FILTRACIN DE AIRE. AREAS LIMPIAS, ESTRILES. FLUJO LAMINAR. CABINAS DE SEGURIDAD BIOLOGICA.

Desde el punto de vista de la produccin , ya sea de frmacos biolgicos o qumicos, reactivos de diagnstico, anlisis de laboratorio microbiolgico, etc debemos pensar en la consideracin de uno de los factores que pueden influir considerablemente en la calidad y el xito de nuestro trabajo, y en la salud de los operadores: la calidad del aire que se maneja. El aire en s es una mezcla de diferentes gases pero que contiene o trasporta una serie de materiales extraos, originados en procesos naturales, o en las actividades humanas. De un anlisis del aire se revela la presencia de holln y humo, cuarzo, arcilla, trazas de residuos animales y vegetales, material orgnico en la forma de algodn y fibras de plantas, fragmentos metlicos; aunque tambin puede contener bacterias, virus, hongos, esporos, polen, etc. Estas partculas dispersas en el aire o en gases son llamadas comnmente "aerosoles" con tamaos que oscilan ente 30 y 0,1 mu y cuya composicin vara dependiendo del lugar, clima y poca del ao. Los niveles de contaminacin de aerosoles en funcin de la cantidad, se pueden determinar por recuento, por unidad de volumen. Para ello se utilizan contadores fotomtricos digitales, que cuentan y clasifican por medio de celdas fotoelctricas y amplificadores las partculas suspendidas para un volumen de aire determinado. Por ej.: Considerando slo las partculas > a 0,3micrones no es raro encontrar concentraciones en reas urbanas de 10 millones de partculas/pie cbico, en ciudades industriales: 100 millones por pie cbico; en zonas rurales ms de 1 milln por pie cbico; y en cuanto a humo de cigarrillo:30 millones por pie cbico. Este total es tan slo el 1% de las partculas suspendidas. Con referencia a las concentraciones de microorganismos en el aire, se puede hablar desde unos pocos hasta varios centenares por pie cbico, es decir , unos varios miles por m3. Se ha comprobado que la mayor concentracin de microorganismos se encuentra en partculas que fluctan entre los 2 y 5 micrones en tamao. Si consideramos segn su tamao: Las que son mayores de 10 micras: CAEN VELOZMENTE Entre 2 y 10 micras: CAEN CON VELOCIDAD DEPENDIENTE DE LA MASA DE AIRE. Las que son entre 0,5micras o menores: NO CAEN A su vez debemos considerar que una persona genera por minuto miles de partculas segn su actividad: Sentado sin moverse: 100.000 (>0,3 micras) Sentado moviendo pies y manos: 500.000 (> de 0,3 u) Parndose y sentndose: 2.500.000 (> 0,3 u) Dijimos que los valores estaban dados para partculas de 0,3u >, si realizamos la distribucin de partculas de acuerdo al conteo y peso relativo en una muestra de aire atmosfrico, segn lo, observado en el esquema,

un alto porcentaje del peso total de las partculas corresponde a una cantidad muy baja de las mismas. De un total aproximado de 20.000.000 slo 36.000 superaron los 5 micrones de dimetro y sin embargo constituyen el 80% del peso total. Por el contrario se ve que las 18.280.000 partculas inferiores a los 0,5 micrones representan ms del 91% por recuento del total de partculas colectadas, teniendo un peso equivalente al 1% del peso total. Esto se debe tener en cuenta al analizar un filtro y su eficacia, por consiguiente un filtro que tenga una eficacia de retencin alta si la medimos en funcin de la eliminacin del contaminante en peso, puede ser totalmente inefectivo en la eliminacin de partculas pequeas( por ej. menores de 5 micrones) con lo que es ineficaz en reducir la carga de microorganismos en el aire ambiente. * Partculas inertes: objetos slidos o lquidos cuyo tamao oscila, generalmente entre 1 nm y 1 mm. * Partculas viables: partculas inertes que llevan uno o ms microorganismos capaces de reproducirse. Los microorganismos no se encuentran flotando libremente en el aire

sino que son trasportados de un sitio a otro unidos a partculas de polvo, escamas de piel, gotas de saliva, etc. La FILTRACION es el mtodo ms utilizado para obtener aire de la calidad adecuada. El aire contiene partculas de diferente tamao, por lo que se usan filtros de diferente eficiencia de filtracin, colocados en serie, para hacer ms eficiente y econmico el proceso. Primero se colocan prefiltros, con el fin de eliminar partculas de mayor tamao y luego los filtros de alta eficiencia, que eliminan las partculas ms pequeas. En la industria se utilizan filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) que son capaces de retener partculas >/= de 0.3 micras con una eficiencia mnima de 99.97%. Estos filtros son hechos de un medio filtrante que se pliega en forma de acorden para proporcionar una mayor rea de filtracin, ensamblado en una armazn rgida. Los filtros se colocan en el sistema de aire acondicionado (HVAC) de la planta o laboratorio, para proporcionar condiciones adecuadas de temperatura, humedad y cantidad de partculas. El sistema de aire acondicionado usado en este tipo de plantas o laboratorios difiere del usado en oficinas, en los siguientes puntos: * Mayor suministro de aire: se requiere la entrada de mayor cantidad de aire en las zonas de trabajo limpio que en las oficinas, ya que se debe reducir la contaminacin durante el proceso. * Uso de filtros HEPA: para retener las partculas de menor tamao. * Uso de filtros terminales: para que las partculas desprendidas por los conductos del sistema de aire sean retenidas por el filtro HEPA. * Diferencia de presiones entre reas: para evitar la entrada de aire desde las reas ms sucias hacia las ms limpias. * Retornos en el extremo opuesto a la entrada del aire filtrado: para que el aire filtrado recorra toda el rea y permita la eliminacin de partculas. Para comenzar a hablar de filtros y tipos de filtros, podemos agregar que stos los usaremos para crear: AREAS CONTROLADAS: en las que se mantienen, dentro de lmites establecidos, parmetros fsicos tales como temperatura, humedad y presin. AREAS LIMPIAS: en las que, adems de controlar los parmetros anteriores, se mantiene la concentracin de partculas en el aire dentro de ciertos lmites, que ya veremos. Para definir el nivel de limpieza de estas reas se han desarrollado normativas tales como el Federal Standard 209E(USA) donde se clasifican las reas basndose en el nmero de partculas, de determinado tamao, presentes en el aire de la misma , sin importar si son inertes o viables. En estos casos el propsito principal es reducir la cantidad de organismos viables en el aire. Si se reduce el nmero de partculas presentes en un rea, tambin estamos disminuyendo la cantidad de partculas viables, por lo que se adopt el Federal Standard 209E considerando la cantidad de partculas iguales o mayores de 0.5 mu presentes en un metro cbico de aire. Posteriormente la International Organization for Standardization (ISO) desarroll un nuevo documento con el fin de uniformar, a nivel mundial, esta clasificacin. En lo que es industria de produccin de materiales orales, tpicos para uso biolgico, son ISO Clase8(100.000) y las de llenado de inyectables con ISO Clase5 (100).( ya se ver ms adelante) LOS FILTROS: Los filtros son usados para la limpieza del aire al ser inyectado en sistemas de aire acondicionado o en ventilacin, y tambin antes de la emisin de aire contaminado al ambiente exterior de, por ej., plantas de energa nuclear, centros de investigacin bacteriolgica y de virologa, etc. Los filtros estn constituidos por medios fibrosos o porosos con diferentes configuraciones. Las caractersticas ms importantes son la eficiencia de la retencin,

la cada de presin o diferencia de presin esttica para un determinado caudal y la capacidad de almacenamiento de polvo, que es la cantidad de polvo retenido en peso, cuando se llega al punto de saturacin y recambio del filtro. Dejando de lado los filtros de carbn activado, que son usados para la separacin de gases y olores por adsorcin, los filtros pueden dividirse en tres clases: Pre-filtros, filtros finos y filtros HEPA., y se basa en las caractersticas de los diferentes medios filtrantes, el mecanismo de captacin de partculas, su eficiencia filtrante e indirectamente la aplicacin del filtro. La capacidad de un filtro para retener partculas se debe, entre otros, a varios fenmenos fsicos como el efecto tamiz, la intercepcin directa, la separacin por inercia y el efecto de difusin Browniana. Existen adems, efectos de atraccin electrosttica entre los materiales del filtro y las partculas. Para explicar los mecanismos de la filtracin se supone que las partculas son esfricas y resultan atradas por fuerzas de Van der Waals al tocar los medios filtrantes, quedando en consecuencia retenidas en ellos. Efecto de intercepcin directa:

Las pequeas partculas livianas siguen las lneas de flujo del aire alrededor de la fibra del filtro. Si el centro de la partcula sigue un recorrido que se acerca a la superficie de la fibra a una distancia menor que el radio de la partcula r/p, la partcula es interceptada y se adhiere a la fibra (ver figura). Este efecto es independiente de la velocidad del aire, a menos que la variacin provoque turbulencias alrededor de la fibra. El efecto de intercepcin aumenta con partculas de mayor tamao, y con medios de menor tamao de fibra (a igualdad de peso especfico del medio filtrante), que traen como consecuencia menores distancias entre fibras. Efecto tamiz:

Partculas de tamaos mayores al de la separacin entre fibras consecutivas no pueden pasar a travs del medio (ver figura) Efecto de inercia:

Las partculas de mayor tamao estn sujetas a una fuerza de inercia tal que las desva de la lnea de flujo cuando se acercan a la fibra. La partcula contina en su desviacin impactando sobre la superficie de la fibra, quedando adherida a la misma. La fuerza de inercia aumenta con el tamao de la partcula y con el aumento de la velocidad de aire, incrementando por consiguiente la eficiencia en el poder de retencin por este mecanismo. (ver figura) Efecto de difusin:

Las partculas inferiores a 1 micrn no siguen las lneas de flujo alrededor de la fibra del filtro. Estn influenciadas por el movimiento Browniano, tpico de las molculas gaseosas, que junto con otras partculas las chocan provocando movimientos desordenados que las desvan en su trayectoria, vibrando de modo tal que en algn momento, entran en contacto con la superficie de las fibras, donde quedan retenidas por fuerzas de Van der Waals (ver figura). La probabilidad de que una partcula entre en contacto con otra decrece con la velocidad y con el dimetro de la partcula. ( tabla 1)

Tanto el efecto de inercia como el de intercepcin aumentan con el tamao de las partculas, mientras que el de difusin decrece. Esto implicara, que hay un tamao de partcula crtico, que es el que corresponde a la ms difcil de retener en un filtro, segn esta curva de eficiencia tiene un mnimo para partculas entre 0,18 micrones y 0,3 micrones de dimetro. Del anlisis de estas

curvas surge que las partculas de 0,3 micrones son consideradas las ms difciles de retener en filtros HEPA o absolutos en condiciones normales de operacin. Mtodos de Ensayo: Los mtodos de evaluacin se pueden dividir en tres grandes grupos: 1.- Gravimtricos (polvo sinttico) (por peso) 2.- Efecto mancha (aire atmosfrico) 3.- Recuento de partculas.

Eficiencia filtrante: Las concentraciones de partculas pueden medirse en funcin del recuento de las mismas, de su peso o del efecto de mancha que producen. En base a estas tres maneras de medir concentraciones de partculas en aire se han generado normas para la determinacin de la eficiencia de los filtros, que se hallan normalizados segn el ASHRAE St.52-76 para los ensayos por peso y por mancha, y el recuento de partculas por aerosoles de DOP segn el Military Std.282 de USA. Los filtros HEPA (comnmente llamados absolutos), se usan para condiciones crticas de ambiente, donde la obtencin e aire ultra limpio es de mxima importancia. El mtodo de ensayo D.O.P. fue desarrollado en Estados Unidos durante la 2 Guerra Mundial, basndose en que la partcula de mxima penetracin es la de 0,3 micras. Este mtodo de ensayo DOP con partculas homogneas de 0,3 micrones generadas en aerosoles monodispersos o polidispersos segn la aplicacin, es el ms reconocido mundialmente como mtodo por excelencia para definir la eficiencia de los filtros HEPA, ya para detectar fugas y sellar prdidas de filtros HEPA, previamente detectadas por el ensayo monodisperso. Eurovent 4/4: Ha adoptado el mtodo Britnico de la llama de sodio, con algunas modificaciones, y ha sido propuesto para las normas ISO. Esta Norma tiene 2 diferentes mtodos bsicos: Los filtros se ensayan con una mezcla de polvo sinttico y con aire atmosfrico ambiental no tratado. En el 1 caso se habla de arrestance o retencin en peso del filtro, que es un ensayo gravimtrico que sirve para medir la habilidad de separar polvo sinttico de partculas relativamente groseras comparadas con el aerosol ambiental.

El otro sirve para determinar eficiencia y se lo define como la habilidad del filtro para evitar el efecto de ensuciamiento o la decoloracin provocada por el aire atmosfrico. Comparacin de los dos ensayos entre s: (tabla II) Vemos en la parte inferior de la tabla QUE FILTROS COMO LOS COMUNES de lana de vidrio o metlicos, con una eficiencia del 76% segn peso, con polvo sinttico, son capaces de disminuir el efecto de la mancha con aire atmosfrico e nun 8 a un 12%. Si los ensayramos con aerosoles de DOP veramos que su eficiencia es de menos del 5%. En consecuencia, cuando se deba seleccionar un filtro es fundamental especificar o verificar la eficiencia, y el mtodo de ensayo con que se verific la misma. Ensayo del Dioctilftalato:D.O.P: Este ensayo es una Norma para ensayar filtros HEPA con eficiencia del 99,7%, por definicin, para aerosoles monodispersos de 0,3 micras. El DOP es un plastificante cuya caractersitca es que su presin de vapor, a temperatura ambiente, es suficientemente baja como para dar un aerosol estable cuando condensa. Es adems estable a altas temperaturas, incoloro, no txico, no corrosivo y barato. Las mediciones se efectan antes y despus del filtro , por medios fotoelctricos. El aire es prefiltrado con un filtro HEPA a la entrada y dividido en 3 corrientes. Una es calentada a 185C, pasando sobre DOP calentado a 200C, de manera que el aire se satura con vapor de este ltimo. Este flujo de aire saturado es luego mezclado con la segunda corriente de aire, y el vapor condensa en un aerosol monodisperso formando aerosoles de 0,3 micrones, medida que se regula por la temperatura de la corriente fra. Las partculas deberan tener un dimetro de 0,3 micrones, lo que es verificado por medio de un dispositivo ptico. Despus de la condensacin, el aerosol es diludo, a una concentracin de 100mg/m3, con la mezcla de la 3 corriente de aire en la cmara, y el filtro ensayado al caudal de diseo. El caudal en exceso es extrado por la chimenea. La penetracin del aerosol de D.O.P. es medida por un penetrmetro, verificndose el tamao de la partcula. Ver esquema adjunto. La medicin de la penetracin de D.O.P. se efecta con ayuda de una celda fotoelctrica. Se dispone de un foco, cuya luz es dispersa por las pequeas partculas transparentes, lo que hace que la celda emita pulsos proporcionales a la concentracin del aerosol. Al chequear un filtro, muestras de aire pasan antes y despus del mismo, por la cmara ptica donde la luz se dispersa, y dicha dispersin es registrada por la celda f.e., bajo la forma de lectura por una aguja en un cuadrante. Esta lectura se ajusta al 100% de concentracin de DOP, antes del filtro. A continuacin se toman muestras del aire filtrado. la dispersin de luz provocada por las partculas del aire filtrado, nos da el valor directo de la penetracin de partculas de DOP en un filtro. El instrumento es graduado con diferentes escalas permitindose, por el cambio de ellas, lecturas directas de valores tan pequeos como el 0,001% del aerosol emitido. El complemento de la penetracin es la eficiencia D.O.P.. Un filtro con 0,02% de penetracin tiene, por lo tanto, una eficiencia del 99,98%, con lo que cumple con la especificacin de HEPA. ELEMENTOS DE LOS FILTROS H.E.P.A. Los constituyentes de estos filtros son el medio filtrante o papel, los separadores, el marco, los adhesivos y el burlete. Ver figuras:

Papel de filtro o medio filtrante: Los primeros intentos se hicieron con fibras de amianto ultrafinas, pero luego se usaron fibras de celulosa y amianto, vidrio, amianto y vidrio; fibras plsticas y cermicas. Los de microfibras de vidrio, plsticos , cermica, etc son los que, con los avances de la tecnologa, han dado mejores resultados sin desprendimientos de partculas al medio ambiente, y con distintas ventajas y desventajas con respecto a la resistencia a altas temperaturas y corrosin qumica. Las microfibras cermicas se utilizan cuando se necesita trabajar con altas temperaturas (1000 C).

Separadores: En los filtros H.E.P.A. la velocidad ideal del aire a travs del medio es de2,5 cm/seg o sea 1,5m/min, siendo a esa velocidad , la cada de presin de 25mmH2O aproximadamente, por ser la penetracin mnima de 0,2%. Para velocidades tan bajas es necesario aumentar muchas veces (entre 25 y 70 veces) la superficie efectiva del medio respecto a la seccin del filtro. Para lograr ese aumento de superficie efectiva a 18 m2, lo que se hace es plegar el material y para que no se encimen los pliegues es que se usan separadores de distintos materiales como papel Kraft, aluminio (los ms usados) y acero inoxidable, o en algunos ms modernos se los sostiene con cordones adheridos al medio filtrante que les sirven de soporte. Marco: Se utilizaron marcos de madera o cartn pero son altamente deformables por lo que se reemplazaron por metales o plsticos segn los usos y el tamao. Adhesivos: Los ms usados son los de tipo goma siliconados, aunque tambin segn el tipo de filtro y el uso pueden ser de fibra de vidrio o refractarios. Burletes: Goma, neoprene, fibras de vidrio y minerales. Control de calidad en produccin: Todos los filtros son ensayados individualmente y se le coloca en el marco una etiqueta indicadora de la cada de presin, porcentaje de penetracin D.O.P. y caudal. Hay actualmente mtodos de ensayo con rayo laser que son ms rpidos y precisos. AREAS LIMPIAS Y FLUJO LAMINAR: Los mtodos para controlar la contaminacin ambiental se han basado tradicionalmente en la tecnologa de la filtracin del aire y de su distribucin dentro de reas cerradas levemente presurizadas. Estas reas son normalmente desinfectadas por medios qumicos o fsicos, tales como lavados con soluciones desinfectantes, formolizacin y aplicacin de lmparas ultravioletas. La tecnologa de la era espacial llev a generar una tecnologa absolutamente novedosa en el diseo y la construccin de "reas limpias", utilizando elementos y mtodos que llevan a reducir considerablemente los contaminantes bajando a un mnimo el riesgo de contaminar los productos elaborados o las operaciones de laboratorio o de manejo de pacientes segn el caso. Hay 3 factores que influyen en la contaminacin de un objeto dentro de un ambiente: 1) La atmsfera que lo rodea. 2) Las superficies que lo circundan. 3) La superficie del propio objeto. Estos 3 factores son fuentes que originan un nivel de contaminacin por: precipitacin atmosfrica o por decantacin de partculas sobre la superficie del objeto, contaminacin por contacto superficial y transferencia, y la contaminacin autogenerada. Dentro del rea de trabajo, debemos distinguir contaminantes ambientales provenientes de 2 distintos orgenes: 1) La contaminacin externa introducida al rea a travs del sistema de aire de aire acondicionado que ventila al ambiente, y al aire resultante de infiltraciones a travs de puertas y ventanas. 2) La contaminacin generada dentro del local por el propio personal o por la actividad que all se desarrolla, de hecho cuando el personal se retira disminuye el conteo de partculas en el rea. Normalmente el aire pasa a travs de filtros absolutos y se mantiene presurizado. Las "reas limpias",

como ya lo dijimos estn comprendidas dentro de la norma 209E de U.S.A. o segn otras normativas: Comparacin de varios cdigos

Comparacin de diferentes sistemas de clasificacin BPF US US ISO/TC CEE OMS Customary 209E 209 Anexo I BPF A M 3.5 100 ISO 5 A B M 3.5 100 ISO 5 B C M 5.5 10 000 ISO 7 C D M 6.5 100 000 ISO 8 D
CLASIFICACION DEL SISTEMA DE AIRE
Grado En reposo Nmero mximo de partculas permitidas /m3 igual o mayor de 0.5 m A B C D 3 500 3 500 350 000 3 500 000 5 m 0 0 2 000 20 000 0.5 m 3 500 350 000 3 500 000 no definido 5 0 2 000 20 000 no definido En operacin

Requerimientos para mantener un sistema de aire limpio: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. El aire debe fluir uniformemente todo el aire debe pasar por filtros HEPA Ambientes con paredes lisas Sistema de pre-filtros: retienen el 98% de partculas de 10 micrones Filtros HEPA: retencin del 99,97% para partculas > de 0,3 micras Recirculacin de aire del 80 % Renovacin de aire del 20% %( en reas limpias: 13-15 renovac. por hora, en reas de flujo laminar:120 renovac./hora) 8. Temperatura 20-25 C 9. Humedad: 35-45%

Mdulo tipo: Ventiladores Pre-filtros Filtros HEPA Cmara de mezcla de aire

Areas estriles convencionales: Para lograr las mismas se debe tener aire filtrado a sobrepresin, aire en regimen de turbulencias. Son clase 100.000 a lo sumo. Los inconvenientes que presentan son: 1. En el regimen turbulento se depositan las partculas mayores y las menores segn la circunstancia. 2. No se elimina la contaminacin generada en el local. 3. Deben extremarse las medidas sobre limpieza del personal y elementos introducidos a ellos. Por ej: Personal Ropa

Apropiada al grado del aire o Grado D cabello, barba y zapatos o Grado C cabello y barba bata que cubra hasta las muecas y el cuello no fibras o Grado B mscaras, guantes Lavandera y cambios

Precauciones: Limpieza de zapatos, lustrado, con aspiracin previo al ingreso. Cambio y aspiracin de ropa y muy recomendable la ducha de aire. Debido a que es difcil llegar a la clase 100.000, se implementa el uso de rayos U.V. o agentes quimicos

Area limpia convencional:

reas flujo laminar: Para ellas el planteo bsico de contaminacin es el mismo, o sea, a) por el aire externo b) por contaminacin generada en el rea. El primer punto es solucionable por el empleo de filtros absolutos, mientras que el segundo puede hacerse por mecanismos autolimpiantes en el rea. Entre 1960 y 1961 un equipo encabezado por el Dr Whitfield comenz a ensayar el trabajo con distintas velocidades de desplazamiento de aire, con lo que se lleg a tener un ambiente clase100, es decir no ms de 100 partculas por pie cbico o 3,5 por

litro de aire. A ese mecanismo lo llam Flujo Laminar por su semejanza con el movimiento de ese tipo que se da en mecnica de fluidos. Las velocidades de aire son menores que las habituales a la salida de los filtros, tal como se usan en las reas convencionales, y las lneas de desplazamiento se mantienen paralelas en todos sus puntos y uniformes en el espacio y en el tiempo. Evidentemente se haba logrado el mecanismo de la autolimpieza de las reas limpias y se implement al norma 209. De la que se desprende que: Se llama Flujo Laminar a una corriente de aire previamente filtrado por filtros HEPA cuya masa toda, se desplaza a una velocidad uniforme de 90 pies/min(27 m/min) +/-. En rigor el flujo laminar acta como un pistn de aire limpio que se desplaza dentro de un cilindro barriendo fuera de las reas las partculas en ellas generadas. Los niveles de limpieza de estas reas puede demostrarse por el hecho de que no se encuentra rayo de luz visible dentro de estas reas. Para evitar la generacin de partculas, las paredes y pisos deben ser lavables y resistentes a la abrasin. Se recomienda la pintura epoxi como revestimiento. Deben ser evitados bordes, hendijas y recovecos. Los zcalos deben ser redondeados, y la ropa del personal debe ser cuidadosamente lavada, esterilizada y confeccionada con fibras sintticas que no desprendan fibras. As como se recomienda el uso de barbijos de los mismos materiales. Lo ideal es la cobertura de la cabeza del operador con cofias que cubran lo ms posible el cabello y la piel, ya que sta es una fuente de generacin de partculas. En las grandes reas de flujo laminar horizontal, las personas dispuestas cercanas al banco de filtros HEPA se encuentran en niveles relativos de limpieza altos (Clase 100); sin embargo, siendo todos los individuos factores de contaminacin, al llegar el aire al final del rea tendr una mayor contaminacin relativa, considerndose a estas reas Clase 100.000. La ventaja de las reas de flujo laminar vertical consiste en que nunca el aire en contacto con un individuo o proceso pasa luego a otro individuo lo que permite mantener un nivel clase 100 en toda la sala. La desventaja del flujo laminar vertical es su mayor costo de instalacin y operativo.

turbulencias

Turbulencias:

Turbulencia provocada por el perfil del soporte

Turbulencias: Todo objeto situado dentro del flujo laminar origina turbulencias despus del mismo. Las turbulencias se recomponen a flujo laminar despus del objeto, siguiendo las siguientes reglas: 1) Cuando el elemento o la discontinuidad en un banco de filtros est rodeado por el flujo laminar en todo el permetro, el flujo se recompone a 3 veces el ancho del elemento en direccin del flujo, segn se ve en la figura. 2) Cuando el flujo de aire se desplaza a un solo lado de la discontinuidad u obstruccin, el flujo se recompone despus de 6 veces el ancho de la misma en direccin del flujo. Es importante que las operaciones crticas no se realicen en las zonas de las turbulencias, as como tener en cuenta las turbulencias generadas por movimientos de brazos y manos y la disposicin de objetos dentro del rea de trabajo. Esto vale para las reas de flujo laminar como para las cabinas de trabajo o bancos de flujo laminar.

De la observacin de estas figuras se desprende que se deben colocar los objetos en la zona de trabajo considerando que el vrtice del cono de turbulencia no supere la lnea de 15 cm dispuesta paralela al borde exterior de la mesa de trabajo.

Las campanas de flujo laminar y los gabinetes de seguridad biolgica deben ser colocados en ambientes controlados, sin corrientes de aire (Por ejemplo, las producidas al abrir puertas, caminar rpidamente frente a la campana) que puedan perturbar el flujo unidireccional. Deben ser reas de acceso restringido. Las reas limpias deben ser diseadas y construidas de manera de disminuir al mnimo la cantidad de partculas desprendidas, para ello se deben utilizar materiales adecuados. Debe haber la menor cantidad de muebles, repisas, etc. y no deben haber sitios de difcil acceso, que permitan la acumulacin de sucio.

Las superficies de los techos, paredes, pisos, luces, estantes, mesones, gabinetes, etc. deben ser lisas, libres de grietas o hendiduras, no deben liberar partculas y ser resistentes a los procesos de limpieza y desinfeccin. Las uniones de las paredes con el techo y el piso deben ser redondeadas para facilitar su limpieza e impedir la acumulacin de sucio. Las lmparas no deben sobresalir de los paneles y estar selladas al soporte. Los pisos deben ser de materiales resistentes y sin hendiduras. USO Y APLICACIN DE LOS EQUIPOS PARA PROTECCION DEL OPERADOR Y DEL AMBIENTE En los laboratorios de investigacin bacteriolgica y de virologa, se efectan trabajos con materiales peligroso para la salud, como cultivos de patgenos, virus, productos biolgicos desconocidos en cultivo de tejidos, materiales cancergenos, etc. En produccin farmacutica se trabaja con productos oncolgicos, hipnticos, etc. que demandan la proteccin del operador y del ambiente. Para lo anterior se utilizan diferentes equipos de seguridad biolgica definidos segn sean para la proteccin del operador y del ambiente de laboratorio solamente, o tambin para preservar al producto o cultivo del contaminante ambiental, mantenindose entonces un doble compromiso. Hay que considerar el hecho de que en un 30% de los casos las causas de las infecciones adquiridas son desconocidas en cuanto al medio de transmisin. Las infecciones por causas conocidas son en su mayora originadas por accidentes que son consecuencia de alguna forma de contacto directo, como inoculacin o ingestin. Ms difciles de reconocer son las causas originadas por aerosoles patgenos generado por pipeteo, transvasado, centrifugacin y manipulacin de cultivos. El reconocimiento del peligro de las enfermedades e infecciones adquiridas en el laboratorio ha llevado a la necesidad de desarrollar mtodos, procedimientos y equipos para llevar a un mnimo la exposicin del operador o agentes infecciosos conocidos o potencialmente peligrosos. Con el desarrollo de la ingeniera gentica y los laboratorios de bioingeniera y ADN recombinantes, la necesidad de equipos confiables de bioseguridad se ha incrementado al mximo en especial en laboratorios donde se trabaja con agentes exticos. La necesidad de aislacin de los mismos con el ambiente exterior ha llevado al equipamiento de bioseguridad a cumplir con condiciones extremas. Sin ir ms lejos, en nuestro pas la erradicacin de la fiebre aftosa hace que los laboratorios donde se trabaja con dicho virus sean sometidos a exigencias mximas. En casos de precauciones extremas se instalan dos filtros HEPA en serie evitndose el riesgo potencial de prdidas por accidente en uno de ellos. Actualmente se fabrican filtros ULPA (Ultra Low Penetration) definidos con eficiencias del 99.999% y 99.9999% en 0,12 micrones. Se ha verificado que el aerosol de mayor penetracin no es como se crea de 0,3 sino de 0,12 micrn, pero las diferencias de penetracin no son substanciales, razn por la cual sigue utilizndose la vieja definicin de filtro HEPA. La seleccin de equipos por sus clases I, II y III se hace en funcin de su riesgo, basndose en la monografa del NIH (Nacional Institute of Health) y del C.D.C. (Center for Disease Control) en EEUU, con agentes de riesgos de Niveles 1,2,3 y 4 siendo el nivel 1 de mnimo riesgo y el 4 de mximo riesgo.

 Nivel de riesgo 1: Agentes biolgicos de los que no se conoce como causantes de enfermedades en adultos sanos. No se requiere generalmente equipos de seguridad biolgica. Nivel de riesgo 2: Agentes asociados con enfermedades humanas. Peligrosas por : Autoinoculacin, ingestin, mucosas. Prcticas: Uso de equipos de seguridad biolgica clase I o clase II. Nivel de riesgo 3 :Agentes biolgicos locales o exticos con posibilidad de contaminar por transmisin por aerosoles enfermedades que puede tener consecuencias graves. Nivel de riesgo 4: Agentes extremadamente peligrosos y/o exticos, que pueden transmitirse por aerosoles. En la prctica se utilizan nicamente equipos de seguridad Clase III (cajas de guantes) con cuidados extremos con el personal, incluyendo a veces ropas con escafandras con presin positiva. Se requieres esterilizacin de todos los residuos por autoclave o incineracin y cambios de ropas esterilizadas. EL AMBIENTE DE LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD A diferencia de las reas limpias utilizadas para llenado asptico en la industria farmacutica, que se encuentran en zonas con inyeccin de aire por filtro HEPA y presin positiva para evitar la posibilidad de entrada de contaminantes a la zona limpia, donde se trabaje con patgenos de deber estar con presin negativa. La idea fundamental es que en toda operacin, sea de manipuleo, transvasado, agitacin, centrifugacin o pipeteo, habr una generacin de aerosoles. Cuando se trate de patgenos, deber evitarse la posibilidad de su salida al exterior por el riesgo que ello implica. Para ello el gabinete de seguridad biolgica, que llamaremos de primera barrera, deber ser instalado en ambientes de laboratorio que llamaremos de barrera secundaria. Dichos ambientes como habamos mencionado previamente, amn de presentar superficies lisas en paredes y pisos (con zcalos redondeados) que faciliten su limpieza y desinfeccin, debern tener una extraccin de aire a travs de filtros HEPA, tal que provoque un ambiente de presin negativa. Se evitar el escape al exterior de aerosoles en caso de algunas aperturas, accidentes o prdidas. La mayora de los gabinetes de seguridad biolgica fueron utilizados para aislar al experimento del investigador. Los equipos de aislacin de reas limitadas construidos fueron llamados Clase I, II y III por los laboratorios biolgicos del ejrcito de los EEUU establecidos en Fort Detrick, los que hicieron la mayor parte del trabajo de desarrollo de los mismos. EQUIPOS CLASE I Los gabinetes de seguridad Clase I son bsicamente campanas de extraccin de acero inoxidable que usan un caudal de aire que se dirige del ambiente hacia la mesa de trabajo y de all a un extractor con filtros HEPA, de manera de evitar la salida de aerosoles al ambiente del laboratorio. La mayor desventaja del gabinete Clase I, es que los materiales en experimentacin son expuestos a los contaminantes ambientales que entran al gabinete con el aire

ambiente. Ms an, el hecho de que el rgimen de desplazamiento del aire sea turbulento, hace posible la contaminacin cruzada dentro del gabinete. Los gabinetes Clase I son de seguridad parcial para trabajos con agentes de riesgos bajos o moderados, donde hay una necesidad de aislacin para el ambiente y el operador pero no para el producto. Permtasenos subrayar una vez ms que el gabinete no asla a los cultivos y materiales en experimentacin de los contaminantes del aire ambiente del laboratorio. La mayor diferencia entre los equipamientos Clase I y las campanas de extraccin de humos se debe al filtro HEPA, que es el elemento fundamental para evitar el escape de aerosoles al ambiente. La proteccin del personal se hace posible por el movimiento constante de aire del operador hacia el gabinete. El flujo controlado de aire en el rea de trabajo evita la salida de los contaminantes por la abertura frontal dando proteccin al personal. Siendo el flujo de aire inducido por un motoventilador centrfugo que extrae el aire del gabinete, se genera una presin negativa dentro del mismo, evitando la salida del aire contaminado hacia el ambiente exterior. La cabina Clase I que a continuacin del filtro HEPA tiene en la extraccin un filtro de carbn activado para la eliminacin de gases contaminantes que no son eliminados por el primero. EQUIPOS CLASE II Es de extrema importancia considerar dentro de los equipos de seguridad biolgica los Clase II. En stos se combinan dos necesidades o caractersticas: Se protege al producto del operador y del ambiente; y se protege al operador y al ambiente del producto. El equipo Clase II es de flujo laminar vertical pero el porcentaje del aire se recircula dentro del gabinete extrayndose el resto por un filtro HEPA. La cantidad de aire extrado es equivalente al caudal de aire de entrada en forma de cortina que asla el ambiente del gabinete del ambiente exterior. Una de las diferencias fundamentales del equipo de seguridad biolgica Clase II vs. los equipos comunes de flujo laminar, es que stos (sean de flujo horizontal o vertical) no aslan de ningn modo al ambiente de laboratorio de los aerosoles generados por el producto que los impulsa por la corriente de aire estril. Si bien todos los equipos de seguridad biolgica Clase II son de flujo laminar vertical, la inversa no es necesariamente cierta. Hay equipos de flujo laminar vertical para proteccin del producto que no protegen ni al operador ni al ambiente. GABINETES DE SEGURIDAD BIOLOGICA TIPOS DE GABINETES Desde el desarrollo de los primeros gabinetes Clase II, las modificaciones en los diseos ha llevado a la designacin de varios tipos de los mismos. Esta clasificacin ha originado una cierta confusin entre los usuarios, que trataremos de disipar en forma simple a continuacin. Es importante que el usuario que debe seleccionar un gabinete, y en la mayora de los casos hacer la especificacin que corresponde para su compra o licitacin, sepa elegir el equipo ms adecuado para su trabajo. De all la importancia del conocimiento de las distintas alternativas.

Como ejemplo de la confusin, siendo los equipos de seguridad biolgica Clase II de flujo vertical, en varias oportunidades se han hecho especificaciones en donde lo nico que se menciona es "gabinetes de flujo laminar vertical", sin dar las caractersticas y especificaciones de los equipos Clase II que tienen normas reconocidas internacionalmente como las NIH 03/112 y la NSF 49. Errores groseros, como el mencionado anteriormente, han resultado en la aplicacin de gabinetes de flujo laminar comn sin ninguna proteccin para el operador ni para el ambiente. En ese caso el flujo de aire se transforma en el vehculo de los aerosoles patgenos hacia el exterior del mismo. Todos los equipos Clase II tienen en comn la succin por una reja perforada que induce una cortina de aire, impidiendo la entrada o salida de aerosoles por la abertura frontal del equipo. La abertura frontal es de aproximadamente 20 cm. a lo largo de la mesa de trabajo . Las grandes diferencias entre estos equipos consisten en el porcentaje de aire recirculado y el aire de extraccin. En casos de generacin de gases y vapores que no son retenidos por el filtro HEPA ser necesario que la recirculacin del aire sea mnima o nula, porque de contrario aumentar la concentracin gaseosa en la zona de trabajo. Por otro lado tambin es importante definir la salida del aire de extraccin. Cuando se generan vapores o gases es necesario que el filtro de extraccin est conectado al exterior del edificio por conductos, para no contaminar el ambiente del laboratorio. Los equipos tipo A pueden estar conectados al exterior del edificio o tener la extraccin al ambiente del laboratorio. En cambio, todos los equipos tipo B tienen extraccin al exterior del edificio. EXTRACCION vs. RECIRCULACION Las mayores diferencias entre el tipo A, el tipo B y los gabinetes 100% extraccin se deben al porcentaje de aire que es extrado o recirculado, y la manera en la cual el aire de extraccin sale de la zona de trabajo. El gabinete tipo A tiene un 70% de aire en recirculacin constantes, mientras un 30% es extrado del gabinete por medio de un pleno comn. En el tipo Bl 30% del aire es recirculado y 70% es extrado directamente fuera de la zona de trabajo a travs del ducto, al exterior. Finalmente en los gabinetes B2 100% extraccin no hay recirculacin. Todo el aire es extrado directamente del rea de trabajo fuera del gabinete. GABINETES CLASE II - TIPO A En los gabinetes Clase II Tipo A, tales como Sterilgard , 30% del aire se extrae del filtro HEPA de extraccin mientras el restante 70% se recircula a travs del filtro HEPA de inyeccin al rea de trabajo. La cortina de aire inducida, que impulsada luego por el ventilador se bifurca en aire en flujo laminar sobre la mesa de trabajo, mientras que el resto es extrado por el filtro HEPA.

La salida de patgenos es evitada en la parte del frente del equipo por la cortina de aire, la que al mismo tiempo evita la entrada de aire contaminado a la zona de trabajo. En ambos equipos el volumen total de aire es impulsado por el motoventilador al pleno. En el mismo, el aire se bifurca evacundose un 30% a travs del filtro HEPA de salida, entrando nuevamente al aire ambiente libre de partculas, o expulsado al exterior del edificio por medio de conductos. El restante 70% del aire es impulsado a travs del filtro HEPA de inyeccin y entra al rea de trabajo estrilmente en rgimen laminar. Los equipos Tipo A pueden tener la extraccin del aire a travs del filtro HEPA de salida al interior del laboratorio o al exterior. Esto se indica en la Figura 10 donde se ven ambos casos. El esquema de la izquierda muestra un equipo con salida al interior del laboratorio mientras que el de la derecha muestra el mismo equipo con el filtro de salida conectado a una transicin que lo une al conducto hacia el exterior. EQUIPO CLASE II - TIPO B1 Como se ha visto anteriormente, el gabinete Tipo B1 clsico, extrae el 70% del aire, recirculando solamente el 30% del mismo. Adems este gabinete incluye en su diseo tres elementos particulares, a saber: 1. Todo el aire de extraccin es tomado directamente de la zona de trabajo y llevado por medio de un conducto al sistema de extraccin central del edificio al exterior, mediante un ventilador centrfugo situado en el techo. 2. El 30% del aire recirculado es filtrado a travs de un filtro HEPA inmediatamente debajo de la superficie de trabajo antes de ser recirculado. 3. Todo el aire no filtrado fluye al gabinete bajo presin negativa. Todas las reas de presin positiva estn libres de partculas debido a la ubicacin del filtro de inyeccin.

EQUIPO CLASE II - TIPO B2 El segundo tipo de los gabinetes Clase II tipo B es de 100% de extraccin total. Este tipo de gabinete es ampliamente utilizado en toxicologa y en aplicaciones similares, en las cuales efluentes con productos qumicos en fase gaseosa se encuentran presentes, pero el aire debe mantenerse en condiciones extremas de limpieza en cuanto a partculas. Como su nombre lo indica el 100% del caudal de aire que pasa a travs del gabinete va al exterior o donde el aire no origine riesgos. No hay recirculacin del aire dentro del gabinete. El aire entra a travs de un motoventilador en el gabinete y pasa a travs de un filtro HEPA al rea de trabajo en rgimen laminar vertical. El aire desciende hasta la mesa de trabajo de donde sale a un sistema separado de extraccin para el tratamiento apropiado. Simultneamente el aire que entra al gabinete por la reja perforada del frente es inmediatamente llevando al sistema de extraccin. GABINETES CLASE II - TIPO B3 Son gabinetes que tienen un 70% de aire en recirculacin y 30% de extraccin, razn por la cual no son aptos para trabajos con generacin de vapores o gases. Su

construccin es prcticamente igual a los equipos Clase II Tipo A. su nica diferencia con ellos es que mientras los equipos tipo A pueden ser con extraccin al interior del laboratorio, los Clase II Tipo B3 son nicamente aplicados para tener la salida al exterior del edificio. USO DE LOS GABINETES DE SEGURIDAD BIOLOGICA CLASE II Recordamos que los gabinetes de seguridad biolgica Clase II se disearon para evitar el escape de patgenos de la zona de trabajo al ambiente del operador, as como para mantener el material y los cultivos libres de la contaminacin ambiental. Estos equipos son un elemento importantsimo en la mayora de los experimentos con material biolgico. La salida de patgenos al exterior de la mesa de trabajo es evitada por la cortina de aire que circula por la abertura frontal hacia la reja perforada perimetral de la mesada y por la accin del filtro HEPA de extraccin. La cantidad de aire que entra por la reja de entrada es igual a la cantidad de aire extrada a travs del filtro HEPA de salida. La contaminacin del rea de trabajo, por otro lado, es evitada por la accin del flujo laminar originado en el filtro de inyeccin. El aire fluye en rgimen laminar hacia la mesa de trabajo y, amn de producir un rea limpia, barre los contaminantes generados por la actividad dentro del gabinete. El aire contina su recirculacin por el ventilador hacia el pleno. Los aerosoles se eliminan por los filtros HEPA a medida que el aire retorna hacia la zona de trabajo. Para utilizar adecuadamente este equipamiento es fundamental el manejo ptimo de los materiales, y minimizar la actividad por una estudiada secuencia de operaciones, procurando eliminar todo movimiento innecesario, para bajar a un mnimo las turbulencias y generacin de aerosoles. CERTIFICACION El primer paso al instalarse un equipo de Seguridad Biolgica Clase II, consiste en certificarlo, ya sea en cuanto a la integridad del gabinete y su estanqueidad, as como en el ensayo de integridad y la eventual reparacin en caso de que hubiera prdidas de los filtros HEPA. Adems debe medirse la uniformidad de flujo de aire . PREPARACION DE PROCEDIMIENTOS Idealmente deber hacerse una lista de procedimientos a seguir con una adecuada hoja de ruta, anticipndose los movimientos de materiales, equipos y procesos hasta cumplir con la tarea asignada. Una vez completada la lista de trabajos se comienza la operacin prendindose las luces, poniendo en marcha el ventilador, chequeando que las rejas perforadas estn sin obstrucciones y permitiendo el funcionamiento del equipo por unos 15 minutos. Algunos gabinetes estn equipados con lmparas ultravioletas que deben apagarse cuando el personal del laboratorio est ocupando el mismo. La accin bactericida de las lmparas ultravioletas se efecta cuando el gabinete est fuera de operacin, aunque se considera de la mayor importancia la desinfeccin de las superficies interiores del mismo por lavado de stas con una solucin de alcohol al 70%.

Los operadores debern lavarse cuidadosamente manos y brazos, antes y despus del trabajo en el gabinete. Se recomienda adems que los operadores utilicen guantes de goma con los puos del delantal de magas largas, ceido a las muecas. No se aconseja el uso de delantales de algodn, sino los de fibra sinttica. Lo antedicho baja a un mnimo el peligro de que la flora de la piel contamine el rea de trabajo y protege manos y brazos de la contaminacin de agentes peligrosos. Resumiendo los procedimientos de preparacin de los gabinetes de seguridad biolgica, tendremos que considerar: Certificacin de integridad de los filtros HEPA, balance de la cortina de aire, verificacin de la velocidad de desplazamiento del aire y certificacin de estanqueidad del gabinete. 2. La preparacin de los procedimientos y la hoja de ruta para minimizar los movimientos son fundamentales para una buena disposicin de los materiales y productos a ser usados en la experiencia. 3. El procedimiento de puesta en marcha consiste en prender las luces, verificar que las rejas de aire de entrada y extraccin no estn obstruidas y la puesta en marcha del ventilador. Deber permitirse operar al ventilador por un mnimo de 5 minutos antes de dar comienzo a las operaciones dentro del gabinete. 4. Una vez colocados materiales y productos dentro del gabinete sin que ninguno de estos obstruya el paso de aire generando turbulencias sobre los elementos crticos, y disponindolos de manera tal que las operaciones planeadas previamente se puedan hacer con comodidad, se dejar el gabinete en funcionamiento por alrededor de 5 minutos para permitir la eliminacin de aerosoles que pudieran encontrarse dentro del mismo. 5. Es importante que se disminuyan a un mnimo los movimientos del personal y equipos en la cercana del gabinete, as como la posibilidad de corrientes de aire provocadas por las puertas y ventanas abiertas. Es recomendable que tanto los equipos Clase II como los equipos de Flujo Laminar comn estn dispuestos en zonas del laboratorio lo ms alejadas posibles de las puertas de acceso y del movimiento del personal. 6. Todo movimiento es nocivo tanto dentro del gabinete como para la cortina de aire del mismo, por lo que tanto se insiste en el planeamiento adecuado para evitar movimientos innecesarios. Cada vez que brazos o manos se introducen con material al gabinete existe peligro de escape o entrada de aerosoles, lo que se evita con movimientos muy lentos y pausados del operador. La norma de la National Sanitation Foundation N.S.F. 49 especifica velocidades de la cortina de aire de 0.38 m/seg. (75 pies min.) para los equipos B1, B2, B3. Asimismo se recomienda una altura de la apertura por donde se introducen las manos de no ms de 20 cm (8"). 7. La eficiencia de la cortina de aire de un equipo Clase II. Para ello un tubo de acero introducido en el gabinete simula la accin de un brazo del operador, mientras dos

tomadores de muestras biolgicas ubicados en el exterior, verifican que no haya salida de aerosoles generados en el interior del gabinete. Al mismo tiempo, placas de Petri ubicadas en el interior, verifican la falta de penetracin de aerosoles portadores de microorganismos provenientes del exterior. GABINETES DE ALTA SEGURIDAD CLASE III Los gabinetes Clase III, originariamente llamados "cajas de guantes" por sus caractersticas constructivas, son gabinetes hermticos en los que el trabajo se efecta por medio de guantes. Tienen filtros HEPA de inyeccin y de extraccin en rgimen turbulento. El ambiente interior del gabinete se encuentra con una presin negativa con respecto al ambiente exterior de 12.5 mm de columna de agua, para prevenir el escape de aerosoles en caso de que hubiera una fisura accidental. Se utilizan tpicamente para trabajos con cultivos de agentes patgenos de alto riesgo o con virus exticos, entre ellos: Fiebres Hemorrgicas, Lasa, Ebula y Agentes Infecciosos clasificados como clase 4 por el CDC (Center for Disease Control, Office of Biosafety). Los gabinetes Clase III proveen una barrera fsica total entre ambientes y operador Se utilizan actualmente no slo en la prevencin de la contaminacin del operador y del ambiente, sino tambin como aisladores para llenado asptico de productos [Link] este ltimo caso, tratndose de llenado estril de productos farmacuticos la presin interior es negativa o positiva dependiendo de si debe mantenerse al ambiente de produccin libre de polvo que se procesa o si se asla una llenadora de lquidos inyectables. La manipulacin de los elementos en el interior del gabinete se hace por medio de guantes, lo que hace imposible la contaminacin por contacto. Los sistemas Clase III son imprescindibles en el control de contaminantes de alto riesgo y los generados por manipuleo, pesaje y dilucin de carcingenos qumicos. Tambin es necesaria su aplicacin cuando se trabaja con altas concentraciones de agentes de riesgo moderado o riesgo desconocido. Los sistemas Clase III cumplen con la mxima seguridad, el doble compromiso de salvaguardar el producto del contaminante exterior, y al exterior del producto, evitndose la contaminacin del ambiente de laboratorio y del personal. Un sistema de Clase III puede ser construido para aislar incubadoras, congeladoras centrfugas y otros materiales de investigacin. Autoclaves de doble puerta se conectan a los sistemas para la esterilizacin de productos, tanto al introducirse o al extraerse del sistema. Debe ponerse especial cuidado en el control peridico de la integridad de los filtros HEPA y su eventual sellado, as como el control de la hermeticidad de los gabinetes. Es prctica comn la utilizacin en la extraccin de dos filtros HEPA en serie, uno en el gabinete y otro en el conducto de extraccin. Como se mencion anteriormente, los equipos Clase III se estn usando en la industria farmacutica para la aislacin de procesos de fraccionamiento o envasado estril. En otras palabras, se los utiliza con el nombre de "Isolators" (aisladores) en procesos de produccin asptica.

En una lnea de llenado asptico de lquidos inyectables estriles, aunque el trabajo por medio de guantes es relativamente incmodo, la mayor ventaja de estos equipos es que se hace prcticamente imposible la contaminacin por contacto. Por otro lado, no habiendo introduccin de posibles contaminantes, la circulacin del aire por filtros HEPA en rgimen no laminar es suficiente, mantenindose la presin positiva en este caso. En este caso, la presin es negativa dentro del gabinete para proteger al personal y al medio ambiente del producto. Tiene agregado un tnel de entrada de viales bajo radiacin UV y valida por abertura de los viales ya llenados y cerrados. Otro aporte: Los diferentes tipos de cabinas de flujo laminar se disean con diferentes propsitos: a. Proteccin personal: proteccin del personal de los posibles agentes dainos del interior de la cabina. b. Proteccin del producto, experimento o cultivo que se encuentra en el interior de la cabina de los contaminantes exteriores o de la contaminacin cruzada con otros productos o cultivos situados en la misma cabina. c. Proteccin medioambiental : evitar la salida al medio ambiente de productos o agentes contaminantes. Las cabinas de flujo laminar horizontal son muy adecuadas para una buena proteccin del producto, pero no son adecuadas para el trabajo con materiales peligrosos o con algn tipo de riesgo pues el operador queda completamente expuesto. En las cabinas de flujo vertical, ms sofisticadas, se segura una buena proteccin del producto, y, dependiendo de su diseo se puede asegurar una proteccin total del operador. Son por ello ms adecuadas para el trabajo con agentes peligrosos.

Dependiendo de la importancia que se le conceda a cada uno de estos factores en el diseo de la cabina se trata de cabinas de clase I, II o III. 1. Cabina de clase I. Se trata de una unidad de contencin parcial adecuada para la manipulacin de agentes de bajo riesgo, donde existe una necesidad de proteccin del operario y del medio pero no del producto. Este es el tipo de cabinas normalmente denominadas "de gases", y no son de uso comn en el laboratorio de cultivo de tejidos. Figura de "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories", 3rd edit, CDC (Center for Disease Control) / NIH (National Institutes of Health), p. 142.

2. Cabina de clase II. Este tipo de cabinas protegen el producto, al personal y al medio ambiente. En general las cabinas de clase II se describen como un equipo de proteccin con un panel frontal de acceso y que mantienen un flujo laminar estable en el interior, con una filtracin HEPA para el aire recircularizado en cada ciclo y una filtracin HEPA del aire exhausto (de salida al medio). Los sucesivos diseos que se han realizado para cubrir necesidades diferentes permiten clasificar asimismo las cabinas de tipo II en tres subclases : a. Tipo A. En este tipo (figura 2.3.B) el 30 % del aire es eliminado en cada ciclo y el 70 % es recircularizado. El escape al medio de los agentes potencialmente peligrosos se previene mediante una corriente de aire entrante en una rejilla frontal. b. Tipo B. Se trata de una cabina de flujo laminar para uso general (figura 2.3.C), y en ella se recirculariza slo el 30 % del aire en cada ciclo, eliminndose el 70 % del aire restante. c. Tipo 100 % exhausto. Se trata de una cabina en la que el 100 % del aire de cada ciclo es eliminado hacia dispositivos que puedan retener los posibles agentes peligrosos (figura 2.3.D). Este tipo de cabinas se emplean fundamentalmente en laboratorios de toxicologa en los que se requieren reas de contencin limpias y eliminacin del aire posiblemente contaminado. Las diferencias entre estos tres subtipos se refieren especialmente a la proteccin del usuario, superior en el caso del tipo A, y a la eliminacin de la cabina de posibles contaminaciones de tipo aerosol, no retenibles por el filtro HEPA. La tipo A, que es la ms adecuada para el trabajo con agentes patgenos particulados (filtrables) es la menos adecuada para el trabajo con vapores o aerosoles peligrosos. Asimismo se ha de tener en cuenta que el funcionamiento correcto para la proteccin del producto y del personal depende de una correcta calibracin del instrumento, especialmente de las velocidades respectivas de entrada de aire en el sistema y de flujo vertical. El punto de calibracin o ajuste es dependiente del instrumento y debe ser realizado por personal especializado cada 6 a 9 meses de funcionamiento para asegurar la proteccin al usuario. Figura de "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories", 3rd edit, CDC (Center for Disease Control) / NIH (National Institutes of Health), p. 143.

3. Cabina de clase III. Se trata de una cabina de seguridad, estanca, para el trabajo con agentes biolgicos de alto riesgo. Permite mantener al agente patgeno en un ambiente completamente estanco. Permiten controlar tanto los contaminantes particulados como aerosoles y contaminantes gaseosos mediante sistemas de filtracin y disolucin de stos. Figura de "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories", 3rd edit, CDC (Center for Disease Control) / NIH (National Institutes of Health), p. 145.

Para garantizar el funcionamiento adecuado de estas reas se deben realizar controles fsicos y microbiolgicos. . Controles fsicos: se realizan con el fin de garantizar que estos parmetros estn dentro de las especificaciones, incluyen: _ Temperatura _ Humedad _ Recuento de partculas _ Velocidad del aire _ Integridad de los filtros HEPA _ Presin del rea Controles microbiolgicos: se realizan con el fin de determinar la cantidad de microorganismos en el aire y en las superficies del rea, lo cual influye sobre la calidad microbiolgica de los productos elaborados en la misma. La evaluacin de la calidad microbiolgica del aire puede realizarse mediante: Mtodos activos: Utilizan dispositivos para tomar un volumen definido de aire y luego determinar las unidades formadoras de colonias (ufc) presentes en l. Un ejemplo de estos dispositivos es el Dispositivo Centrfugo de Reuter, el cual tiene una turbina que aspira el aire y hace que las partculas impacten sobre una tira de agar colocada en la pared interna de la turbina. Es porttil y funciona con bateras.

Dispositivo Centrfugo de Reuter (RCS)

_ Sedimentacin en placas de Petri: es uno de los mtodos ms utilizados para determinar la calidad microbiolgica del aire. Las placas contienen un medio nutritivo slido. Se exponen un tiempo determinado en sitios establecidos y luego se incuban. En este mtodo los microorganismos viables presentes en el aire, son llevados a la superficie del medio slido por las corrientes de aire presentes en el rea. s un mtodo fcil de realizar y econmico que nos permite obtener informacin sobre los microorganismos capaces de sedimentar del aire. La evaluacin de la calidad microbiolgica de las superficies puede realizarse mediante: _ Placas de contacto (RODAC): Son placas llenas con un medio nutritivo slido con una superficie convexa que se presionan sobre la superficie plana a evaluar. Se utiliza para superficie planas. Placa RODAC

_ Hisopos: El hisopo humedecido se frota, en tres direcciones, sobre un rea predeterminada, luego se coloca en un diluente para liberar los microorganismos presentes y de all se toma una alcuota y se siembra en un medio slido. Se utiliza para superficies irregulares o de difcil acceso.