AREA DE SANIDAD VEGETAL

INFORME DE PRCTICA N: 1

TEMA

: COLORACIONES

DOCENTE

: Mcblgo.Btcnlgo.Dr.Sc. CESAR SAMUEL LPEZ

ALUMNO

: PIZARRO CAMARENA, Darwin

TINGO MARIA 2010

I.- INTRODUCCION Un procedimiento til para el examen de muestras es el estudio microscpico de preparaciones fijas - extensiones o frotis - preparados a partir de ellas y coloreadas por el mtodo adecuado. Esto permite eliminar el movimiento que presentan los microorganismos en las preparaciones en fresco. La retencin de colorantes de alquitrn de hulla por las bacterias permite su fcil observacin bajo el microscopio. La forma ms comn de preparar un frotis es extender un poco de muestra sobre un portaobjetos desengrasado, con el asa bacteriolgica, pero tambin se puede hacer con un hisopo presionando el portaobjetos sobre la muestra impronta. Dependiendo del tipo de microorganismo o estructura del mismo que se desee observar es el tipo de tincin que se emplea. P. ej. Tincin Simple, Diferencial de Gram, Negativa, para cpsulas (Mtodo de Anthony), para flagelos, para endosporas, para ncleo, para bacterias cido alcohol resistentes (Tincin de Ziehl Neelsen), entre otras. Los colorantes son productos qumicos sintticos del tipo de la anilina capaces de combinarse con una gran variedad de sustancias impartindoles color. El color es impartido por su estructura qumica. Los colorantes de alquitrn de hulla usan bases de anillos aromticos tales como benceno, naftaleno o antraceno. Varios grupos qumicos son ligados a los anillos aromticos para impartir los diferentes colores. Los grupos productores del color son llamados cromforos, siendo los ms comunes pquinona y diazo. Ciertos grupos qumicos llamados auxocromos, tales como los grupos amino e hidroxilo ayudan a fortalecer a los cromforos.

OBJETIVO Conocer el procedimiento para preparar coloraciones y los diferentes mtodos, as como su utilidad en el estudio microscpico de los microorganismos.

II.- REVICION LITERARIA

Tincin o coloracin de bacterias Los procedimientos que ponen de manifiesto diferencias entre las clulas bacterianas o en partes una clula se conoce como tcnica de coloracin diferencial. Son algo ms que elaboradas que la tcnica simple en la que las clulas se someten a una sola solucin colorante o reactivo colorante. Las tinciones se combinan qumicamente con el protoplasma bacteriano; si la clula no ha muerto el proceso termina de hacerlo. El mtodo, por consiguiente, es bastante drstico y puede producir artificios. Las tinciones ms frecuente son sales. Las tinciones bsicas consisten en un catin coloreado unido a un anin incoloro, mientras las cidas constituyen exactamente lo contrario, unido a dos cationes. Las clulas bacterianas son abundantes en cidos nucledos, los cuales portan cargas negativas en formas de fosfatos. Los colorantes cidos no tien a las clulas bacterias, y por tanto, pueden utilizarse para teir al fondo con un color de contraste. Las tinciones bsicas tien uniformemente en las clulas bacterianas, a menos que antes de destruyan el ARN del citoplasma. Tambin se pueden usar tcnicas de tincin especiales para flagelos, membranas celulares, paredes celulares, grnulos, nucletidos y esporas. Tincin acidorresistente Las bacterias acidorresistentes son las que retiene la carbolficsina, aun cuando intente descolorarlas con un mezcla de alcohol y cido clorhdrico. Las bacterias acidorresistentes se tien de color rojo; el resto adquiere el color del colorante de contraste en este caso el verde o azul. Tincin negativa Este procedimiento consiste en la tincin de fondo con unos colorantes cidos para dejar las clulas incoloras en contraste. Comnmente se utiliza el colorante negro llamado nigrusna. El mtodo sirve para observar bacterias o estructuras que difcilmente se tien con las tcnicas directas. Tincin de los flagelos Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder ser visibles en el microscopio de luz. Sin embargo si se tratan con una suspensin coloidal inestable de sales de cidos tnico para formar un precipitado denso en la pared celular y en los flagelos, se pueden poner de manifiesto su presencia y disposicin en las clulas. De esta manera el dimetro aparenta que la estructura aumento de tamao con fucsina bsica los hace visibles en el microscopio ptico. Tincin de la cpsula La cpsula se pone de manifiesto mediante una coloracin negativa o una modificacin de esta. Uno de los mtodos de tincin de la cpsula incluye el tratamiento de las bacterias con un solucin caliente de cristal violeta seguido por un lavado con una solucin de sulfato de cobre. El sulfato de cobre tambin imparte color al fondo y esto resulta en que la clula y el fondo aparezcan teido en color azul oscuro mientras la cpsula aparece de color azul plido. Tincin del ncleo

1 Los ncleos se pueden teir por la tincin de Feulgen la cual es especfica para el ADN. Tincin de las esporas Las esporas se observan de la manera ms simple como cuerpos refringentes intracelulares en suspensiones de bacterias sin teir, la parte de las esporas relativamente impermeable, las esporas comnmente se tien con verde de malaquita y carbolfucsina o carbolfucsina Tincin Gram. Una caracterstica taxonmica importante de las bacteria es su respuesta a la tincin a de Gram esta caracterstica parece ser fundamental, reaccin a la tincin se correlaciona a con muchas otras propiedades morfolgicas en maneras relacionadas filogenticamente. Microorganismo potencialmente gram positivo puede verse como tal cuando concurre un conjunto de particular de condiciones ambientales en un cultivo joven. El procedimiento para tincin de Gram se inicia con la aplicacin de un colorante bsico el cristal de violeta. Luego se aplica una solucin de yodo en este momento todas las bacterias de tien de azul. Continuacin las clulas se tratan con alcohol las clulas grampsitiva contienen el cristal violetayodo y permanecen de color azul; en cambio las gramnegativa se descoloran completamente por el alcohol. Por ltimo se aplican un colorante de contraste safranina, que es un colorante rojo. De esta manera, las clulas

III.- MATERIALES Cuatro porta objetos Gradilla asa bacteriolgica. mechero bunsen. cerillos encendedor. lpiz graso. papel absorbente. hisopos. microscopio. aceite de inmersin. cristal violeta. azul de metileno. verde de malaquita. safranina. cultivo en medio slido. cultivo en medio lquido.

IV.- PROCEDIMIENTO

A. COLORACION SIMPLE:

MUESTRA LIQUIDA REALIZAR MEZCLA Y EXTENDER

SOMETER LA EXTENSION AL CALOR PARA FIJAR

MUESTRA SOLIDA (CULTIVO EN AGAR) COLORANTE Ej. Azul de Metileno

Portaobjetos con 1 gota de S.F.

AGREGAR 2 3 gts. del Colorante sobre la preparacin

LAVAR

SECAR

DEJAR por unos 3 a 5

Colocar 1 2 gts. de aceite de cedro OBSERVAR AL MICROSCOPIO CON OBJETIVO DE INMERSION 1000X

MICROORGANISMOS SE OBSERVAN TEIDOS CON EL COLOR DEL COLORANTE

B. COLORACION DIFERENCIAL (TECNICA DE GRAM)

1. CRISTAL VIOLETA (COLORANTE PRINCIPAL)

AGREGAR 2 3 gts. del Colorante sobre la preparacin

LAVAR

DEJAR por 1 a 3

2. RVO. LUGOL (MORDENTE)

AGREGAR 2 3 gts. del reactivo sobre la preparacin

LAVAR

DEJAR por 1 a 3

3. ALCOHOL ACETONA (DECOLORANTE)

AGREGAR 2 3 gts. del reactivo sobre la preparacin Realizar mov. vaiven

LAVAR

DEJAR por unos 15 hasta decoloracin total

-34. SAFRANINA (COLORANTE de CONTRASTE) AGREGAR 2 3 gts. del Colorante sobre la preparacin DEJAR por unos 30 LAVAR SECAR

Colocar 1 2 gts. de aceite de cedro MICROORGANISMOS SE OBSERVAN COMO GRAMPOSITIVOS (AZULES) O GRAMNEGATIVOS (ROJOS) OBSERVAR AL MICROSCOPIO CON OBJETIVO DE INMERSION 1000 X

V.-

RESULTADOS:

Observado en prctica: Muestra: pseudomonas acrugenosa o gram (-). o Color violeta.

Observaci

100x

Muestra: estafilococos aureas

Observacin 100X

VI.- CONCLUSIONES Si se pudo observar las muestras con gran facilidad gracias ala tcnica de coloracin que se utilizo en el laboratorio de microbiologa.

VII.- BIBLIOGRAFIA Canece, Arqumedes. Manual de microbiologa y parasitologa mdica, 5ta edicin. Asuncin, Paraguay.

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