Ao de la integracin nacional y reconocimiento de nuestra diversidad

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

Alumno:

Espinoza Castro Jeancarlos

Docentes:

Dra. Violeta Morn Garrido Mg. Carlos Holgun Mauricio

Curso:

Estructura, Funcin Celular Y Tisular I

Tema:

Laboratorio VI

Ciclo:

II

PRCTICA N 06 PEROXIDASA ACTIVIDAD ENZIMATICA. La peroxidasa es una enzima que cataliza la oxidacin de un amplio nmero de sustratos orgnicos e inorgnicos, utilizando el poder oxidante del perxido de hidrogeno. Es utilizada ampliamente en bioqumica clnica. Asi, los ensayos para la determinacin y cuantificacin de metabolitos como la glucosa, acido rico, colesterol y los triglicridos en fluidos biolgicos usan peroxidasas como enzima acoplada. Tambin, se utiliza en inmunoensayos para al deteccin de virus de virus tan conocidos como el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) causante del SIDA o el herpesvirus. La peroxidasa tambin se utiliza como biocatalizador para la generacin de productos de inters biotecnolgico e industrial como las resinas fenolicas, adhesivas y protectores de radiacin magnetica, colorantes alimentarios y componentes bioactivos de los detergentes. OBJETIVOS: Evidenciar la presencia de la enzima catalasa en los tejidos vivos que acelera la descomposicin del perxido de hidrogeno (H2O2), en el agua y en el oxigeno molecular. Esta actividad ocurre tanto en una celula animal como el hepatocito del hgado, o en una celula vegetal de tomate y que podra resultar toxico para la celula sino es desdoblado. Determinar el efecto de tiempo y temperatura de la actividad enzimtica de la amilasa contenida en la tialina de saliva, sobre el almidon. MATERIALES: Tomate (lycopersicon esculentum) Trozo de hgado fresco Trozo de hgado triturado Papel filtro absorevente Algodn Gradillas Almidon en solucin de 1% Mortero Gillette u hoja de bistur 6 tubos de prueba por mesa Trozos de hgado hervido H2O2 al 3% Arena fina Pinzas Fsforo Marcadores Mechero o bao Maria

FUNDAMENTO TEORICO: Definicin Son catalizadores bilgicos proteicos. Su poder cataltico es mucho mayor que el de los catalizadores inorgnicos. Se han identificado unas 2000 enzimas diferentes Las clulas pueden realizar reacciones qumicas a gran velocidad a temperatura relativamente baja y un pH biolgico merced a las enzimas que una clula elabora determinan las funciones biolgicas de la misma, ya que una clula solo puede llevar a cabo de una reaccin qumica, a un ritmo razonable, se tiene una enzima especifica para catalizar esa reaccin. Sin enzimas las reacciones serian lentas, que difcilmente se llevan a cabo. Enzimas: catalizadores biolgicos. Las reacciones qumicas en sistemas biolgicos raramente ocurren en ausencia de unjn catalizador. Estos catalizadores se denominan enzimas y son en su totalidad molculas de naturaleza proteica (aunque ha habido estudios acerca de enzimas de naturaleza glucosidico). Es razonable pensar en la necesidad que tienen los seres vivos de poseer estos catalizadores, ya que las funciones vitales de cualquier clula serian imposibles de mantener si las reacciones que ocurren en ella fueran extremadamente lentas. Ademas de incrementar la velocidad las enzimas exhiben una elevada especificdad y en algunos casos pueden ser reguladas por diferentes metabolitos, aumentando y otras veces pueden ser reguladas por diferentes metabolitos, aumentando y otras veces disminuyendo, de acuerdo a las necesidades del momento, su actividad. Todas estas propiedades pueden ser cumplidas por molculas altamente complejas, que al ser molculas organicas( macromolculas) comparten caractersticas con las protenas no enzimticas y difieren de los catalizadores inorgnicos: a) Son termohabiles y su actividad depende en ciertos casos del pH del medio. b) El reconocimiento de la enzima con el reactivo a procesar (denominado sustrato ) es altamente especifico. c) Tienen gran eficiencia, es decir, transforman un gran numero de molculas de sustrato por unidad de tiempo. d) Estan sujetas a un gran diversidad de controles celulares, genticos y alostericos. Como todos los catalizadores las enzimas aceleran notablemente la velocidad de una reaccin qumica y cumplen con las siguientes caractersticas. 1) Son efectivas en pequeas cantidades. 2) No sufren modificaciones qumicas irreversibles durante la catlisis. Es decir, que luego de la reaccin enzimtica, las molculas de enzimas que reaccionaron son indistinguibles de las que no lo han hecho,(la estructura de la molecula se mantiene, al principio y al final de la reaccin, exactamente igual). 3) No afectan la posicin de equilibrio de la reaccin que cataliza.El estado inicial y final de la reaccin es el mismo, solo que se llega al equilibrio mucho mas rpidamente.

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMATICAS. Temperatura Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reaccin hasta cierta temperatura optima, ya que despus de aproximadamente 45C se comienza a producir la desnaturalizacin trmica. Las enzimas de muchos mamferos tienen una temperatura optima de 37C, por encima de esa temperatura comienza a inactivarse y se destruyen. Sin embargo existen especies de bacterias y algas que habitan en fuentes de aguas termales y en el otro extremo ciertas bacterias atricas tienen una temperatura optima cercana a los 0C. Efecto de pH sobre la actividad enzimtica. El pH no afecta la actividad enzimtica directamente sino que modifica la concentracin de protones. Los protones adems de alterar la estructura de la enzima y el substrato o producto, en esos casos, la concentracin de protones afecta directamente la velocidad de la reaccion. Cualquier cambio de pH, sabiendo que las enzimas son protenas, puede alterar el carcter ionico de los grupos amino y carboxilo en la superficie proteica, afectando asi a las propiedades catalticas de una enzima.A pH alto o bajo se puede producir la desnaturalizacin de la enzima y en consecuencia su inactivacin. Enzimas: Pepsina 1,5 (pH ptimo) Tripsina 7,7; Catalasa 7,6; Arginasa 9,7; Fumarasa 7,8; Ribonucleasa 7,8. PROCEDIMIENTO I. Evidencia de la actividad de la catalasa sobre los perxidos. Experimento N01: Efecto de un catalizador inorgnico. Vierta una solucin de H2O2 en dos tubos de prueba. En uno de ellos deje caer una pequea cantidad de H2O2 .Observe y anote la velocidad de la reaccin que tiene lugar en cada tubo. Observe y describa: . . Experimento N02: Accin de una enzima. En dos tubos limpios vierta 2ml de H2O2, coloque en uno de los tubos un pedacito de hgado del tamao aproximado de dos granos de arroz juntos; y en el otro, un pedacito de papa del mismo tamao; los resultados son comparables a los de la prueba anterior? Indique la velocidad de la reaccin, de acuerdo a la clave que aparece en la primera parte del procedimiento. Observe y describa: . Experimento N 03: Reusando la enzima.

Con la pipeta saque los dos ml del lquido al que le agrego hgado y vierta un ml en cada uno de los tubos de prueba limpio. Corte el pedacito de hgado en partes iguales y luego coloque una parte en cada tubo. En uno de los tubos aada un pedacito de hgado fresco y en el otro un ml de H2O2 nuevo. Anote sus observaciones. Observe y describa:. .

Experimento N04: Efecto del tamao de las partculas. Coloque un pedacito de hgado y otro de papa en dos tubos de prueba. Eche un poco de arena en cada uno y agite la mezcla cuidadosamente con la bagueta para moler el hgado. Aada dos ml de H2O2 a cada tubo. Los resultados son comparables con lo que usted obtuvo usando un trocito de hgado y para enteros. Determine y anote la velocidad de la reaccin (ver experimento N 02) Observe y describa: . .

EXPERIMENTO N05: Efecto de la temperatura. Evitando rozar las paredes del tubo de prueba, coloque una pequea cantidad de hgado triturado y ponga el tubo dentro de la vasija con agua hirviendo dentro de los 5 primeros minutos. Transcurrido este tiempo, aada un ml de H2O2. Observe y anote los resultados. Tome dos tubos de prueba y vierta un ml de H2O2 a cada uno. Coloque uno de los tubos en bao Mara (37C) y el otro lado en hielo. Saque ambos tubos y coloque en cada uno de ellos un pedacito de hgado. Compare la velocidad de reaccin Observe y describa: . .

Experimento N06: EFECTO DE PH. En cada uno de los tres tubos de de prueba bien limpios, coloque un pedacito de hgado plenamente t4rituradpo, agregue a uno de ellos, un ml de H2O2 destilada. El pH del otro, 3 ml de Na(OH) y al otro 3 ml de HCl a 0.1M.Vierta a cada tubo de H2O2 y observe los resultados. Observe y describa: . .

EXPERIMENTO01
SUSTANCIA H2O2 1.1 2ml 1.2 2ml

EXPERIMENTO2
2.1 2ml 2.2 2ml

EXPERIMENTO 3
3.1 3.2

EXPERIMENTO 4
4.1 4.2

EXPERIMENTO 5
0C 37C 100C

EXPERIMENTO 6
HCl ml neutro ml NaOH ml

Arena H2O2 Trocitos de hgado Trocitos de papa Trocitos de Hgado H2O2 Hgado triturado con arena Papa triturada con arena Hgado usado H2O Destilada NaOH HCl Hgado fresco

0.5 gr 0.5 ml 2 trozos 2 trozos

2 gr 2 gr 1 ml 1 ml

2 gr

2 gr

2 gr

2 gr

2 gr

2 gr

1 ml 1 ml 1 ml 1 trozo

H2O2 Velocidad de reaccin

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

Universidad Nacional de Piura CUESTIONARIO

Facultad de Medicina Humana

Cul es el beneficio celular de la presencia de la catalasa en las clulas vivas? Debido a sus innegables, poderosas y demostradas propiedades antioxidantes, la catalasa es muy benfica para los procesos de los rganos y el cuerpo. Adems de fungir como sper antioxidantes, la catalasa tambin tiene la habilidad de usar el perxido de hidrgeno para oxidar toxinas incluyendo el metanol, etanol, cido frmico, formaldehido, y nitrito. Este tipo de actividad dual la convierte en una enzima celular crucial.

Para qu sirven las enzimas? Las enzimas son un tipo de proteinas que se encuentran en los organismos vivos y que se encargan de acelerar las reacciones qumicas hasta un millon de veces que cuando no esta. Son muy importantes para obtener productos nuevos en nuestro organismo.

Comparando los resultados obtenidos, cmo interpreta la diferencia de la actividad enzimtica en cada tubo; indique la razn de ello? Concluya de manera general

Cmo verificar que todos los tejidos vivos poseen catalasa?

Bueno como sabemos la catalasa es una enzima que degrada el perxido de hidrogeno en agua y oxigeno, por lo tanto tiene un poder antioxidante. Entonces como los tejidos vivos respiran el oxigeno del aire necesitan controlar la produccin de perxido de oxigeno en la celula, es ah donde actua la catalasa.

Informe de Laboratorio Pgina 8

Universidad Nacional de Piura Cules son los factores que afecta la velocidad

Facultad de Medicina Humana enzimtica?

Los factores que afectan la actividad enzimtica son la temperatura, la presin y el ph.

Explique el efecto de temperatura en la actividad enzimtica. La temperatura puede influir en la actividad enzimtica segn cual sea la cantidad. Por ejemplo cuando la enzima se expone a una temperatura baja tiende a disminuir su velocidad, cuando la enzima trabaja a temperatura ambiente la enzima trabaja de manera normal. Finalmente si la enzimas es expuesta a una muy alta temperatura termina por desnaturalizarla. Qu es un sistema enzimtico? Un sistema enzimtico esta compuesto por la enzima actuando en un determinado sustrato, ambos interacta y dan origen a la misma enzima, pero adems de ello produce determinados productos.

Qu son coenzimas, cofactor o grupo prosttico?

GRUPO PROSTETICO: Un grupo prosttico es el segundo tipo de coenzima y es el componente

COFACTOR: es un determinado ion que ayuda a la enzima COENZIMAS: es un compuesto orgnico que ayuda a la enzima en el proceso enzimtico

Informe de Laboratorio Pgina 9

Universidad Nacional de Piura

Facultad de Medicina Humana

Con referencia a la actividad enzimtica investigue bibliogrficamente. Qu significan los cambios de coloracin?

http://es.wikipedia.org/wiki/Grupo_prost%C3%A9tico http://www.globalhealingcenter.net/salud-natural/catalasa.html http://es.wikipedia.org/wiki/Enzima

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