TCNICAS HISTOLOGICAS

INTRODUCCIN: Histologa, estudio microscpico de los tejidos grupos de clulas similares interrelacionadas que cooperan para llevar a cabo una funcin biolgica determinada de animales y plantas. El progreso de la histologa ha sido lento hasta el siglo XIX, en el que el microscopio empez a adquirir una forma parecida a la actual y el microtomo, un instrumento que permite realizar finos cortes de tejidos, fue inventado por el fisilogo checo Jan Evangelista Purkinje.

En el cuerpo de un animal se distinguen cinco grupos principales de tejidos: el epitelio,

que se encuentra en todas las superficies de revestimiento corporales y en las reas de secrecin, el tejido conjuntivo, que incluye los huesos, los cartlagos y otras estructuras de soporte; el tejido muscular, el tejido nervioso.

La tcnica histolgica es una serie secuencial de pasos a travs de los cuales una muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes coloreados capaces de ser observados al microscopio.

Sinopsis General Paso Obtencin Objetivos Proveer el material para su uso en el microscopio Medios usuales Biopsia Reseccin quirrgica Autopsia Preservar el material Fijacin Eliminar los microorganismos Formol al 10% Bouin Glutaraldehido Inclusin Embeber el material en un medio fcil de cortar en lminas muy delgadas Corte Lograr lminas muy delgadas que sean atravesadas por la luz Parafina - Acrlicos - Resinas Epoxi Micrtomo rotatorio -M. de

deslizamiento - Ultra micrtomo Coloracin Visualizar los tejidos - Identificar molculas en ellos (Histoqumica) Montaje Preservar el corte, mantenindolo aislado del aire y deshidratado Hematoxilina eosina

- Tricrmicos - Histoqumica Blsamo del Canad - Medios plsticos

Proceso
OBTENCIN:

Consiste en la provisin del material que se desea estudiar por medio del microscopio. El mtodo seleccionado debe ser el adecuado para cada tipo de material. afilado para evitar aplastar sus elementos, as como se debe evitar cualquier otro tipo de maltrato en su manipulacin. Los principales mtodos empleados son: la biopsia, la reseccin quirrgica y la autopsia. Cualquiera sea el procedimiento empleado para la obtencin, el material que resulta del mismo debe ser inmediatamente fijado o congelado para evitar los procesos de autodestruccin de las clulas conocidos como autolisis. En todos los casos el instrumental con el cual se seccionan los tejidos debe estar muy

Necropsia: Examen u obtencin de tejido de un organismo muerto. Biopsia:(del griego bios= vida y oasis = visin) Examen u obtencin de tejido de un
absorcin, por raspado, por trepanacin. organismo vivo. Puede ser inscisional, excisional, por sacabocado, por puncin y

biopsia inscisional: se realiza seccionando con instrumentos cortantes como el bistur. biopsia por punch: el punch es un instrumento filoso con forma de sacabocados que se utiliza para tomar biopsias de piel. con agujas del tipo intramuscular (micro biopsia). biopsia por puncin: se realiza con agujas de biopsia y recientemente tambin biopsia endoscpica: se hace a travs de endoscopios, que son instrumentos flexibles que permiten la observacin de algunas cavidades internas del organismo. Recomendaciones:

-para la identificacin de la muestra se usa una cartulina resistente donde se escribe con lpiz las indicaciones (rgano, porcin, etc) para evitar la confusin de muestras. -Los trozos de rganos tubulares se seccionan directamente con tijeras, los macizos han de con una hoja de afeitar o de bistur (se utilizan a manera de serrucho sin presionar). FIJACIN:
Tiene como finalidad la conservacin la morfologa y composicin qumica de las clulas y del tejido, dura alrededor de 12 hrs. Dependiendo del fijador y del tamao de pieza (espcimen).

ser desprendidos con las tijeras. Extraidos los rganos deben seccionarse en fragmentos

en el estado viviente se conserven con un mnimo de modificaciones, a lo largo del tiempo y de los subsiguientes pasos de la tcnica.

Consiste en producir la muerte de las clulas, de manera tal que las estructuras que posean stas

Los fijadores deben actuar sobre fragmentos relativamente pequeos de tejidos (como regla general menos de 1 cm cbico), para que la difusin del fijador desde las superficies hasta la parte central del bloque tisular se haga en un tiempo reducido.

Una buena fijacin debe: inmovilizar la clula

conservar exactamente todas las partes constitutivas

No hacer aparecer artificialmente otros detalles en la estructura. (Tal fijacin es por ahora imposible de realizar) Por eso debemos buscar una serie de cualidades en el fijador a utilizar que nos acerquen lo ms posible al fijador ideal

Propiedades de los fijadores: o o o o Facilitan la coloracin posterior Retraen los tejidos

Inhiben el crecimiento bacteriano y por lo tanto la putrefaccin Poseen olor desagradable e irritan la piel y las mucosas

o o

Producen alteraciones importantes a nivel molecular

Producen alteraciones importantes a nivel ultraestructural

La eleccin del fijador adecuado est dictada por el propsito perseguido y deben tenerse en cuenta las propiedades

FIJADORES Fsicos - Calor - Desecacin - Microondas Qumicos simples Alcoholes - Metanol - Etanol

Aldehdos

- Formaldehdo: Es uno de los mejores fijadores para el sistema nervioso y para las mitocondrias. - Glutaraldehido

cidos

- Actico: Aumenta el contraste entre ncleo y citoplasma.

- Pcrico: Muy penetrante (no se emplea solo) Se fija con intensidad al citoplasma, facilita todas las coloraciones. Contrae pero endurece poco.

- Osmico: Fija sin precipitar, adems impide la precipitacin por el alcohol durante

deshidratacin. Marta rpidamente a la clula y fija bien el citoplasma, pero no muy bien el ncleo. Buen fijador de sustancias grasas y de la Sales mielina. Es poco penetrante y difusible. destruye los ncleos.

la

Bicromato de potasio: fija bien el citoplasma, pero

 Bicloruro de mercurio Mezclas qumicos de Carnoy Alcohol etlico + cido actico

Bouin: Es uno de los cido pcrico + mejores fijadores para el estudio los penetra rpidamente en fijador general. Es muy adecuado coloraciones. para las del glucgeno, Formol +

tejidos, es un buen Acido actico

Zenker

Bicromato de potasio + Bicloruro de mercurio + cido actico

Masson Produce

mayory: Produce poco

encogimiento.

lisis de glbulos rojos y disminucin de hierro, los tejidos no deben

permanecer en el mas de 24 hrs porque se vuelven duros Deshidratacin y quebradizos. con

alcohol 80 directamente.

FaGlu

Formaldehido + Glutaraldehdo

Equilibrio fsico:
Cuando una pieza es sumergida en un fijador, pueden suceder 3 cosas: La pieza cae al fondo, en este caso el fijador es hipotnico, y la fijacin tiene bastantes probabilidades de ser incompleta o irregular. La pieza permanece flotando en la superficie, el fijador es hipertnico, muy denso y las clulas se contraen. La pieza se sumerge, pero queda por encima del fondo del recipiente, hay equilibrio fsico y la fijacin ser buena si los ingredientes del fijador fueron bien elegidos.

DESHIDRATACIN
Los tejidos contienen grandes cantidades de agua, tanto intracelular como extracelular, que debes ser eliminada y remplazada por parafina.

Detencin de la fijacin: Una vez transcurrido el tiempo de la fijacin deseado es preciso detenerlo rpidamente El fijador que rodea a la pieza puede ser eliminado por: a) agua b) alcohol

a)

Es imprescindible hacerlo despus de la fijacin con cido , bicromato de potasio y cido smico.

Se hace en agua corriente de 2-24 horas. b) Piezas que han estado en alcohol, cido pcrico o formol, se llevan directamente al alcohol 70% o 80% llevndose as acabo el lavado y el inicio de la deshidratacin.

La deshidratacin se realiza por medio de un reactivo anhdrido pero vido de agua, puede utilizarse la acetona o el alcohol etlico La deshidratacin se hace de forma progresiva con sucesivos baos de alcohol, cada vez menos hidratados 70-80-90-96-100 Tiempos de permanencia en cada lquido: Alcohol 70 las piezas pueden permanecer varios das Alcohol 96 2 baos en un lapso de 24 h. Alcohol 100 3 baos de 1 h c/u Como han de introducirse las piezas:

Las piezas se han de envolver en gasas a manera de bolsitas, colocarlas en cartulina, etc. Par la deshidratacin debern emplearse frascos anchos y de cierre hermtico. Los recipientes deben ser agitados peridicamente para que la mezcla de alcohol y agua sea la ms perfecta posible. En cada etapa la cantidad de deshidratante debe ser superior a 10 veces, el volumen del tejido a deshidratar.

ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIN
Se realiza en beazol, xiloltuluol, solventes del alcohol y de la parafina, tiene como finalidad embeber la pieza con una sustancia miscible con la parafina, hace que el tejido se transparente, dura de 1-6 hrs.

INCLUSIN CON PARAFINA FUNDIDA

La parafina penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y tambin en el interior de la clula. Embebiendo el tejido y hacindolo ms fcil la obtencin de cortes microscpicos, dura de 30 min- 6 hrs. La parafina es a temperatura ambiente solida. Una temperatura mayor de 65 llega a disolverla, producindose vapores de olor desagradable, inflamables y tambin txicos. Se emplean 4 vasijas con parafina disuelta, En cada vasija ha de haber un volumen suficiente como para cubrir por completo las piezas que se han de colocar. El recipiente numero 1 debe tener parafina ya fundida a la que se mezclara una pequea cantidad de solvente, el 2 y 3 deben contener parafina pura, que poco a poco ir adquiriendo algo de solvente cuando las piezas vallan pasando por ellas. El 4 debe tener parafina completamente pura.

Tiempo de cada bao: Depende un poco del tamao de la pieza. En cada recipiente pueden estar de 2 a 3 horas.

Lo que se ha hecho hasta ahora se conoce con el nombre de impregnacin La inclusin consiste en encerar cada pieza dentro de un bloque de parafina pura. (Pueden ser elaborados con cartulina o comprarse de metal, cada pieza debe tener su propio molde, por lo que habr de considerarse el costo-beneficio)

CONFECCIN DEL BLOQUE

La pieza se coloca en un molde rectangular que contiene parafina fundida. Como finalidad es la obtencin del bloque de parafina a forma rectangular para ser cortado en el micrtomo. La forma de los bloques debe ser perfectamente de pirmide truncada. Las caras opuestas han de resultar opuestas entre s, lo mismo que las aristas

SECCIN CON EL MICROTOMO Las secciones finas y parejas se obtienen con el micrtomo. Este aparato consiste bsicamente en una base pesada que soporta una superficie por las que se desliza una cuchilla.

Microtomo de deslizamiento (es el ms usado): 1) Pegar el bloque a un taco de madera: con la ayuda de una esptula derretir parafina para pegar el bloque 2) Colocar el taco de madera entre las ramas del micrtomo 3) Apretar con el tornillo de presin hasta que est muy firme 4) Deslizar el filo de la cuchilla del micrtomo hasta que est ubicada sobre el bloque 5) Elegir el espesor del corte mediante el tornillo micromtrico 6) Deslizar la cuchilla 7) Recoger con un pincel hmedo el corte y depositarlo en agua contenida en una bandeja o cubeta

MONTAJE Y TINCIN

Los cortes se colocan sobre portaobjetos a los que se les ha agregado una pequea

cantidad de Albmina, la cual acta como adhesivo. La parafina se elimina en un solvente orgnico, de nuevo se incluyen en Xilol, y la muestra se rehidrata hacindola pasar por una serie de graduaciones decrecientes de alcohol etlico hasta llegar a una solucin 100% de agua.

Colorantes
Hematoxilina-eosina La hematoxilina es un colorante catinico mientras que la eosina es un colorante aninico perteneciente a los xantenos. Se teirn los ncleos de azul, citoplasmas en rosa, msculo en tonos rojizos a rosados fucsia, glbulos rojos en naranja o rojo y la fibrina en rosa intenso. Tcnica:
1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60 Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. 4- Hematoxilina5min. Alcohol de 96. Alcohol absoluto5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 7-Deshidratar. 3- Lavar en H2O destilada. Alcohol de 70 5- Lavar en H2O2min. 6-Eosina alcoholica-1min. Alcohol absoluto. Xilol. 8- Montaje.

Giemsa La tcnica radica en la disociacin controlada de las sales de eosinato que ocurre al insolubilizar la mezcla del giemsa por disolucin en H2O destilada; la eosina as liberada colorea el componente extracelular y determinadas estructuras aliadfilas; y los derivados de azur, las estructuras de carcter basfilo. La cromatina nuclear adopta una tincin azul violeta. Tcnica:
1-. Desparafinar. Estufa durante 30 min. a 60C Sumergimos en xiloldurnate 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4- Solucin Giemsa al 20 %- 45 min. 5 -Lavar con agua corriente 5-10min. 6- Alcohol 70 - 2-3 pases rpidos 8- Alcohol isoproplico - 3 min 9 - Alcohol isoproplico. 3 min. 10-Xilol 11- Montar. 7- Alcohol de 96- 2-3 pases rpidos

Tricromico de Masson Es una tcnica para la coloracin de fibras colgenas y elsticas. Se observan tres colores distintos; tejido conjuntivo de verde, tejido muscular de verde pardo, eritrocitos de rojizo, ncleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa. Tcnica:
1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4- Hematoxilina de Weigert 5 min. 5- Lavar con agua corriente 10 min. 6- Fucsina de Ponceau 5 min. 7- cido fosfomolbdico 5 min. 8- cido fosfomolbdico 5 min. 9- Verde luz 5-7 min. 10-Deshidratar. Alcohol de 70 Alcohol de 96. Xilol. 11- Montaje.

RESULTADOS: Tejido conjuntivo: verde Tejido muscular: pardo Tejido epitelial: rojizo.

Tincin para reticulina( GOMORI MODIFICADO ) Un mtodo de impregnacin con plata que tie de negro las fibras de reticulina. Es una tincin muy til para evidenciar lesiones de la pituitaria y malformaciones vasculares. Tcnica

1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4- Permanganato potsico al 1%-- 1 min. 5- Lavar con agua destilada 1-2 pases 6-Metabisulfito potsico al 2% - 1 min. 7- Lavar con agua destilada 1-2 pases 8 - Alumbre frrico al 2% -- 2 min. 9- Lavar con agua destilada - 1-2 pases. 10- Reactivo de Wilder . 2 min.

11-Lavar con agua destilada 1-2 pases. 12- Formol al 10 %-- 5 min. 13- Lavar con agua destilada 1-2 pases. 14- Cloruro de oro al 0.2%-- 2 min. 15 Lavar con agua destilada 1-2 pases. 16Metabisulfito potsico al 2%--- 2 min. 17- Tiosulfato sdico al 2%-- 1 min. 18- Lavar con agua corriente 5 min. 19-Deshidratar. Alcohol de 70 Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol. 20- Montaje.

PAS Se usa como tcnica de rutina para observar las membranas basales que separan el tejido epitelial del corin. Tie los ncleos de color azul, el glucgeno de color prpura y el material PAS + (polisacridos simples, mucopolisacridos neutros, mucoprotenas, glucoprotenas y glucolpidos) rojo rosa.
SOLUCIONES: 1 .- cido peridico al 0.5 % 2.- Hematoxilina de Mayer 3.- cido sulfuroso : Metabisulfito sdico al 10 % ----------------6 ml. cido hidroclrico 1N al 10 % ---------------5 ml Agua destilada ----------------------------------100 ml 4.- Reactivo de Shiff Fucsina bsica ----------------------------------1 gr. Metabisulfito sdico anhidro ---------------- 1 gr. Agua destilada ----------------------------------200 ml cido hidroclrico 1 N ------------------------20 ml Hervir el agua destilada, aadir la fucsina bsica, agitar y enfriar a 50C. Filtrar y aadir cido hidroclrico, enfriar a 25C Aadir metabisulfito sdico. *sta solucin est lista para usarse cuando se torna casi incolora, lo cual puede llevar hasta 2 das, en un lugar oscuro.

TCNICA: 1.- Desparafinar e hidratar. 2.- cido peridico al 5 % -----------------------5 min. 3.- Lavar en agua corriente ---------------------5 min.

4.- Reactivo de Shiff ---------------------------- 15 min. 5.- Bisulfito sdico al 2 % ---------------------- 5 min. 6.- Lavar en agua corriente --------------------5 min. 7.- Hematoxilina de Mayer ---------------------10 min.

8.- Lavar con agua corriente ------------------5 min. 9.- Deshidratar. 10.- Aclarar con xilol 11.- Montar.

Elstica de Van Gieson Es una tcnica para la coloracin de fibras colgenas y elsticas. El colgeno parece que capta un colorante cido. Tie el colgeno de rojo, ncleos y fibras elsticas de negro y citoplasma de amarillo.
SOLUCIONES: 1.- Hematoxilina de Verhoeff: 2.- Solucin de Picrofucsina: - Hematoxilina alcohlica: - Fucsina cida al 1 % ----------------------------1.3 ml Hematoxilina ------------------------------------10 gr. - cido pcrico a saturacin ---------------------- 9.7 ml Alcohol96 -------------------------------------100 ml - Cloruro frrico al 10 %: Cloruro frrico ----------------------------------10 gr. Agua destilada ----------------------------------100 ml - Yoduro potsico al 10 %: Yoduro potsico --------------------------------10 gr. Agua destilada ----------------------------------100 ml -Alcohol 50 TCNICA: 1.- Desparafinar e hidratar 6.- Picrofucsina -------------------1 pase 2.- Hematoxilina de Verhoeff ---------30 min. 7.- Deshidratar 3.- Lavar ------------------------------------1 pase 8.- Aclara con xilol 4.- Cloruro frrico al 1 % ---------------1 pase 9.- Montar 5.- Lavado en agua corriente ---------1 pase

Azul Alcian se ha comprobado que usando el azul alcin en condiciones de pH en torno a 2,4 -2,6 se colorean los mucopolisacridos cidos sulfatados y los carboxlicos.
1-. Desparafinar. Estufa durante 30 min. a 60C Sumergimos en xiloldurnate 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4-. Hematoxilina de Harris 10 min.

5- Lavar con agua corriente 10 min. 6 - Azul alcian al 2% - 10 min. 7-Deshidratar.

Alcohol de 70 Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol. 8- Montaje.

Grocott Para la tincin de hongos (candida, aspergillus). Tcnica:

1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada 4- Solucin de cido crmico al 4% - 1 hora 5- Lavar en agua corriente 5 min. 6 Bisulfito sdico al 1% - 1 min. 7- Lavar agua corriente 5 min. 8- Lavar con agua destilada 3-4 pases 9- Solucin argntica de trabajo: En estufa 60--------------------------------- 1 hora En microondas (descongelacin) -------- 1-2 min. 10- Lavar con agua destilada 6 pases. 11- Cloruro de oro al 0.2 % - 2-5 min. 12 Lavar con agua destilada 5 min. 13- Tiosulfato sdico al 2% - 2-5 min. 14- Lavar con agua corriente 15- Solucin verde luz al 1% - 30-40 seg. 16-Deshidratar. Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol. 17- Montaje.

NOTA: NO EMPLEAR PINZAS METLICAS: Cuando empieza a coger color (siempre en la oscuridad) se sacan de la estufa para controlarlos. Se enjuagan con agua destilada y se examina la tincin. Si es demasiado clara, se vuelve a aclarar con agua destilada y se coloca de nuevo en la solucin de plata. Si es demasiado fuerte se trata con el diferenciador. Diferenciador: cido sulfrico al 0.5 % Sulfato frrico al 0.2 % En un litro de agua destilada se aaden 2 gr. de sulfato frrico y a sta solucin se aaden 5 ml. de cido sulfrico. RESULTADOS: Las paredes de los hongos se delinean en negro.

Hierro coloidal
1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4- Solucin actica 3 min. 5 - Solucin de trabajo de Hierro coloidal 1 hora. 6- Solucin actica 4 lavados ( 3 min./lavado ) 7- Mezcla ferrocianuro-clorhdrico 20 min. 8- Lavar con agua corriente -5 min. 9- Lavar en agua destilada 3-4 pases. 10- Si se desea se puede contrastar con: Van Gieson 10 min. Rojo neutro 10 min. 11-Deshidratar. Alcohol de 70 Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol. 12- Montaje.

Mucicarmin de Mayer Las mucinas o mucoprotenas son protenas con H.C. en una proporcin superior al 4 %. La tcnica del mucicarmn de Mayer sirve para identificar globalmente las mucinas, pero no reconoce su naturaleza bioqumica.
FUNDAMENTO: Las mucinas o mucoprotenas son protenas con H.C. en una proporcin superior al 4 %. TCNICA:
1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4- Teir con Hematoxilina de Weigert 10 min. 9- Montaje. 5 - Lavar con agua corriente 3 min. 6 - Solucin diluida de mucicarmn( 1:4 ) 30 min. 7 - Lavar con agua corriente 10 min. 8-Deshidratar. Alcohol de 70 Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol.

Orceina

(Fibras elsticas, virus, hepatitis, cobre)

1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada 4- Permanganato potsico ---- 10 min. 5 - cido oxlico al 2 % - 1 pase 6- Lavar en agua corriente 7- Solucin de Orcena -- 1:30 h. en estufa. 8 - Lavar en agua corriente y dejar secar. 9 - Alcohol clorhdrico al 1% ---- 1 pase 10- Deshidratar a partir de alcohol absoluto. 11-Xilol 12- Montar

Perls Para la identificacin de hierro

1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4 - Reactivo de perls 30 min. 5 - Lavar con agua corriente 5 min. 6 - Hematoxilina de Mayer - 10 min. 7- Lavar en agua corriente hasta que vire. 8- Eosina 1 pase 9-Deshidratar. Alcohol de 70 Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol. 10- Montaje.

Rojo congo Medio con pH altamente bsico. Estos tratamientos modifican las caractersticas tintoriales y antignicas del tejido y el proceso de diferenciacin puede afectar a la tincin selectiva de los acmulos de amiloide ms Pequeos.
Tcnica:

1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4- Hematoxilina de Carazzi o de Weigert 10 min. 5- Lavar en agua corriente .. 10 min. 6- Solucin Rojo Congo .. 10 min.

( en el momento del uso se cogen 8 ml de rojo congo y se mezclan con 2 ml de glicerina. Filtrar) 7- Lavar en agua corriente 5 min. 8- Yoduro potsico -- 3-4 min. 9- lavar con agua corriente pases 10-Deshidratar. Alcohol de 70 Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol. 11- Montaje.

Plata metenamina o Hexamina De Gomori es un mtodo de tincin especial ms empleado para hongos. La reaccin tintorial est basada en que, en presencia de cido perydico, los polisacridos de la pared celular de los hongos son oxidados a aldehdos; stos, a su vez, reducen el complejo nitrato-platametanamina (o metenamina) produciendo una coloracin de caf a negra, debido al depsito de plata reducida en los lugares de localizacin de los aldehdos. Tambin se utiliza para la identificacin de la melanina.

Tcnica:
1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4- cido per ydico al 0.5 % --- 15 min. 5- Solucin de Ag-Metenamina: En estufa.. 60 min. (Controlar la tincin hasta que alcance un color tabaco y comprobar al microscopio que se han teido los glormrulos) En microondas.. 1-2 min. (Descongelacin) 6-Lavar en agua corriente 7- Cloruro de oro al 0.2 % -- 2 min. 8- Lavar en agua destilada. 9-Tiosulfato sdico o hiposulfito sdico 5 min. 10- Lavar en agua destilada. 11- Hematoxilina de Mayer10 min. 12- Lavar en agua corriente 13- Eosina --- 3 min. 14-Deshidratar. Alcohol de 70 Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol. 15- Montaje.

Sudan III Presencia de triglicridos Tcnica:

1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. 2- Hidratacin. Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4 Sudan III + 40 gotas de rojo escarlata---- 1 24 horas.

5- Lavar con agua corriente 6- Hematoxilina o carmn (para el contraste)-- 5-10 min. RESULTADO

7- Lavar en agua corriente 5 min. 8- Montaje en glicerina levulosa, gelatina, etc.

Las grasas neutras se tien.

Violeta de Cresilo Se usa especialmente para la tincin nuclear y visualizacin de los cuerpos de Nissl. El violeta de cresilo se usa como tincinestndar para identificacin de Helicobacter y de cromatina del sexo (Xcromatina). Tcnica:
1-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10-15min. 2-Deshidratacin. Alcohol absoluto durante 5min. Alcohol 96 5 min. Alcohol 70 5min. 3- Lavar en H2O destilada. 4- Violeta de cresilo 0.1% entre 20-30min. 5- Lavar en agua corriente. 6- Montar en medio acuoso.

Azul de toluidina Colorante que tie estructura basfilas, tales como la cromatina. Se puede comportar como colorante ortocromtico (tie de color azul) o metacromtico (tie de color violeta-rojo), dependiendo del pH y de la naturaleza qumica de la sustancia teida. Como colorante ortocromtico, se usa frecuentemente para teir tejido nervioso, donde tie la heterocromatina y los grnulos de Nissl (acmulos de cisternas de retculo endoplsmico rugoso de los somas neuronales, as como las fibras nerviosas amielnicas y clulas de gla. Tambin se utiliza para la tincin de cortes semifinos. El azul de toluidina tie metacromticamente las estructuras ricas en proteoglucanos sulfatados, como el heparn sulfato, presente - por ejemplo - en el cartlago joven (condroblastos y matriz inmadura) y en los grnulos de las clulas cebadas.

GLOSARIO
Aldehdo: Cada uno de los compuestos orgnicos ternarios que se forman como primeros productos de la oxidacin de ciertos alcoholes. Lquido incoloro, muy voltil, de olor desagradable, que se oxida fcilmente en contacto con el oxgeno del aire y se transforma en cido actico.

Embeber. Dicho de un cuerpo slido: Absorber a otro lquido. Empapar, llenar de un lquido. Contener, encerrar dentro de s a otra.

Hipertnico: Dicho de una disolucin: Que tiene mayor presin osmtica que otra con la que se compara Hipotnico: Dicho de una disolucin: Que tiene menor presin osmtica que otra

con la que se compara.

Microtomo: utensilio de laboratorio utilizado para realizar cortes muy finos de muestras que van a ser preparadas para su observacin al microscopio. Polisacrido: Hidrato de carbono formado por una larga cadena de monosacridos;

p. ej., el almidn, la celulosa y el glucgeno.

Reseccin: Extirpacin total o parcial de un rgano.

REFERENCIAS:
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Ramirez Sabs Miriam Sanchez Perez Aline Milln Navarrete Mariana