"Ao de la Integracin Nacional y el Reconocimiento de Nuestra Diversidad"
UNIVERSIDAD NACIONAL "SAN LUIS GONZAGA DE ICA"
FACULTAD:
ODONTOLOGIA
CURSO :
BIOQUIMICA
TEMA
BIOQUMICA DE LOS CARBOHIDRATOS
DOCENTE
Dr. ALIAGA GUILLEN EUSEBIO
ALUMNO
RONCEROS SALAS CARLOS ENRIQUE
CICLO
III
ICA - PERU
DEDICATORIA
Dedico el presente trabajo a mis padres que me vieron nacer y que su enseanza y sus buenas costumbres han creado en mi sabidura haciendo que hoy tenga el conocimiento de lo que soy.
INTRODUCCION:
LOS CARBOHIDRATOS.
Entre los distintos componentes de los alimentos, despus del agua, los carbohidratos son las sustancias ms abundantes y ms ampliamente distribuidas en la naturaleza; siendo la celulosa la biomolcula que se encuentra en mayor cantidad en la biosfera, y el almidn, la fuente energtica alimentaria ms empleada en el mundo. En todos los seres vivos se encuentran presentes los carbohidratos ya quela ribosa y la desoxirribosa son parte de su material gentico. De la misma forma, en las frutas y hortalizas los carbohidratos cumplen funciones estructurales y energticas, constituyendo algunos la estructura rgida o mecnica de los tejidos vegetales; en tanto que en las semillas, races y tubrculos funcionan bsicamente como reservas energticas. Por otro lado, en algunos animales estos compuestos son parte de sus reservas energticas (glucgeno) o constituyen un componente esencial de su estructura externa (quitina).Adems de ser componentes naturales de muchos alimentos, la industria alimentaria emplea los carbohidratos en funcin de sus propiedades funcionales, usndolos como ingredientes para mejorar la aceptabilidad y vida til de diversos alimentos. Desde el punto de vista qumico, los carbohidratos pueden definirse como polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas y sus derivados. Segn la anterior definicin, la denominacin de carbohidrato agrupa a una gran cantidad de compuestos. En la naturaleza se encuentran carbohidratos de diferente nmero de carbonos y distintos grupos funcionales o sustituyentes.
Las molculas de carbohidrato pueden incluir desde un solo monosacrido hasta varios miles de estos. Debido la diversidad de carbohidratos sus orgenes y la gran variabilidad en su composicin qumica, han surgido una variedad enorme de mtodos de anlisis de carbohidratos; ya sean dichos mtodos: fsicos, qumicos o bioqumicos. Entre los mtodos qumicos estn los basados en reacciones que dan origen a compuestos coloreados, tales como las que se dan despus de tratar los monosacridos con cido mineral fuerte y hacer reaccionar el furfural o hidroxifurfural formado, con compuestos orgnicostales como fenoles, aminas aromticas, urea y antrona. De la misma forma, tambin se hace uso de su capacidad reductora, hacindolos reaccionar con sales de metales como el cobre, hierro, yodo, plata y cerio. Por ltimo, tambin es posible su anlisis basndose en la capacidad deformar complejos coloreados con el yodo, tal como sucede con el almidn.
FUNCIONES DE LOS CARBOHIDRATOS.
1. Funcin energtica. Los carbohidratos se acumulan en el organismo en forma de glucgeno, pero los depsitos de glucgeno son pequeos (500gr) por lo que el exceso ha de ser oxidado o convertido en grasa y se deposita en el tejido adiposo con un alto costo energtico. El sistema nervioso y las clulas sanguneas utilizan la glucosa como fuente casi exclusiva de energa.
2. Funcin de almacenamiento. Cuando la glucosa no se usa inmediatamente se almacena en forma de glucgeno. ste se sintetiza principalmente cuando la cantidad de glucosa es mayor a la cantidad requerida para producir energa. Debido a que la capacidad de almacenamiento es muy pequea se almacena en sitos diferentes como el hgado y los msculos. 3. El glucgeno heptico regula la concentracin de glucosa en la sangre y alimenta al cerebro de forma constante. El glucgeno muscular abastece las necesidades del musculo para llevar a cabo el trabajo derivado del desarrollo de la actividad deportiva.
4. Funcin estructural. La celulosa es un polmero de la glucosa que se encuentra en las plantas y la madera lo que les concede su rigidez entre otras cosas.
5. Son esenciales para la comunicacin entre clulas. Ayudan a adherirse una clula con otra y con el material que las rodea.
CARBOHIDRATOS EN LA NATURALEZA.
Los carbohidratos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, particularmente en el reino vegetal. La lactosa es el carbohidrato principal en la dieta de la mayora de los lactantes, sobre todo en los primeros 6 meses de vida. La miel de abejas, frutas y varios vegetales contienen otros disacridos. Sin embargo, la mayor parte de los carbohidratos en la dieta son almidones y dextrinas de cereales, races, tubrculos, leguminosas de grano, y sus productos. Los carbohidratos se presentan en forma de azcares, almidones y fibras, y son uno de los tres principales macronutrientes que aportan energa al cuerpo humano (los otros son la grasa y las protenas).
El almidn y los azcares aportan una fuente de energa de la que se puede disponer rpidamente para el rendimiento fsico. Las fibras alimenticias, que son un tipo de carbohidratos, ayudan a que los intestinos funcionen correctamente. La celulosa se encuentra en las plantas y forma parte de su sistema estructural. El almidn, que es otro polmero de la glucosa, se encuentra en vegetales como la papa. El glicgeno se encuentra en animales.
IMPORTANCIA BIOMDICA
La importancia biomdica de los carbohidratos consiste en que son parte de la alimentacin bsica. Los carbohidratos de la dieta son: almidn, sacarosa y lactosa. La cantidad de carbohidratos promedio que debe de ingerir un adulto es 320 gr por da. Participan en el metabolismo celular de manera directa o indirectamente. Fuente de energa aportan 4 Kcal por gramo de peso seco. Una pequea parte se almacena en el hgado y msculos como glucgeno (normalmente no ms del o,5% del peso del individuo) el resto se transforma en grasa y se acumula en el organismo como tejido adiposo. Si el aporte de carbohidratos es insufientes, se utilizan las protenas para fines energticos.
IMPORTANCIA INDUSTRIAL:
Su principal aportacin es en la industria alimentaria, donde los azucares como el almidn, la glucosa, la fibra diettica, etc. Ya que los azucares se encuentran en todos los alimentos en distintas cantidades pero presentes, dan sabor entre otras propiedades. Adems de que hay carbohidratos polisacridos de gran importancia econmica: Como el agar y el carragun relacionadas por sus propiedades gelidificante. El agar muy utilizado para medios de cultivos de bacterias y microorganismos en general. Mientras que
carragunse utiliza en la fabricacin de productos lcteos, cosmtica, en la industria textil, farmacia etc. La celulosa se utiliza para productos de papel. Mientras que el Nitrato de celulosa (nitrocelulosa) para: pelculas de cine, cemento, plvora de algodn, celuloide y plsticos similares y el Almidn y pectina (agente cuajante): preparacin de alimentos para el hombre y el ganado; la goma arbiga se usa en medicamentos demulcentes y tambin se utilizan en Agares (agente espesador en los alimentos y medio para el cultivo bacteriano; preparacion de adhesivos y emulsiones); Sulfato de heparina (anticuagulante de la sangre.)
CLASIFICACIN DE CARBOHIDRATOS.
Simples: monosacridos (glucosa o fructuosa), disacridos (lactosa, maltosa, sacarosa, etc.), oligosacridos (polmeros de hasta 20 unidades de monosacridos). Complejos: Polisacridos (ms de 20 monosacridos simples unidos), los que tienen funcin de reserva (almidn, glucgeno y dextranos) y los que tienen funcin estructural (celulosa y xilanos). OTRA CLASIFICACION: Es la de monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Monosacridos: Estn formados por una sola molcula (como la glucosa); al ser hidrolizados no liberan molculas ms simples; ejemplos de este grupo son la ya mencionada glucosa, la galactosa, la ribosa y la fructosa, entre otros. Los monosacridos pueden a su vez ser subclasificados de acuerdo a diferentes criterios, por ejemplo: De acuerdo a la funcin principal: Si la funcin principal es un aldehdo, el monosacrido se clasifica como una aldosa. La glucosa es una tpica aldosa. Si la funcin principal es una cetona, el monosacrido se clasifica como una cetosa. La fructosa es una cetosa, ya que estructuralmente es una cetona polihidroxilada.
De acuerdo al nmero de carbonos: Los monosacridos pueden clasificarse en triosas, tetrosas, pentosas, hexosas, heptosas u octosas de acuerdo al nmero de carbono que tiene la molcula.
Clasificacin de monosacridos basado en el nmero de carbonos
Los monosacridos o azcares simples o carboxilos son los glcidos ms sencillos, que no se hidrolizan(hidro agua- lizan rompimiento ), es decir, que no se descomponen para dar otros compuestos, conteniendo de tres a seis tomos de carbono. Su frmula emprica es (CH2O)n donde n 3. Se nombran haciendo referencia al nmero de carbonos (3-7), terminado en el sufijo -osa. La cadena carbonada de los monosacridos no est ramificada y todos los tomos de carbono menos uno contienen un grupo alcohol (-OH). El tomo de carbono restante tiene unido un grupo carbonilo (C=O). Si este grupo carbonilo est en el extremo de la cadena se trata de un grupo aldehdo (-CHO) y el monosacrido recibe el nombre de aldosa. Si el carbono carbonlico est en cualquier otra posicin, se trata de una cetona (-CO-) y el monosacrido recibe el nombre de cetosa. Todos los monoscaridos son azcares reductores, ya que al menos tienen un -OH hemiacetlico libre, por lo que dan positvo a la reaccin con reactivo de Fehling, a la reaccin con reactivo de Tollens, a la Reaccin de Maillard y la Reaccin de Benedict. Otras formas de decir que son reductores es decir que presentan equilibrio con la forma abierta, presentan mutarotacin (cambio espontneo entre las dos formas cicladas (alfa) y (beta)), o decir que forma osazonas. As para las aldosas de 3 a 6 tomos de carbono tenemos: 3 carbonos: triosas, hay una: D-Gliceraldehdo. 4 carbonos: tetrosas, hay dos, segn la posicin del grupo carbonilo: DEritrosa y D-Treosa.
5 carbonos: pentosas, hay cuatro, segn la posicin del grupo carbonilo: DRibosa, D-Arabinosa, D-Xilosa, D-Lixosa. 6 carbonos: hexosas, hay ocho, segn la posicin del grupo carbonilo: DAlosa, D-Altrosa, D-Glucosa, D-Manosa, D-Gulosa, D-Idosa, D-Galactosa, DTalosa. Las cetosas de 3 a 7 tomos de carbono son: Triosas: hay una: Dihidroxiacetona. Tetrosas: hay una: D-Eritrulosa. Pentosas: hay dos, segn la posicin del grupo carbonilo: D-Ribulosa, DXilulosa. Hexosas: hay cuatro segn la posicin del grupo carbonilo: D-Sicosa, DFructosa, D-Sorbosa, D-Tagatosa. heptosa
De acuerdo al tipo de anmero De acuerdo a la posicin de hidroxilo anomerco, los monosacridos pueden clasificarse en alfa o beta. Muchas veces al describir a un monosacrido se combinan estas clasificaciones, por ejemplo, la glucosa se clasifica como una aldohexosa, que puede ser alfa o beta. Oligosacridos: Formados por 2-9 monmeros unidos entre si por enlaces glicosidicos, es decir, al ser hidrolizados los oligosacridos liberan de 2 a 9 monosacridos (algunos dicen hasta 20 monosacridos; yo prefiero decir unos pocos). De acuerdo al nmero de monosacridos constituyentes los oligosacridos se clasifican en disacridos, trisacridos, etc. El subgrupo ms importante de los oligosacridos son los disacridos, formados por apenas dos molculas de
monosacridos. Los disacridos que aparecen naturalmente son la lactosa, o azcar de la leche (formada por galactosa y glucosa) y la sacarosa, o azcar de mesa, formada por fructosa y glucosa. Otros importantes disacridos productos de la digestin del almidn son la maltosa y la isomaltosa, formados ambos por dos molculas de glucosa, (pero enlazadas de forma diferente). La celobiosa es un tercer disacrido formado tambin por molculas de glucosa, pero enlazadas de una forma tal que no es posible su digestin por animales, a menos que tengan microorganismos especficos en su sistema digestivo, como es el caso de los herbvoros. (La celobiosa se forma por digestin de la celulosa).
Los Polisacridos son carbohidratos formados por mas de 9 monosacridos (algunos dicen mas de 10, otros dicen mas de 20, yo dira muchos) unidos por enlaces glicosidicos. Cuando los polisacridos estn formados por el mismo tipo de monosacridos, se denominan homopolisacaridos. Amilosa (molcula componente del almidn) Las molculas que forman el almidn, el glucgeno, y la celulosa que estn formados por cientos de molculas de un solo tipo de monosacrido (la glucosa), unidos por enlaces glicosidicos, son ejemplos tpicos de homopolisacaridos. Si el polisacrido esta formado por diferentes tipos de monosacridos, entonces se consideran heteropolisacaridos.
PROPIEDADES QUIMICAS Y FISICAS DE LOS CARBOHIDRATOS: PROPIEDADES FISICAS DE LOS CARBOHIDRATOS
- Solubles en agua - Cristalinos - Mutorrotacin - Desva la luz polarizada - Poco solubles en etanol - Dulces - Dan calor - Siguen la formula Cn (H2O)n Dentro de las propiedades fisicoqumicas de los carbohidratos se tiene
que estos tienen un peso molecular bajo, de tal manera que son solubles en el agua y tienen un alto poder edulcorante, estas propiedades del glucgeno permiten que los carbohidratos puedan ser metabolizado ms rpidamente. Dentro de las propiedades fsicas de los carbohidratos vemos que se ubican en forma slida, son de color blanco, cristalino, muy soluble en agua e insoluble en disolventes no polares, son de sabor dulce.
PROPIEDADES QUIMICAS DE LOS CARBOHIDRATOS
Azucares reductores Los Azcares reductores son aquellos azcares que poseen su grupo carbonilo (grupo funcional) intacto, y que a travs del mismo pueden reaccionar con otras molculas. Los azcares reductores provocan la alteracin de las protenas mediante la reaccin de glucosilacin no enzimtica tambin denominada reaccin de Maillardo glicacin. Esta reaccin se produce en varias etapas: las iniciales son reversibles y se completan en tiempos relativamente cortos, mientras que las posteriores transcurren ms lentamente y son irreversibles. Se postula que tanto las etapas iniciales como las finales de la glucosilacin estn implicadas en los procesos de envejecimiento celular y en el desarrollo de las complicaciones crnicas de la diabetes.
Formacin de acetales y hemiacetales Si los grupos carbonilos e hidroxilo estn en la misma molcula, puede suceder una adicin nucleoflica intramolecular, lo que conduce a una formacin de un hemiacetal cclico.
Ciclacin de carbohidratos
Los hemiacetales cclicos de 5 y 6 miembros estn relativamente libres de tensin y son particularmente estables y, por lo tanto existen muchos carbohidratos en un equilibrio entre las formas de cadena abierta y las cclicas. Un anillo de seis trminos se conoce como una piranosa, en analoga con el pirano, el compuesto ms sencillo que contiene tal anillo. De modo anlogo, los azucares con anillos de cinco trminos se designan como furanosas, en analoga con el furano. Cuando un monosacrido de cadena abierta se cicla, se genera un nuevo centro quiral en el anterior carbono carbonlico y se producen dos diasteroismeros llamados anmeros. El tomo de carbono hemiacetalico es referido como el centro anomrico.
Mutarrotacin La mutarrotaci n es un fenmeno de isomerizaci n que ocurre en monosacri dos referido a la rotacin que sufre el carbono anomrico al pasar de un confrmero al otro. Puede pasar de un enlace de carbono alfa a uno beta, o viceversa. En la serie "D", por convencin si la disposicin del OH es hacia arriba lo llamamos beta, si es hacia abajo lo denominamos alfa, ocurriendo lo contrario en la serie "L", donde el OH hacia arriba indica el confrmero alfa, y hacia abajo, el beta. Para pasar de un estado al otro debe pasar primero por el estado de cadena abierta.
Por tratarse de una rotacin de sustituyentes que sufre el carbono anomrico al pasar de un confrmero al otro, se concluye que el compuesto cambia su actividad ptica. El compuesto el original y resultante son ismeros pticos entre s.
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
La clula necesita un aporte constante de energa para realizar diversas funciones como:
La realizacin de un trabajo mecnico. El transporte activo de iones y molculas. La sntesis de molculas. A travs de un conjunto procesos enzimticos bien definidos, la clula extrae dicha energa y la hace disponible para que se realicen una gran variedad de procesos celulares, entre los que destacan los encaminados a la sntesis de (anabolismo) y degradacin (catabolsmo) de biomolculas, a la suma de ambos procesos se le identifica como Metabolismo. La clula ha tiene para la glucosa, los cidos grasos y los aminocidos un proceso metablico nico acompaado cada uno de ellos con un mecanismo de regulacin. Las vas enzimticas relacionadas con el metabolismo de la glucosa son:
oxidacin de la glucosa. formacin de lactato. metabolismo del glucgeno, gluconeognesis. va de las pentosas fosfato.
OXIDACIN DE LA GLUCOSA La oxidacin de la glucosa involucra un conjunto de reacciones enzimticos, ligadas una de la otra y vigiladas por un control metablico para hacer disponible para clula, la energa qumica contenida en la glucosa. La reaccin global es: Glucosa CO2 + H2O + ATP La formacin de CO2 + H2O + ATP a partir de la glucosa, se lleva a cabo, porque existe una disponibilidad de O2 y que corresponde a la necesidad de energa, se inducen los procesos enzimticos claramente definidos por sustratos y productos: ? gluclisis, transformacin del piruvato en acetil CoA, ciclo de Krebs. fosforilacin oxidativa. GLUCOLISIS.
La gluclisis se realiza en el citosol y comprende la conversin de glucosa en piruvato, cuya reaccin global es: Glucosa + 2 Pi + 2 ADP + 2 NAD 2 piruvato + 2 ATP + 2 NADH + 2 + + 2 H2O. En este proceso van participan 10 enzimas diferentes que catalizan diez reacciones secunciales, las cuales se dividen en tres etapas: formacin de fructosa 1,6-bisfosfato a partir de glucosa.
formacin de triosas fosfato (gliceraldehido 3-fosfato y dihdrixiacetona fosfato) a partir de fructosa 1,6-bisfosfato. formacin de piruvato a partir de gliceraldheido 3-fosfato.
EL CICLO DE KREBS El ciclo de Krebs (tambin llamado ciclo del cido ctrico o ciclo de los cidos tricarboxlicos) es una ruta metablica, es decir, una sucesin de reacciones qumicas, que forma parte de la respiracin celular en todas las clulas aerbicas. En clulas eucariotas se realiza en la mitocondria. En las procariotas, el ciclo de Krebs se realiza en el citoplasma, especficamente en el citosol. En organismos aerbicos, el ciclo de Krebs es parte de la va catablica que realiza la oxidacin de glcidos, cidos grasos y aminocidos hasta producir CO2, liberando energa en forma utilizable (poder reductor y GTP). El metabolismo oxidativo de glcidos, grasas y protenas frecuentemente se divide en tres etapas, de las cuales, el ciclo de Krebs supone la segunda. En la primera etapa, los carbonos de estas macromolculas dan lugar a molculas de acetil-CoA de dos carbonos, e incluye las vas catablicas de aminocidos (p. ej. desaminacin oxidativa), la beta oxidacin de cidos grasos y la gluclisis. La tercera etapa es la fosforilacin oxidativa, en la cual el poder reductor (NADH y FADH2) generado se emplea para la sntesis de ATP segn la teora del acomplamiento quimiosmtico. El ciclo de Krebs tambin proporciona precursores para muchas biomolculas, como ciertos aminocidos. Por ello se considera una va anfiblica, es decir, catablica y anablica al mismo tiempo.
FORMACIN DE LACTATO. Cuando la cantidad de oxgeno disponible para la clula es limitada, como ocurre en el msculo durante la actividad intensa, el NADH generado durante la gluclisis no puede reoxidarse a tasas comparables en las mitocondrias y con la finalidad de mantener la homeostasis, el piruvato es entonces reducido por el NADH para formar lactato, reaccin catalizada por la lactato deshidrogenasa esta desviacin metablica del piruvato mantiene a la gluclisis operativa bajo condiciones anaerbicas. La reaccin global de la conversin de glucosa a lactato es: Glucosa + 2Pi + 2ADP 2 lactato + 2 ATP + 2 H2O METABOLISMO DEL GLUCGENO El glucgeno es un polisacrido donde se almacenan glucosas, es una estructura de un elevado peso molecular, altamente ramificado. La degradacin de estas reservas de glucosa o movilizacin del glucgeno tiene como finalidad suministrar glucosa 6-fosfato, la enzima clave en la ruptura del glucgeno es la glucgeno fosforilasa quien escinde mediante la adicin de ortofosfato (Pi) los enlaces de tipo a (1-4) para producir glucosa 1fosfato. La ruptura de un enlace por la adicin de un ortofosfato se reconoce como fosforolisis. Glucgeno + Pi glucosa 1-fosfato + glucogeno (n residuos) (n -1 residuos) La sntesis de glucgeno la realiza la clula de una manera totalmente diferente almecanismo de su degradacin: Sntesis: Glucgeno + UDP-glucosa glucgeno n +1 + UDP Degradacin: Glucgenon+1 + Pi glucgeno n + glucosa 1-fosfato GLUCONEOGNESIS
La glucognesis es la ruta anablica por la que tiene lugar la sntesis de glucgeno (tambin llamado glicgeno) a partir de un precursor ms simple, la glucosa-6-fosfato. Se lleva a cabo principalmente en el hgado, y en menor medida en el msculo, es activado por insulina en respuesta a los altos niveles de glucosa, que pueden ser (por ejemplo) posteriores a la ingesta de alimentos con carbohidratos. Se forma por la incorporacin repetida de unidades de glucosa, la que llega en forma de UDP-Glucosa a un partidor de glucgeno preexistente que consiste en la protena glucogenina, formada por 2 cadenas, que al autoglicosilarse puede unir cada una de sus cadenas a un octmero de glucosas. Para que la glucosa-6-fosfato pueda unirse a la UDP requiere de la participacin de dos enzimas, la primera, fosfoglucomutasa, modifica la posicin del fosfato a glucosa-1-fosfato. La glucosa-1-fosfato es el precursor para la sntesis de glucgeno pero tambin es el producto de su degradacin. La sntesis de glucgeno requiere de aporte energtico. El dador de glucosa para la snteis de glucgeno es la UDP-glucosa donde el residuo glucosilo est activado para su transferencia, por su combinacin con un compuesto de alta energa como el UTP. REACCIONES PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS: Reaccin de Molisch: La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reaccin de Molisch, que a cierto punto es la reaccin universal para cualquier carbohidrato. Se basa en la accin hidrolizante y deshidratante del acido sulfrico sobre los hidratos de carbono en dicha reaccin el acido sulfrica cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos de la muestra y la deshidratacin afurfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch dando un producto coloreado.
Reaccin de Benedict: Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de carbohidratos es la reaccin de Benedict. Esta reaccin es especifica para azucares libres (C=O). Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componente cuando esta es formada. Sebasa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medio alcalino. Este Cu+ se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. La coloracin de pender de la concentracin de oxido de cobre y esta a su vez de la reduccin del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de la coloracin.
Reaccin de Seliwanoff: Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Las cetosas en el C2 tienen funcin cetona, que en presencia de un cido fuerte producen rpidamente derivados furfuricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina que esta contenido en el reactivo de Selwanoff. La sacarosa (glucosa + fructuosa) y la inulina (polisacrido de la fructuosa) dan positiva a la reaccin, ya que el HCl del reactivo provoca en caliente la hidrolisis del compuesto liberando fructuosa (reaccin positiva).
TECNICAS DE CUANTIFICACION DE CARBOHIDRATOS. Mtodos no enzimticos Este es probablemente el procedimiento ms comn para la estimacin del contenido total de azcares reductores y glucsidos. Una muestra de 0.01 0.25 m mol de azcar en 0.3 mL se mezcla con 0.01mL de fenol 10%. Se agrega 1.0mL de H2SO4 concentrado de grado analtico a la mezcla azcar
fenol. Despus de mezclar, se incuba por 30 minutos a temperatura ambiente. Luego se mide la absorbancia a 490nm. Algunas sustancias tales como cationes de metales pesados, compuestos azo- y tio- podran interferir. Fenol H2SO4 Antrona - H2SO4 El medio cido hidroliza el enlace glicosdico de la sacarosa y los monosacridos resultantes reaccionan con la antrona produciendo un color verde azulado. Para el anlisis de sacarosa, una muestra de 100m L (0.05-0.4m mol de sacarosa) se mezcla con 100m L de NaOH 30%, y se calienta por 10 minutos a 100C. Se deja enfriar a temperatura ambiente y se agregan 3.0mL del reactivo de antrona (0.15% en 80% H2SO4). Despus de 15 minutos a 40C, se mide la absorbancia a 620nm.
Antrona
Mtodos enzimticos Desde un punto de vista analtico, la capacidad de los enzimas para catalizar reacciones especficas con un alto grado de eficacia, ha dado lugar a diferentes aplicaciones en diversos campos del anlisis como anlisis clnicos, anlisis de productos alimentarios, anlisis de preparados farmacuticos etc. El anlisis enzimtico o anlisis mediante el empleo de enzimas puede ser utilizado en: 1. La determinacin de los sustratos de la reaccin enzimtica, siendo posible determinar especficamente cada una de las sustancias de una mezcla sin necesidad de separar. Para la cuantificacin de sustratos se pueden utilizar dos mtodos generales:
a. Mtodos de cambio total, de equilibrio o de punto final. En este tipo de mtodos (los ms utilizados en la prctica) se permite que la reaccin enzimtica se complete o llegue al equilibrio y se mide la variacin producida en la concentracin de un producto de reaccin o de un reactivo presente inicialmente en exceso. b. Mtodos cinticos, en los que se utilizan medidas de la velocidad inicial de la reaccin enzimtica para deducir la concentracin inicial de sustrato. Los procedimientos de medida son idnticos a los utilizados para reacciones catalticas en general. 2. Determinacin de los mismos enzimas mediante el empleo de mtodos cinticos en los que se mide la velocidad de desaparicin del sustrato o de generacin del producto, relacionada con la concentracin de enzima en disolucin. La enzima mas utilizada en este mtodo es la glucosa oxidasa: Es una oxidorreductasa que cataliza la oxidacin de la glucosa para formar perxido de hidrgeno y D-glucono-d-lactona. En las clulas contribuye a degradar los azcares hacia sus metabolitos.
La glucosa oxidasa es ampliamente utilizada para la determinacin y cuantificacin de glucosa libre en los fluidos biolgicos, tales como sangre y orina, en materia prima vegetal y en la industria de los alimentos. Tiene adems muchas aplicaciones en biotecnologa, y se utiliza para la fabricacin de biosensores sensibles a glucosa. Mtodos espectrofotomtricos La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas y biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe radiacin de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo. La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas. La espectrofotometra ultravioleta-visible usa haces de radiacin del espectro electromagntico, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la regin ultravioleta y visible del espectro. Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce tambin como rango de uv cercano, la espectrofotometra visible solamente usa el rango del campo electromagntico de la luz visible, de 400 a 800 nm. Adems, no est de ms mencionar el hecho de que la absorcin y trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la concentracin como de la distancia recorrida.
CONCLUSIONES
Las pruebas para carbohidratos son muy especficas y cada una cumple el cometido de detectar una caracterstica: la prueba de Molish, la cual nos proporciona la existencia de estas biomoleculas con sus colores prpuras. El ataque con acido sulfurico arranca una molcula de agua y transforma el monosacrido en un derivado furfurilico, adems en la unin el alfa-naftol es donde realmente se da el cambio de la coloracin. El cambio de coloracin en la prueba de fehling a rojizo demuestra la presencia positiva del monosacrido por formar un precipitado de Cu2O En la prueba de tollens la adhesin del espejo de plata al tubo de ensayo demuestra positivo para un monosacrido. la prueba de Seliwanoff con sus tonos rojizos nos proporcionan informacin acerca de la existencia cetohexosas y para finalizar la prueba del Yodo, la cual proporciona informacin acerca de la existencia de almidn a travs de sus coloraciones azules
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