Curso de Bioqumica
Informe de Laboratorio N 1
Instrucciones sobre el manejo de micropipetas en el laboratorio de bioqumica
Grupo 5
Mesa N 4
Cachay Gonzales Marjeory
Dr. Clever Arias
15 de Agosto de 2015
2. Introduccin:
En bioqumica, la habilidad que se tenga para realizar medidas exactas y
reproductibles, al igual que para transferir pequeos volmenes de lquidos, es de
importancia fundamental en el momento de obtener resultados tiles. Para medir
volmenes de lquidos menores a 1 mL, el instrumento ms utilizado es la,
micropipeta. Este tipo de pipetas se basa en un principio de desplazamiento de aire y
en la utilizacin de puntas desechables. Este tipo de equipos cubre amplio rango de
volmenes a medir (desde 0.1 l hasta 5 ml
No intente ajustar la micropipeta para volmenes mayores al de su capacidad
mxima, o para volmenes menores de cero; si realiza dichos ajustes causar dao
a la micropipeta. Partes de la micropipeta: dependiendo del fabricante las formas de
algunas de las partes de las micropipetas pueden variar, pero en general todas las
micropipetas cuentas con las siguientes partes: Embolo y varilla de mbolo:
selecciona el volumen a dispensar, para toma y dispensacin del volumen
establecido. Pantalla: establece el volumen que se est midiendo Cono: sitio de
insercin de puntas Para el uso correcto de la micropipeta usted debe tener en
cuenta los siguientes pasos: 1. Ajuste de volumen: el volumen de la micropipeta se
muestra claramente en la pantalla situada en el mango. Para ajustar el volumen gire
el embolo en direccin de las agujas del reloj o en contra (dependiendo si desea
aumentar o disminuir). Tenga en cuenta que el volumen deseado aparece tras el clic
del embolo, todos los dgitos deben estar completamente visibles en la pantalla, los
volmenes no deben estar situados por fuera del rango de la micropipeta que est
utilizando. En algunas micropipetas se incluye un dispositivo de seguridad que debe
utilizarse cuando el volumen ya ha sido establecido. 2. Insercin expulsin de
puntas: las puntas desechables que se utilizan dependen del tipo de micropipeta que
se est utilizando; estas puntas se compran de acuerdo con la recomendacin del
fabricante, pero en general se ha aceptado un cdigo de colores, en el cual las
puntas transparentes sirven para las micropipetas de volmenes menores (0.1-10
L), las puntas amarillas para volmenes intermedios (10 200 L) y las puntas
azules son para los volmenes mayores. Al insertar las puntas asegrese que el
cono este limpio y posteriormente presione la punta firmemente en el cono para
asegurar su correcta insercin. Cuando el ajuste es correcto se forma un anillo visible
entre el cono y la punta. Para expulsar la punta presione el expulsor de puntas hasta
que sta salga del cono (siempre descartar la punta utilizada en un recipiente
destinado para este fin). Pipeteado sencillo: esta tcnica emplea la expulsin total del
lquido: Presione el mbolo hasta la primera parada. Site la punta debajo de la
superficie del lquido y suavemente libere el mbolo hasta la posicin de partida.
Retirar cuidadosamente la punta del lquido, tocando contra la pared del recipiente
para liberar el exceso de lquido. El lquido es dispensado presionando el mbolo
hasta la segunda parada. Este procedimiento vaciar completamente la punta
garantizando la precisin de la dispensacin. Posiciones de una micropipeta Las
micropipetas son una herramienta til para el manejo de volmenes pequeos, pero
una utilizacin inadecuada o un mantenimiento o calibracin incorrectos pueden
ocasionar la transferencia de volmenes inexactos y problemas en los experimentos
desarrollados. La comprobacin de la calibracin es un procedimiento simple que
puede ahorrar un tiempo considerable, as como tambin reactivos y otros recursos.
3. Objetivos:
Familiarizarse con el manejo de las micropipetas. Reconocer las aplicaciones del uso
de estos equipos en la prctica de laboratorio. Realizar adecuadamente la calibracin
de una micropipeta
* Determinar las posibles variaciones en el uso de la micropipeta.
* Verificacin de la exactitud y precisin de las micropipetas.
4. Procedimientos:
MANEJO DE LAS MICROPIPETAS:
1. Tome la micropipeta y presione el pistn 2 o 3 veces, para homogenizar la grasa
interna de este, y permitir un mejor funcionamiento de la micropipeta.
2. Inserte bien la puntilla apropiada de la micropipeta.
3. Presione el botn de mando hasta el primer tope. Sumerja la puntilla de la
micropipeta verticalmente al recipiente en el que va a tomar la muestra (frasco,
matraz o tubo de ensayo, etc.) Aproximadamente 3mm en l lquido. La micropipeta
debe permanecer en posicin vertical siempre.
4. Soltar poco a poco la presin del botn de mando para que la micropipeta
succione la solucin que est pipeteando. Espere aproximadamente 3 segundos
antes de sacarla del lquido.
5. Saque la micropipeta del recipiente. Si considera necesario, con una gasa, elimine
cuidadosamente el exceso de lquido de las paredes extremas de la puntilla, sin tocar
la punta.
6. Introduzca verticalmente la pipeta al recipiente en el que va a depositar la solucin
cargada, baje hasta el fondo sin tocarlo (en el caso de que el recipiente receptor este
vaco) o lo baje lo ms prximo posible al lquido que el recipiente contenga (sin
tocarlo).
7. Presione el pistn o botn de mando al primer tope, para eliminar el lquido
cargado
8. Saque la micropipeta del recipiente, las puntillas se expulsan apretando el botn
lateral o en forma manual.
9. Disponga la puntilla en el recipiente de desecho.
10. Limpie la micropipeta por el exterior con un pao que no deje residuos.
11. Guarde en su porta pipetas de manera vertical.
Tcnica inversa
Se recomienda esta tcnica para el pipeteo de lquidos muy viscosos o con tendencia
a formar espuma fcilmente. Asimismo, resulta apropiada para el trabajo con
volmenes reducidos.
Llene un frasco de reactivos limpio con el lquido con el que va a trabajar.
1. Presione el pulsador hasta la segunda posicin.
2. Sumerja la punta aproximadamente 1cm bajo la superficie y suelte el pulsador
lentamente para llenarla. Saque la punta, retirando el exceso de lquido del
borde del frasco.
3. Descargue el volumen ajustado presionando ligeramente el pulsador hasta la
primera posicin. Mantenga el pulsador en este punto. El lquido que quede en
la punta no debe incluirse en la dispensacin.
4. Deseche el lquido restante junto con la punta.
Tcnica directa
Llene un fresco para reactivos limpio con el lquido que va a trabajar.
1. Presione el pulsador hasta la primera posicin
2. Sumerja la punta aproximadamente 1cm bajo la superficie del lquido y suelte
el pulsador lentamente. Saque la punta, retirando el exceso de lquido del
borde del frasco.
3. Descargue el lquido presionando ligeramente el pulsador hasta la primera
posicin.
4. Suelte el pulsador para que vuelva a la posicin inicial. Si es necesario,
cambie la punta o tip y siga pipeteando.
5. Resultados:
Se obtuvo como resultado la prctica del manejo de micropipetas de acuerdo al
medio lquido, capacidad volumtrica y tcnica aplicada de acuerdo al caso
presentado.
6. Interpretacin de Resultados:
Se observ que durante la experiencia en el laboratorio no se hizo el correcto manejo
de las micropipetas, sin embargo con la prctica se aprendi el uso adecuado de las
micropipetas de acuerdo a su capacidad volumtrica, medio lquido y tcnica
empleada.
.
7. Conclusiones:
La micropipetas se usan para medir volmenes exactos
Las tcnicas se aplican de acuerdo al lquido usado.
La utilizacin de micropipetas de volumen fijo nos permitir tener un mayor
control dentro y entre ensayos.
Existen diferentes tipos de micropipetas: manuales, en las que el volumen
a aspirar se fija girando un botn en su parte superior que est conectado
a un sistema analgico de confirmacin de volumen, y automticas, en las
cuales dicho sistema es digital.
Hay micropipetas simples, que slo acogen una punta cada vez, y
multicanales, que permiten incorporar mltiples puntas (por ejemplo, ocho),
absorbiendo el mismo volumen en todas ellas.
Se utilizaron 2 tips en la prctica, uno amarillo (2-200 ul) y azul (50 -1000 ul).
Se aprendi el uso de las tcnicas directa e inversa de las micropipetas.
8. Recomendaciones:
Mantener la micropipeta en una posicin tan vertical como sea posible, nunca en
ngulo.
La aspiracin debe realizarse lentamente y uniformemente, no demasiado rpido.
No
presionar
el
tip
muy
fuerte
al
cono
de
la
micropipeta.
La temperatura de la micropipeta, la punta, el lquido y la habitacin debe estar en
equilibrio.
El mantenimiento regular y el chequeo de la calibracin garantiza que la micropipeta
opere de acuerdo a las especificaciones.
9. Bibliografa:
Internet:
https://www.clubensayos.com/Ciencia/Micropipetas/173180.html
Informacin sobre la medicin del volumen.
http://www.brand.de/fileadmin/user/pdf/Information_Vol/Brochuere_Volumenmessung
_ES.pdfBrand 13/08/15
