GPT (ALT)-LQ
GPT (ALT)
NADH. Cintico UV. IFCC rec.Liquido
Determinacin cuantitativa de alanina aminotransferasa GPT (ALT) IVD
Conservar a 2-8C
PRINCIPIO DEL METODO La alanina aminotrasferasa (ALT) inicialmente llamada transaminasa glutmico pirvica (GPT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino de la alanina al -cetoglutarato con formacin de glutamato y piruvato. El piruvato producido es reducido a lactato en presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) y NADH: L-Alanina + -Cetoglutarato Glutamato + Piruvato Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+ La velocidad de disminucin de la concentracin de NADH en el medio, determinado fotometricamente, es proporcional a la concentracin cataltica de ALT en la muestra ensayada1. SIGNIFICADO CLINICO La ALT es una enzima intracelular, se encuentra principalmente en las clulas del hgado y el rin. Su mejor aplicacin es en el diagnstico de las enfermedades del hgado. Se observan niveles elevados en enfermedades hepticas como la hepatitis, enfermedades de los msculos y traumatismos. Cuando se emplean en conjuncin con la AST ayuda en el diagnstico de infartos de miocardio, ya que el valor de la ALT se mantiene dentro de los lmites normales y aumenta en los niveles de AST1,4,5. El diagnostico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio. REACTIVOS R1
Tampn
CALCULOS A/min x 1750 = U/L de ALT
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 mol de substrato por minuto, en condiciones estndar. La concentracin se expresa en unidades por litro (U/L).
Factores de conversin de temperaturas Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por: Temperatura de medicin 25C 30C 37C 25C 1,00 0,76 0,55 Factor para convertir a 30C 1,32 1,00 0,72 37C 1,82 1,39 1,00
ALT
LDH
CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la tcnica. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA 25C 30C 37C Hombres Hasta 22 U/L 29 U/L 40 U/L Mujeres Hasta 18 U/L 22 U/L 32 U/L En recin nacidos normales se han descrito valores de referencia hasta el doble del de los adultos, debido a su inmadurez heptica, estos valores se normalizan aproximadamente a los tres meses. Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CARACTERISTICAS DEL METODO Rango de medida: Desde el limite de deteccin 3,9 U/L hasta el limite de linealidad 260 U/L. Si la concentracin de la muestra es superior al limite de linealidad, diluir 1/10 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10. Precisin: Media (U/L) SD CV (%) Intraserie (n= 20) 33,2 128 1,00 1,47 3,02 1,14 Interserie (n= 20) 31,3 129 0,94 1,57 3,00 1,22
4,5
R2
Substrato
TRIS pH 7,8 Lactato deshidrogenasa (LDH) L-Alanina NADH -Cetoglutarato
100 mmol/L 1200 U/L 500 mmol/L 0,18 mmol/L 15 mmol/L
PREPARACION Reactivo de trabajo (RT) Mezclar: 9 vol. (R1) Tampn + 1 vol. de (R2) Substrato Estabilidad: 21 das a 2-8C o 72 horas a temperatura ambiente.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partculas y turbidez. - Absorbancias del Blanco a 340 < 1,00.
Sensibilidad analtica: 1 U/L = 0,00052 A / min. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado. INTERFERENCIAS Los anticoagulantes de uso corriente como la heparina, EDTA oxalato o fluoruro no afectan los resultados. La hemlisis interfiere con la 1 determinacin . Se han descrito varias drogas y otras substancias que 2,3 interfieren en la determinacin de la ALT . NOTAS SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este reactivo en distintos analizadores. BIBLIOGRAFIA
1.
2. 3. 4. 5.
MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 340 nm. - Bao termostatable a 25C, 30C 37C ( 0,1C) - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio. MUESTRAS 1 Suero o plasma . Estabilidad de la muestra: 7 das a 2-8C.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . .25C / 30C / 37C 2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada o aire. 3. Pipetear en una cubeta: RT (mL) Muestra (L) 1,0 100
Murray R. Alanine aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1088-1090.
Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001. Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. AACC 1999. Tietz N. W. et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995. R1 R2
Cont.
PRESENTACION
Ref: 41274 Ref: 41275 60 mL 7 mL 225 mL 25 mL
4. Mezclar, incubar 1 minuto. 5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos. 6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (A/min).
BEDTT26 Ed.2004
R1 R2
SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
