NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5135
2002-12-13

LECHE. DETERMINACIN DEL PUNTO DE CONGELACIN. MTODO DEL CRIOSCOPIO TERMISTOR (MTODO DE REFERENCIA)

E:

MILK. DETERMINATION OF FREEZING POINT. THERMISTOR CRYOSCOPE METHOD (REFERENCE METHOD)

CORRESPONDENCIA:

Esta norma es idntica (IDT) a la ISO 5764:2002 - IDF 106:2002 leche; punto de congelacin.

DESCRIPTORES:

I.C.S.: 67.100.10
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC) Apartado 14237 Bogot, D.C. Tel. 6078888 Fax 2221435

Prohibida su reproduccin

Editada 2003-01-22

PRLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo nacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo caracterizado por la participacin del pblico en general. La NTC 5135 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2002-12-13. Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a travs de su participacin en el Comit Tcnico 311201 Leche y productos lcteos.

ALGARRA S.A. ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A. CARULLA VIVERO S.A. CHRISTIAN HANSEN CENTRO AGROLECHERO CONSEJO NACIONAL LCTEO CONSEJO NACIONAL DE LA LECHE Y PREVENCIN DE LA MASTITIS COOPERATIVA DE LECHEROS DE ANTIOQUIA - COLANTA

INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO - ICA INDEPENDIENTE - HUGO PARDO LA ALQUERA S.A. LARKIN LTDA MEALS DE COLOMBIA S.A . NESTL DE COLOMBIA S.A. PARMALAT COLOMBIA LTDA PROCESADORA DE LECHES S.A., PROLECHE PLASTILENE S.A.

Adems de las anteriores, en Consulta Pblica el Proyecto se puso a consideracin de las siguientes empresas:

ASOCIACIN NACIONAL DE INDUSTRIALES ASOCIACIN NACIONAL DE LECHEROS - ANALAC COOPERATIVA DE LECHEROS DE LA COSTA - COOLECHERA FRESKALECHE S.A. FRIESLAND COLOMBIA COLPURACE

INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS INVIMA JAIRO PASACHOA INGENIERO DE ALIMENTOS LA CAMPIA S.A. MINISTERIO DE SALUD

SECRETARIA DISTRITAL DE SALUD UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO

ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales. DIRECCIN DE NORMALIZACIN

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LECHE. DETERMINACIN DEL PUNTO DE CONGELACIN. MTODO DEL CRIOSCOPIO TERMISTOR. (MTODO DE REFERENCIA)

0.

INTRODUCCIN

0.1 Esta norma es una adopcin idntica por traduccin a la cual se le hicieron cambios editoriales y se le adicion el Anexo informativo D. 0.2 El mtodo descrito en esta norma emplea un aparato, el crioscopio termistor, denominado usualmente "criscopo", en el cual un instrumento controlado termostticamente se enfra y se usa un probador termistor para la medicin del punto de congelacin. Este mtodo de referencia requiere el uso de instrumentos temporizados que buscan "mesetas". Para mediciones de rutina, se pueden usar otros mtodos de crioscopio termistor, por ejemplo, se pueden usar procedimientos de tiempo fijo. Las guas para la aplicacin de otros procedimientos se encuentran en el Anexo B. 1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN

1.1 Esta norma establece el mtodo crioscpico de referencia para la determinacin del punto de congelacin en leche cruda, pasteurizada, tratada por UHT, o esterilizada, ya sean enteras, parcialmente descremadas y descremadas. El punto de congelacin se puede usar para estimar la proporcin de agua extraa agregada a la leche. El clculo de la cantidad de esta agua es complicado debido a la variacin diaria, estacional, etc., y no est dentro del alcance de esta norma. Los resultados obtenidos desde muestras con una acidez titulable que exceda de 20 ml de solucin de hidrxido de sodio (de concentracin 0,1 mol/L) por 10 g de slidos no grasos no ser representativa de la leche original.
NOTA La esterilizacin y la pasteurizacin al vaco pueden afectar el punto de congelacin de la leche.

2.

REFERENCIAS NORMATIVAS

Las siguientes normas contienen disposiciones que, mediante su referencia en esta norma, constituyen parte de sta. Para referencias fechadas, se aplica nicamente la edicin citada. Par referencias no fechadas, se aplica la ltima edicin del documento referenciado (incluida 1

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cualquier correccin). Sin embargo, se invita a las partes que realizan acuerdos basados en esta norma, a investigar la posibilidad de aplicar la ltima versin de las normas mencionadas. NTC 4978:2001, Leche y productos lcteos. Mtodo de determinacin de la acidez. ISO 707, Milk and Milk Products. Guidance on Sampling. (NTC 666:1996) ISO 1042, Laboratory glassware. One-Mark Volumetric Flasks (NTC 2492:1999) ISO 3696, Water for Analytical Laboratory Use - Specification and Test Methods ISO 5725-1, Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and Results. Part 1: General Principles and Definitions. (NTC 3529-1). ISO 5725-2, Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and Results. Part 2. Basic Method for the Determination of Repeatability and Reproducibility of Standard Measurement Method. (NTC 3529-2). 3. TRMINOS Y DEFINICIONES

Para los propsitos de esta norma, se aplican los siguientes trminos y definiciones. 3.1 punto de congelacin de la leche valor obtenido usando el mtodo especificado en esta norma.
NOTA El punto de congelacin se expresa en miligrados Celsius (mC).

4.

PRINCIPIO

Sobreenfriar una muestra para ensayo a una temperatura apropiada e inducir la cristalizacin, por medios suficientes para causar una liberacin instantnea de calor acompaada de calentamiento de la muestra hasta una meseta de temperatura. ste punto se alcanza cuando el aumento de temperatura no excede de 0,5 mC en los ltimos 20 s. La temperatura as obtenida corresponde al punto de congelacin de la muestra de leche. El instrumento de medicin se calibra ajustndolo para dar lecturas con dos soluciones normalizadas de cloruro de sodio, usando el mismo procedimiento que se usa para las muestras de leche. 5. REACTIVOS

Se usan slo reactivos de calidad analtica reconocida, a menos que se especifique de otra manera. 5.1 AGUA

Que cumpla con el Grado 2 de acuerdo con la norma ISO 3696 o de calidad equivalente, destilada en un aparato de vidrio borosilicato. Hervir el agua y dejarla enfriar hasta 20 C 2 C, justo antes de su uso. 2

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5.2 CLORURO DE SODIO, NaCl

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Molido finamente, secado en un horno elctrico (vase el numeral 6.7), a 300 C 25 C durante 5 h, o secado alternativamente en una estufa (vase el numeral 6.8), a 130 C 2 C, durante por lo menos 24 h, dejndolo enfriar hasta temperatura ambiente en un desecador (vase el numeral 6.9). 5.3 SOLUCIN NORMALIZADA DE CLORURO DE SODIO

Pesar en un matraz (vase el numeral 6.5) con aproximacin al 0,1 mg, la cantidad apropiada (vase la Tabla 1) de cloruro de sodio seco (vase el numeral 5.2). Disolver en agua (vase el numeral 5.1) y transferirlo a un recipiente volumtrico aforado de 1 000 ml (vase el numeral 6.6). Diluir hasta la marca de 1 000 ml con agua (vase el numeral 5.1) a 20 C 2 C y se mezcla. Alternativa y preferiblemente, compensar la solucin normalizada de cloruro de sodio sobre una base de gramo por kilogramo (vase la Tabla 1, segunda columna) en peso de la cantidad requerida de cloruro de sodio seco preparado (vase el numeral 5.2) con aproximacin al 0,1 mg ms cercano y disolver ste en exactamente 1 kg de agua (vase el numeral 5.1). Almacenar la solucin normalizada a aproximadamente 5 C, en recipientes de polietileno bien tapados (vase le numeral 6.10) y de una capacidad no mayor que 250 ml. Antes de usar la solucin normalizada, invertirla y rotar suavemente el recipiente varias veces para mezclar su contenido completamente. En ningn momento se debe agitar fuertemente la solucin normalizada porque se puede incorporar aire. Vertir las muestras de solucin normalizada desde los recipientes y nunca se deben usar pipetas para este propsito. No se deben usar soluciones normalizadas de recipientes con un volumen menor de un cuarto de su contenido, o que tengan ms de dos meses de elaboracin, o que contengan mohos visibles.
Tabla 1. Punto de congelacin de las soluciones normalizadas de cloruro de sodio Solucin de NaCl a 20 C, en Solucin de NaCl, en g/kg de agua g/L de solucin 6,731 6,763 6,868 6,901 7,587 7,625 8,444 8,489 8,615 8,662 8,650 8,697 8,787 8,835 8,959 9,008 9,130 9,181 9,302 9,354 9,422 9,475 10,161 10,220 Punto de congelacin, en mC - 400,0 - 408,0 - 450,0 - 500,0 - 510,0 -512,0 - 520,0 -530,0 - 540,0 - 550,0 - 557,0 - 600,0

Para este mtodo de referencia, nicamente usar la solucin normalizada de cloruro de sodio sin preservar. Para los mtodos de rutina se pueden usar las soluciones normalizadas con agentes fungicidas o fungistticos. Para una gua vase el Anexo B. 6. APARATOS Y EQUIPOS

Aparatos y equipos usuales de laboratorio, en particular los siguientes:

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6.1 CRIOSCOPIO

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Consiste en un dispositivo de enfriamiento controlado termostticamente, una sonda termistor con un circuito asociado y un dispositivo de lectura, un agitador para las muestras y un dispositivo de cristalizacin. Vase la Figura 1. 6.1.1 Dispositivo de enfriamiento Se pueden usar diferentes tipos de dispositivos de enfriamiento termostatados. Los siguientes tipos se dan como ejemplos. De inmersin: con un bao de enfriamiento con una capacidad almacenamiento adecuada; De circulacin: con un flujo continua de lquido de enfriamiento alrededor de la muestra; De bloque de enfriamiento: un bloque de enfriamiento con una cantidad pequea de lquido de enfriamiento.

Despus de iniciar el congelamiento, permitir que la temperatura del lquido de enfriamiento alrededor del tubo de muestra sea constante a - 7,0 C 0,5 C.
NOTA Un lquido de enfriamiento adecuado es una solucin acuosa de 33 % (fraccin volumtrica) de propilenglicol.

6.1.2 Dispositivo de medicin, circuito asociado y dispositivo indicador de lectura El termistor debe ser del tipo sonda de vidrio, con un dimetro de 1,60 mm 0,4 mm y con una resistencia elctrica entre 3 Ohms y 30 kOhms a 0 C. El tipo y dimensiones del material del asta, incluyendo un posible relleno, no debe permitir una transferencia de calor en la muestra mayor de 2,5 x 10-3 J/s bajo las condiciones de operacin. Cuando la sonda est en la posicin de trabajo, la punta del termistor debe estar situada sobre el eje de la muestra y a distancias iguales desde las paredes internas y desde el fondo interior del tubo (vase la Figura 1). El termistor y el circuito asociado deben permitir al operador alcanzar una discriminacin de 1 mC o mejor, sobre un rango de 400 mC hasta 600 mC. La linearidad del circuito debe ser tal que no se introduzca un error mayor de 1 mC en cualquier punto dentro del rango de 400 mC hasta 600 mC cuando el instrumento es operado correctamente. El dispositivo indicador de lectura debe proveer una discriminacin de 1 mC o mejor, sobre un rango de al menos 0 m C hasta 1 000 mC. 6.1.3 Dispositivo de agitacin Usar un alambre o varilla de un metal inerte a la leche, para agitar la muestra para ensayo durante el enfriamiento. El alambre de agitacin debe ser ajustable en cuanto a amplitud y estar colocado verticalmente de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El alambre debe vibrar lateralmente con una amplitud de 2 mm a 3 mm para asegurar que la temperatura dentro de la muestra permanece uniforme durante el enfriamiento. Al momento de su operacin normal de agitacin, el alambre no debe golpear la sonda de vidrio o la pared del tubo. 4

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Dimensiones en milmetros 1. Mandril Clave 2. Tubo de la muestra 3. Alambre de agitacin 4. Bulbo del termistor 1

50,5 0,2

13,7 0,3

Figura 1. Detalles del crioscopio termistor

6.1.4 Dispositivo para iniciar la congelacin Puede ser cualquier dispositivo que, cuando opere, inicie instantneamente la congelacin de la muestra para ensayo cuando alcance -3,0 C. Se puede usar el alambre de agitacin (vase el numeral 6.1.3) para este propsito. Un mtodo es aumentar la amplitud de vibracin durante 1 s a 2 s, de modo tal que el agitador d contra la pared del tubo de muestra (vase el numeral 6.2). 6.2 TUBOS PARA LA MUESTRA

Los tubos para la muestra (vase la Figura 1) son de vidrio borosilicato, de 50,5 mm 0,2 mm de longitud; de 16,0 mm 0,2 mm de dimetro externo y de 13,7 mm 0,3 mm de dimetro interno. El espesor de pared, en todo el tubo, no debe variar en ms de 0,1 mm. Los tubos deben ser de forma uniforme tal que los puntos de congelacin se obtengan con volmenes iguales de la misma solucin. Se verifica la igualdad antes de usarlos. 6.3 FUENTE ELCTRICA

Capaz de operar dentro de las especificaciones del fabricante. 6.4 BALANZA ANALTICA

Capaz de pesar con aproximacin a 0,1 mg. 5

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6.5 6.6 BOTELLAS DE PESAJE MATRACES DE UN AFORO

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De 1 000 ml de capacidad que cumplan con los requisitos de ISO 1042, Clase A (NTC 2492:1999). 6.7 HORNO ELCTRICO

Capaz de mantener una temperatura de 300 C 25 C. 6.8 ESTUFA DE SECADO

Bien ventilada, capaz de mantener una temperatura de 130 C 2 C. 6.9 6.10 DESECADOR BOTELLAS DE POLIETILENO

De capacidad mxima de 250 ml, con tapn adecuado. 7. TOMA DE MUESTRAS

La toma de muestras no hace parte de este mtodo. Un mtodo de toma de muestras recomendada se encuentra en la norma ISO 707 (NTC 666). Es importante que el laboratorio reciba una muestra que es verdaderamente representativa y que no ha sido alterada o cambiada durante el transporte o el almacenamiento. Si es necesario, las muestras para ensayo se pueden almacenar a una temperatura entre 0 C y 6 C. Es preferible ensayar las muestras inmediatamente llegan al laboratorio. 8. CALIBRACIN DEL CRIOSCOPIO

Se asegura que el crioscopio (vase el numeral 6.1) est en condiciones operativas de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se verifica la posicin de la sonda, la amplitud de la vibracin del alambre de agitacin y la temperatura del instrumento de agitacin (vase el numeral 6.1.1). Se seleccionan dos soluciones normalizadas de cloruro de sodio (vase la Tabla 1), de modo que sean las que ms se acercan al valor esperado de punto de congelacin de la leche en ensayo. La diferencia en los puntos de congelacin de las dos soluciones normalizadas de cloruro de sodio no debe ser menor de 100 mC. Se debe tener cuidado de que las temperaturas de las soluciones normalizadas de cloruro de sodio y las de la muestra de ensayo sean similares. Se vierten 2,5 ml 0,1 ml de las soluciones normalizadas de cloruro de sodio de la solucin en un tubo para muestra (vase el numeral 6.2) limpio y seco y se calibra el crioscopio de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se usan tubos de muestra (vase el numeral 6.2), del mismo tipo de los usados durante el ensayo de la muestra. Despus de esto, el crioscopio termistor est listo para el uso.

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9. 9.1 PROCEDIMIENTO PREPARACIN

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Si es necesario remover de la muestra para ensayo cualquier cuerpo extrao visible o grasa de mantequilla slida mediante filtracin en un recipiente limpio y seco. Mezclar la muestra completamente, usar un filtro que sea inerte a la leche y efectivo cundo se use a la temperatura del laboratorio. Iniciar el procedimiento en las muestras para ensayo a su temperatura de almacenamiento o despus que han alcanzado la temperatura del laboratorio antes de comenzar la determinacin. Sin embargo, las muestras para ensayo y las soluciones normalizadas de cloruro de sodio deben tener la misma temperatura al comienzo de la determinacin. (Vase tambin el numeral 8.) 9.2 ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA

Determinar la acidez titulable de la leche (NTC 4978), si existen dudas acerca de la condicin de la muestra, en lo posible al mismo tiempo que la determinacin del punto de congelacin. Los resultados obtenidos para las muestras de ensayo con una acidez titulable que exceda 20 ml de solucin de hidrxido de sodio 0,1 mol/L por 10 g de slidos no grasos no ser representativo de la leche original. 10. 10.1 PROCEDIMIENTO ENSAYOS PRELIMINARES

Realizar verificaciones de los instrumentos de acuerdo con las instrucciones del fabricante. 10.2 ENSAYO DE CALIBRACIN DE RUTINA

Antes de cada serie de determinaciones, se mide el punto de congelacin de una solucin normalizada de cloruro de sodio (vase el numeral 5.3), (por ejemplo una solucin cuyo punto de congelacin sea - 512 mC), hasta que dos determinaciones consecutivas no difieran en ms de 1 m C. Recalibrar el crioscopio como se describe en el numeral 8, si el promedio aritmtico de los dos resultados difieren del punto de congelacin de la solucin normalizada de cloruro de sodio usada en ms de 2 mC. Realizar la calibracin de rutina por lo menos una vez por hora si el crioscopio est en uso continuo. 10.3 DETERMINACIN

Se invierte suavemente y se rota el frasco con la muestra de leche varias veces para mezclar su contenido de tal modo que se evite la incorporacin de aire. Vertir por medio de una pipeta limpia y seca 2,5 ml 0,1 ml de leche a un tubo para muestras limpio y seco. Hay que asegurarse que el vstago del termmetro y el agitador estn limpios y secos. Si fuera necesario se seca cuidadosamente con papel absorbente suave y limpio.

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Insertar el tubo de la muestra en el crioscopio calibrado (vase el numeral 6.1) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y encender el instrumento para enfriar la muestra para ensayo e iniciar la congelacin a - 3,0 C 0,1 C. La meseta se alcanza cuando el aumento de temperatura cerca de los ltimos 20 s ha excedido 0,5 mC. Para instrumentos con una resolucin no mayor de 1 mC, la meseta se alcanza tan pronto como la temperatura permanece constante durante 20 s y se registra esta temperatura. Abandonar el ensayo si por cualquier razn la congelacin se inicia antes que la temperatura sea de 3C 0,1 C, y repetir la determinacin con otra muestra de leche de 2,5 ml 0,1 C. Si tambin se congela esta segunda muestra antes de la temperatura especificada, se calienta una porcin de muestra de 0,1 ml a 45 C y se mantiene a esta temperatura durante 5 min para fundir la grasa. Luego se enfra de nuevo hasta la temperatura de ensayo y hacer la determinacin inmediatamente.
NOTA El tiempo entre el inicio del punto de congelacin y la obtencin del valor, y el tiempo durante el cual la temperatura permanece constante difieren de muestra en muestra y es mucho menor para agua y para soluciones de cloruro de sodio que para la leche.

Cuando la medida se ha completado satisfactoriamente, retirar el tubo, enjuagar con agua y secar el termistor y el agitador con un papel absorbente, suave y limpio, y realizar una segunda determinacin sobre otra muestra de leche. Si los dos puntos de congelacin difieren ms que el valor de la repetibilidad (vase el numeral 12.2), descartar el resultado y realizar dos determinaciones sobre otra muestra.

11. 11.1

CLCULO Y EXPRESIN DE RESULTADOS CLCULO

Si la calibracin se confirma mediante el resultado de la verificacin de calibracin de rutina, tomar como resultado el promedio de los dos valores obtenidos, redondeados hasta la tercera cifra significativa. Si la calibracin no se confirma, repetir el procedimiento. (Vase el numeral 10). 11.2 EXPRESIN DE RESULTADOS

Expresar los resultados del ensayo de punto de congelacin hasta tres cifras significativas. Redondear el promedio de los resultados como sigue: Si la cuarta cifra significativa es 5, cambiar la tercera cifra significativa al nmero par ms cercano. En seguida se dan ejemplos de los resultados promedio redondeados de valores de punto de congelacin (en miligrados Celsius).

Resultados por duplicado Resultado 1 Resultado 2 - 540 - 542 - 541 - 542 - 540 - 541

Valor promedio - 541 - 542 - 540

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12. 12.1 PRECISIN ENSAYO INTERLABORATORIO

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Los valores para lmites de repetibilidad y reproducibilidad se derivaron de ensayos interlaboratorio realizados de acuerdo con las normas ISO 5725-1 (NTC 3529-1) e ISO 5725-2 (NTC 3529-2). Detalles de los ensayos interlaboratorios de los mtodos estn resumidos en el Anexo A. Los valores derivados de este ensayo interlaboratorio no se pueden aplicar a rangos de concentraciones y matrices diferentes a los dados.
NOTA La IDF establece una gua especfica para los ensayos interlaboratorios sobre mtodos de anlisis y los productos lcteos. Est basado en la norma ISO 5725 (NTC 3529-1, NTC 3529-2, NTC 3529-3).

12.2

REPETIBILIDAD

La diferencia absoluta entre valores independientes obtenidos en determinaciones por duplicado usando el mismo mtodo, en material de ensayo idntico, en el mismo laboratorio, por un mismo analista, usando el mismo equipo, en un intervalo de tiempo corto, no debe exceder de 4 mC, en el 5 % de los casos. 12.3 REPRODUCIBILIDAD

La diferencia absoluta entre valores obtenidos en determinaciones por duplicado y llevadas a cabo en laboratorios diferentes con la misma muestra, con distintos operadores y equipo, no debe exceder de 6 m C, en el 5 % de los casos. 13. 13.1 INFORME El informe debe incluir la informacin siguiente:

13.1.1 Toda la informacin requerida para la identificacin completa de la muestra para laboratorio; 13.1.2 Mtodo de muestreo usado, si se conoce; 13.1.3 Mtodo de muestreo usado con referencia a esta norma 13.1.4 Todos los detalles de operacin no especificados en esta norma, o considerados como opcionales, junto con detalles de cualquier incidente que pueda influenciar los resultados; 13.1.5 La acidez titulable, si se determin; 13.1.6 Los resultados de ensayo obtenidos, o si se verific la repetibilidad, el resultado final citado obtenido.

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ANEXO A (Informativo)

RESULTADOS DE LOS ENSAYOS INTERLABORATORIOS A.1 GENERALIDADES

Despus de un preestudio realizado en octubre de 1998, se realiz un estudio colaborativo internacional entre 19 laboratorios y trece pases, en septiembre de 1999. El ensayo incluy 18 muestras para ensayo, dividida en 36 duplicados a ciegas: 6 pares de muestras de leche descremada UHT en tres niveles diferentes; 6 pares de muestras de leche entera UHT a tres niveles diferentes; 6 pares de muestras de leche cruda a tres niveles diferentes; Los ensayos se organizaron por Netherlands Milk Control Station, Zutphen (NL) y el Inspectorate for Health Protection, Leeuwarden (NL). Las muestras para ensayo fueron preparadas y distribuidas por Cecalait, Poligny (FR), quienes tambin realizaron anlisis estadsticos de acuerdo con la norma ISO 5725-1 (NTC 3529-1) e ISO 5725-2 (NTC 3529-2) para proporcionar datos de precisin como se muestra en las Tablas de la A.1 a la A.3. A.2 RESULTADOS DE LOS ENSAYOS
Tabla A.1. Resultados para los ensayos de leche descremada UHT Muestra 1 2 3 4 5 6 Promedio a grande

Nmero de laboratorios participantes despus de 17 16 17 18 18 17 eliminar a los valores extremos Valor promedio, mC - 497,4 - 498,8 - 512,0 - 518,1 - 536,1 - 539,4 - 517,0 Desviacin estndar de repetibilidad, sr , mC 1,2 1,0 1,2 1,1 1,2 1,0 1,1 Lmite de repetibilidad, r (2,8 sr), mC 3,3 2,9 3,2 3,0 3,3 2,9 3,1 Coeficiente de variacin de repetibilidad, % 0,23 0,21 0,22 0,21 0,22 0,19 0,21 Desviacin estndar de reproducibilidad, sR, mC 1,2 1,3 1,2 1,6 1,4 2,0 1,5 Lmite de reproducibilidad, R (2,8 sR), mC 3,5 3,6 3,3 4,5 4,0 5,6 4,2 Coeficiente de variacin de reproducibilidad, % 0,25 0,26 0,23 0,31 0,31 0,37 0,29 a Los valores grandes promedio fueron calculados usando slo datos de muestras sin eliminar a los valores extremos. El valor grande promedio de la muestra fue calculado promediando. Todos los promedios estadsticos se calcularon a partir de la raz cuadrada del promedio de las desviaciones al cuadrado. Tabla A.2. Resultados para los ensayos de leche entera UHT Muestra 1 2 3 4 5 6 Promedio a grande

Nmero de laboratorios participantes despus de 17 17 17 17 18 18 eliminar a los valores extremos Valor promedio, mC - 491,6 - 494,7 - 512,6 - 512,9 - 534,8 - 534,9 - 513,6 Desviacin estndar de repetibilidad, sr , mC 1,2 1,7 2,0 1,1 1,4 1,2 1,5 Lmite de repetibilidad, r (2,8 sr), mC 3,5 4,7 5,5 3,1 3,9 3,4 4,1 Coeficiente de variacin de repetibilidad, % 0,25 0,34 0,38 0,22 0,26 0,22 0,28 Desviacin estndar de reproducibilidad, sR, mC 2,0 2,3 2,7 1,5 2,0 2,3 2,2 Lmite de reproducibilidad, R (2,8 sR), mC 5,6 6,4 7,7 4,2 5,6 6,4 6,1 Coeficiente de variacin de reproducibilidad, % 0,41 0,46 0,53 0,29 0,38 0,43 0,42 a Los valores grandes promedio fueron calculados usando slo datos de muestras sin eliminar a los valores extremos. El valor grande promedio de la muestra fue calculado promediando. Todos los promedios estadsticos se calcularon a partir de la raz cuadrada del promedio de las desviaciones al cuadrado.

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Tabla A.3. Resultados para los ensayos de leche cruda Muestra 1 2 3 4 5 6 Promedio a grande

Nmero de laboratorios participantes despus de 18 18 18 17 18 17 eliminar a los valores extremos Valor promedio, mC - 496,2 - 504,9 - 518,3 - 512,9 - 540,0 - 548,8 - 522,3 Desviacin estndar de repetibilidad, sr , mC 1,4 1,3 1,3 1,4 1,3 1,1 1,3 Lmite de repetibilidad, r (2,8 sr), mC 3,8 3,6 3,7 3,8 3,6 3,2 3,6 Coeficiente de variacin de repetibilidad, % 0,28 0,25 0,26 0,26 0,24 0,21 0,25 Desviacin estndar de reproducibilidad, sR, mC 2,1 2,5 2,6 2,1 2,2 2,3 2,3 Lmite de reproducibilidad, R (2,8 sR), mC 5,9 7,0 7,4 6,0 6,2 6,5 6,5 Coeficiente de variacin de reproducibilidad, % 0,42 0,50 0,51 0,41 0,41 0,42 0,45 a Los valores grandes promedio fueron calculados usando slo datos de muestras sin eliminar a los valores extremos. El valor grande promedio de la muestra fue calculado promediando. Todos los promedios estadsticos se calcularon a partir de la raz cuadrada del promedio de las desviaciones al cuadrado.

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ANEXO B (Informativo)

DIRECTRICES PARA LA APLICACIN DE MTODOS DE RUTINA CON CRIOSCOPIO TERMISTOR

B.1

INTRODUCCIN

Esta norma describe los mtodos crioscpicos de referencia para la determinacin del punto de congelacin de la leche. En la prctica, la aplicacin de los mtodos con crioscopio termistor pueden ser atractivos por las siguientes razones:

Lograr una duracin del ensayo ms corta y adelantar el momento de la interrupcin de la medicin; Mantener los instrumentos en operacin, para los cuales no es posible una adaptacin completa a los requisitos del mtodo de referencia.

Ejemplos de mtodos, de desviaciones o de ambos, en uso son: Interrumpir la medicin a los 30 s, 50 s, 60 s, o a 90 s despus del arranque de congelacin; Interrumpir la medicin cuando la lectura del instrumento es constante hasta dentro de 1 mC durante 20 s; Trabajar con partes del instrumento con desviaciones caractersticas; Usar otros volmenes de muestra; Aplicar otras temperaturas de congelacin.

Cuado se aplican mtodos de rutina, se debe hacer una correccin en los resultados del ensayo de rutina para obtener un acuerdo promedio con el resultado de las mediciones del crioscopio termistor de referencia. Determinar los valores de correccin para circunstancias caractersticas. Este anexo suministra directrices para establecer valores de correccin. B.2 PREREQUISITOS

El mtodo de rutina aplicable debe cumplir con requisitos tales como: Usar el mismo principio de ensayo, por ejemplo, un mtodo crioscopio termistor; Lograr una discriminacin de 1 mC o mejor sobre un rango de - 400 C hasta 600 mC; Tener una linearidad con errores no mayores de 1 mC dentro de un rango de - 400 C hasta 600 mC;

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Lograr una interrupcin de la medicin no antes de 30 s despus del arranque de la congelacin; Tener una repetibilidad no mayor de lo especificado en el numeral 12.2.

B.3

DETERMINACIN DEL VALOR DE CORRECCIN

B.3.1 Generalidades La correccin necesaria debe ser determinada a travs de mediciones comparativas con mtodos de referencia y mtodos de rutina, usando un nmero suficiente de muestras representativas de la leche bajo consideracin. B.3.2 Toma de muestras y tratamiento Para este propsito, se renen muestras para ensayo que sean representativas de la poblacin objetivo, por ejemplo, que cubran un rango normal en la variacin de la composicin y el rango del valor del punto de congelacin ocurre para los tipos de muestra bajo consideracin (Por ejemplo, leche cruda, leche pasteurizada, o leche pasteurizada descremada). Tomar y tratar las muestras de acuerdo a los numerales 7 y 9. B.3.3 Nmero de muestras para ensayo El nmero mnimo de muestras, n, debe ser tal que no se excede una diferencia crtica de 0,4 mC. Se calcula, n, usando la siguiente ecuacin de aproximacin:
d .u0 ,95 D

n =(

)2

en donde: n d u0,95 D = = = es el mnimo nmero de muestras para ensayo; es la desviacin estndar de las diferencias entre los mtodos para muestras individuales es el valor numrico de la distribucin normal reducida a su nivel de intervalo de confianza unilateral del 95 %. es el valor definido para la diferencia crtica.

EJEMPLO

Para d = 3,0 mC, u0,95 = 1,645 y D = 0,4 mC, n 152 muestras.

B.3.4 Calibracin y verificacin de la calibracin Analizar las soluciones de cloruro de sodio (vase el numeral 5.3) con valores de punto de congelacin conocido bajo las mismas condiciones como para muestras de ensayo. Tener cuidado que las condiciones son las mismas para ambos mtodos, de referencia y de rutina. Tambin usar la misma solucin normalizada de cloruro de sodio. 13

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B.3.5 Medicin de las muestras de ensayo Con mtodos de rutina, se pueden usar en las soluciones normalizadas de cloruro de sodio (vase el numeral 5.3) un fungicida o agente fungisttico. Sin embargo, la adicin no debe tener un efecto mayor de +1,0 mC comparado con una solucin sin preservacin, con la misma concentracin de cloruro de sodio. Si se usa, el agente preservante debe ser de calidad grado analtico y su uso no debe estar sujeto a limitaciones impuestas por regulaciones ambientales. Cuando se usa un preservativo, la concentracin de cloruro de sodio ms baja, apenas alcanza el mismo punto de congelacin que la solucin normalizada de cloruro de sodio sin preservar (Vase la Tabla 1). Establecer una fecha apropiada de expiracin basada en estudios validados. Determinar el punto de congelacin de las muestras para ensayo por duplicado con el mtodo de referencia descrito en esta norma. Determinar el punto de congelacin de la misma serie de muestras para ensayo por duplicado con el mtodo de rutina, en relacin con los numerales 9 y 10 de esta norma. Deben evitarse las diferencias ambientales entre mediciones sucesivas o entre mediciones realizadas por el mtodo de referencia y el mtodo de rutina; por ejemplo, asegurar el almacenamiento apropiado (de 0 C a 6 C) de muestras en botellas bien tapadas. B.3.6 Clculo del valor de correccin Corregir cada resultado individual por una cantidad correspondiente a la diferencia entre el punto de congelacin de la muestra de control usada (vase el numeral 5.3) y el valor determinado en la prxima verificacin de calibracin. Entonces se calculan los valores del punto de congelacin promedio obtenido para la medicin por duplicado usando el mtodo de referencia. Similarmente, obtener el valor promedio para las mediciones de los mtodos de rutina. Calcular la desviacin estndar s, de las diferencias individuales entre de las diferencias individuales entre los resultados promedio obtenidos por ambos mtodos. Borrar los valores extremos, por ejemplo, muestras con diferencias mayores de 3 s. Entonces se calcula la diferencia promedio entre los resultados obtenidos por los dos mtodos. Redondear hasta la segunda cifra significativa. Usar este valor como el valor de correccin. Si despus de borrar los valores extremos, s es todava mayor de 3,0 mC, se considera inexacto y por tanto inaceptable trabajar con un valor de correccin. En la Tabla B.1 se muestra un ejemplo de una serie de muestras reducidas (n = 10).

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Tabla B.1. Ejemplo

Muestra

Resultados con un mtodo de referencia (1)

Resultados con el mtodo de rutina (2)

Diferencia (2)(1)

Despus de la correccin 1 2 Promedio

Despus de la correccin 1 2 Promedio

512 - 511,5 - 512,7 - 512,4 - 513,0 muestra de control 1 - 517,5 - 518,2 - 516,8 - 517,5 - 517,5 - 518,1 - 519,2 2 - 538,1 - 536,9 - 537,4 - 536,2 - 536,80 - 537,3 - 539,0 3 - 521,8 - 521,3 - 521,1 - 520,6 - 520,85 - 522,9 - 521,8 4 - 528,6 - 529,9 - 527,9 - 529,2 - 528,55 - 530,3 - 531,4 5 - 522,3 - 520,9 - 521,6 - 520,2 - 520,90 - 527,3 - 529,2 6 - 515,7 - 518,1 - 514,9 - 517,3 - 516,10 - 517,7 - 518,9 7 - 523,4 - 522,1 - 522,6 - 521,3 - 521,95 - 525,2 - 524,7 8 - 512,2 - 513,8 - 511,4 - 513,0 - 512,20 - 514,1 - 513,4 9 - 516,1 - 514,2 - 515,3 - 513,4 - 514,35 - 517,5 - 518,2 10 - 521,6 - 522,3 - 520,8 - 521,5 - 521,15 - 521,4 - 523,4 512 - 513,1 - 512,5 - 511,7 - 511,5 muestra de control Diferencia promedio Valor de s Diferencia promedio despus de borrar el dato de muestra con valor extremo Valor de s despus de borrar el dato de muestra con valor extremo a el valor extremo

- 518,0 - 537,2 - 522,8 - 530,2 - 527,2 - 518,1 - 525,6 - 514,5 - 517,9 - 521,8

- 519,1 - 538,9 - 521,7 - 531,3 - 529,1 - 519,3 - 525,1 - 513,8 - 518,6 - 523,8

- 518,55 - 538,05 - 522,25 - 530,75 - 528,15 - 518,70 - 525,35 - 514,15 - 518,25 - 522,80

- 1,40 - 1,25 - 1,40 - 2,20 a - 7,25 - 2,60 - 3,40 - 1,95 - 3,90 - 1,65

- 2,7 1,73 - 2,2 0,88

La diferencia promedio entre los resultados cuando se mide con el mtodo de rutina y el mtodo de referencia en esta muestra es de 2,2 mC. Este es tambin el valor de correccin necesario cuando se mide con este mtodo de rutina. En este caso, este lleva a una correccin de temperatura ms moderada. B.4 VALIDEZ

EL valor de correccin calculado es vlido para la combinacin especfica del tipo de ensayo y los atributos del mtodo de rutina, por ejemplo, propiedades del instrumento, el momento de interrumpir la medicin, el volumen de muestra y la temperatura de congelacin.

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ANEXO C (Informativo)

AJUSTE DEL VALOR DEL PUNTO DE CONGELACIN USADO COMO REFERENCIA PARA LA LECHE GENUINA

Para estimar si una muestra contiene o no agua extraa, es necesario comparar el punto de congelacin de esta muestra para ensayo con el punto de congelacin de la leche genuina, por ejemplo, leche que se sabe est libre de agua extraa. Para algunas muestras (por ejemplo, leche procesada hecha de una mezcla de leches suministradas por diferentes hatos, no siempre es posible obtener un valor de referencia para la leche genuina. En tales casos, es necesario ajustar un valor promedio establecido para la leche genuina. Algunos pases han logrado establecer un valor para el punto de congelacin de la leche genuino despus de completar encuestas extensivas. Otros, han adoptado un valor basado en algunos aos de observaciones histricas. Una desviacin en la escala de temperatura del punto de congelacin ocurre probablemente cuando cambia el mtodo usado respecto del mtodo de referencia descrito en esta norma. Este cambio en la escala de temperatura es, en parte, debido a la normalizacin ms eficaz de los componentes del instrumento y de sus caractersticas, y en parte debido a la redefinicin del punto de interrupcin de la curva del punto de congelacin de la leche. Claramente, este cambio en la escala dar un aumento en el cambio de las lecturas del punto de congelacin en relacin de aquellos previamente registrados. Esto hace necesario aplicar un cambio pequeo a los valores histricos usados en leche genuina. Si no se hace un ajuste, un error sistemtico se aplicar a la evaluacin de agua extraa en leche. Se recomienda, por tanto, ajustar solo una vez el valor aplicado a la leche genuina para llevarlo alinearlo con la nueva escala en esta norma. Tal ajuste debe hacerse por, o establecido bajo la supervisin de, cada autoridad nacional. El ajuste puede hacerse siguiendo el procedimiento dado en el Anexo B con las siguientes precauciones que sern tomadas.

a)

Buscar las orientaciones de un estadstico para establecer el nmero ptimo de muestras requerido en la comparacin para obtener cualquier error sistemtico a un nivel aceptable bajo. Usar muestras para ensayo en el procedimiento que representen tan aproximadamente como sea posible al tipo de leche que se est ensayando rutinariamente. Ensayar una serie de muestras en el procedimiento por aproximacin siguiendo este mtodo normalizado del crioscopio de referencia. Obtener un registro de este estudio para referencias futuras.

b)

c)

d)

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ANEXO D (Informativo)

OTRAS NORMAS INTERNACIONALES SOBRE EL MISMO TEMA

NOTA Las normas citadas a continuacin se relacionan nicamente para informacin; se invita a consultar las respectivas ediciones vigentes. Norma ISO relacionada Official Methods of AOAC Official Method Aplicable a leche entera, ISO 5764:2002 Analysis of AOAC, 17 TH 990.22 Freezing Point of parcialmente descremada Edition, 2000. Milk. Thermistor Cryoscope descremada o pasteurizada, Method. UHT, homogeneizada, o IDF ISO AOAC Method esterilizada. Organismo internacional Nmero norma Alcance

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BIBLIOGRAFA

IDF 135, Milk and Milk Products. Precision Characteristics of Analytical Methods. Outline of Collaborative Study Procedure. International Dairy Federation, Bulletin of IDF, 1983, No. 154. International Dairy Federation, Bulletin of IDF, 1986, No. 207.

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