Universidad Galileo de Guatemala Facultad de Ciencias de la Salud Licenciatura en Qumica Biolgica
ngela Andr Bentzen Lic. Mara Teresa Meneses
Carnet : 13000240 19 de noviembre de 2013 INFORME DE LABORATORIO No. 7
COCOS GRAM POSITIVO: prueba de CAMP, TAXO A y TAXO P INTRODUCCIN Los cocos Gram positivo son redondeados de color violeta, se pueden clasificar en dos grupos, en Staphylococcus si estn agrupados en racimos y Streptococcus si se encuentran en cadenas. Tambin pueden ser clasificados por sus requerimientos de oxgeno y por su patogenicidad. Los cocos Gram positivo patgenos se aslan en agar enriquecido y suplementado con sangre de carnero. Algunas especies tienen capacidad hemoltica, la cual puede ser parcial (Alfa hemlisis) la cual se presenta como un halo color verdoso, o total (Beta hemlisis) la cual se presenta como un halo color amarillo. Los estreptococos se pueden clasificar en 13 subgrupos, segn sus antgenos, esta clasificacin es conocida como de Lancefield, los grupos ms importantes son: A: Streptococcus pyogenes: forman colonias de 1-2 mm, sin color, transparentes, beta hemoltico y de alta virulencia. Estos microorganismos son sensibles a la Bacitracina. B: Streptococcus agalactiae: prueba de CAMP positiva en una hemolisis marcada en forma de punta de flecha en el punto de unin de su crecimiento con Staphylococcus aureus. D: Streptococcus fecalis: es el nico que crece en EMB. Streptococcus pneumoniae desarrolla colonias de 1-3 mm, sin pigmento, alfa hemolticos en condiciones aerobias y beta hemolticos en anaerobiosis. Las colonias virulentas dan colonias mucoides debido a su cpsula, este microorganismo es sensible a la Optoquina.
Uno de los principales Cocos Gram positivo que estudiaremos en esta prctica es Staphylococcus aureus, el cual es el nico coagulasa positivo, forma grandes colonias cremosas, es Beta hemoltico y puede presentar una coloracin amarillenta si se incuba a temperatura ambiente, es resiste a la accin de calor, luz, desecacin, agentes qumicos y puede sobrevivir semanas o meses en el ambiente, es altamente resistente a las concentraciones altas de sal, puede crecer en Manitol Sal desarrollando colonias amarillas de 3mm de dimetro y vira el medio a color amarillo brillante, este microorganismo es resistente a la penicilina. MATERIALES Y REACTIVOS Mechero Asas en punta y en argolla Taxo A = Bacitracina 0.04 U Taxo P = Optoquina 5g/ml
Agar sangre Cultivo puro de Streptococcus agalactiae Cultivo puro de Staphylococcus aureus Cultivo puro de Streptococcus pneumoniae
OBJETIVOS Aprender la tcnica correcta de inoculacin para la realizacin de la prueba de CAMP Entender el fundamento de la prueba de Taxo A y Taxo P y lograr identificar el halo que ambas pruebas deben formar al inhibir el crecimiento.
RESULTADOS
Muestra
Resultados Taxo A positivo, se observa halo alrededor del disco por lo tanto S. agalactiae es del grupo A. Taxo P negativo, ya que no hubo crecimiento de halo >15 mm por lo que no hubo inhibicin de la bacteria. CAMP positivo, se observa una zona aumentada en la hemolisis en la zona en la que se une el crecimiento de ambas bacterias.
Taxo A
S. agalactiae
Taxo P
S. pneumoniae
CAMP Staphylococcus aureus y
Streptococcus agalactiae
DISCUSIN Los cocos Gram positivos pueden presentar tres tipos de hemlisis, la Alfa hemlisis, la cual es parcial y dejando un halo de color verdoso, la Beta hemlisis, la cual es completa y presenta un halo de color amarillo y la Gama hemlisis que no presenta un halo del todo claro. Para identificar los estreptococos se realizan distintas pruebas, entre ellas pruebas que inhiben el crecimiento bacteriano y detiene la hemlisis, entre estas pruebas estn: Prueba de la Bacitracina: Taxo A: para identificar estrepetococos del grupo A, la prueba es positiva si se haya un halo alrededor del disco, en esta prctica el halo observado es muy tenue, probablemente debido al mtodo de sembrado o condiciones ambientales inadecuadas para el crecimiento bacteriano. Prueba de la Optoquina: Taxo P: en esta prctica la prueba fue negativa ya que no hubo un halo mayor o igual a 15 mm por lo tanto no hubo una verdadera inhibicin de la bacteria. Prueba de CAMP: se estri sobre la lnea media S. aureus, perpendicular a est se estran cuatro lneas de S. agalactiae, estas cuatro lneas se realizan sin que se lleguen a unir con la lnea central, la prueba es positiva si al unirse ambos crecimientos de hemlisis la unin se ve en forma de flecha. En la prctica realmente no se observa esta forma esto puede ser debido al gran inoculo central que se realiz o por las condiciones ambientales en las que se encontraba el cultivo.
CONCLUSIONES Es necesario que los discos de Bacitracina contengan estrictamente 0.04 U, si no la prueba puede dar falsos positivos o falsos negativos La sepa de Streptococcus agalctiae utilizada en la prctica pertenece al 5% de cepas sensible a la Bacitracina. En la prueba de sensibilidad a la Bacitracina o Taxo A la presencia de un halo es considerado ya como positivo. En la prueba de sensibilidad a la Optoquina o Taxo P la presencia de un halo <15mm es indicativo de una prueba negativa, para ser positiva debe ser igual a 15 o mayor. La prueba de Taxo P es utilizada para diferencias S. pneumoniae es utilizada para diferenciar este microorganismo de otros estreptococos alfa hemolticos.
RECOMENDACIONES Observar los cultivos cerca del mechero para que no sufran contaminacin. Manipular los cultivos y muestras con las normas de bioseguridad pertinentes para no sufrir de una infeccin. Realizar un estriado de gran tamao para realizar la prueba de Taxo A y Taxo P para lograr observar la inhibicin de crecimiento. Al realizar el inoculo central de la prueba de CAMP no remarcarlo, es suficiente con una lnea firme.
FUENTES CONSULTADAS Michael T.Madigan, etal. Brock. Biologa de los Microorganismos, Dcima edicin, Pearson Educacin, S.A., Madrid, 2004 Practica de Bacteriologia Laboratorio No. 7, Cocos Gram positivo, Prueba de CAMP, Taxo A y Taxo P, Maria Teresa Meneses, QB.MSc. https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/identificacionbacteriana/capacidad-hemolitica
http://intimicro.blogspot.com/p/virus.html
