (1993) 38:250-258.
Poyntz, F. M. and Martin, P. D. Comparison of PSA and acid phosphatase levels in postcoital
vaginal swabs from donor and casework studies, Forensic Science International (1984) 24:17-25.
Sensabaugh G. Isolation and characterization of a semen-specific protein from human seminal
plasma: A potential new marker for semen identification, Journal of Forensic Sciences (1978)
23:106-15.
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Fig. 1 Fig. 2 Fig. 3 Fig. 4
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