Instituto Politcnico Nacional
Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa
Bioqumica Clnica
3MM5
Vudoyra Gracin Abraham
Lector de ELISA.
El lector de ELISA es un espectrofotmetro especializado, diseado para
efectuar la lectura de los resultados de una tcnica que se utiliza para
determinar la presencia de anticuerpos o antgenos especficos
presentes en una muestra. La tcnica se basa en la deteccin de un
antgeno inmovilizado sobre una fase slida, mediante anticuerpos que,
directa o indirectamente, producen una reaccin cuyo producto puede
ser ledo por el espectrofotmetro (prueba ELISA).
Principios de Operacin.
A diferencia de los espectrofotmetros convencionales que permiten
efectuar lecturas en un rango amplio de longitudes de onda, este
dispone de filtros o rejillas de difraccin que limitan el rango de
longitudes de onda a aquellas usadas en ELISA (entre 400 y 750 nm).
El sistema ptico utilizado por muchos fabricantes utiliza la fibra ptica
para llevar la luz hasta los pozos de la placa, donde se encuentra la
muestra bajo anlisis. La luz que atraviesa la muestra tiene un radio que
vara entre 1 y 3 mm. Un sistema de deteccin recibe la energa
lumnica, proveniente de la muestra, la amplifica, determina la
absorbancia y, a travs de un sistema de lectura, la convierte en datos
que permiten interpretar el resultado de la prueba.
Las muestras del ensayo de ELISA se colocan en placas de diseo
especial, las cuales disponen de un nmero definido de pozos o vasos,
en los cuales se lleva a cabo el ensayo. Son comunes las placas de 8
columnas por 12 filas, con un total de 96 pozos, pero el nmero de pozos
depender esencialmente del fabricante del equipo.
En la actualidad, los analizadores de ELISA disponen de controles
regulados por microprocesadores, interfaces de conexin a sistemas de
informacin, programas de control de procesos y control de calidad que,
a travs del computador, permiten la automatizacin completa de los
ensayos requeridos.
Material de apoyo.
Para desarrollar la tcnica de ELISA con xito, es necesario contar con el
siguiente equipo adicional:
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1. Lavador de ELISA
2. Sistema dispensador de lquidos
3. Incubadora especial para las placas.
Uso del equipo.
Cuando se realiza una prueba de ELISA, generalmente se siguen estos
pasos:
1. Utilizando el lavador de ELISA, se efecta un primer lavado de la
placa.
2. Mediante el dispensador de lquidos se llenan los pozos con las
soluciones preparadas para el ensayo.
3. A continuacin, se coloca la placa en la incubadora, donde a
temperatura controlada, se llevan a cabo un conjunto de
reacciones.
4. Finalmente, cuando se han completado las reacciones qumicas, se
lleva la placa al lector y se efectan las lecturas que permitan
emitir un diagnstico
Los pasos 1,2 y 3 se pueden repetir varias veces dependiendo del
ensayo.
Calibracin del lector ELISA
Es un proceso especializado que debe realizar un tcnico o ingeniero
debidamente entrenado, siguiendo las instrucciones que para el efecto
brinda cada fabricante. Para efectuar la calibracin se requiere disponer
de un juego de filtros grises, suministrados por el fabricante que por lo
menos manejan 3 valores de densidad ptica, uno bajo, uno medio y el
ltimo para un valor alto.
Recomendaciones:
Para que el lector de ELISA funcione adecuadamente, hay que tener en
cuenta las siguientes consideraciones:
1. Ambiente limpio, libre de polvo.
2. Mesa de trabajo estable, alejada de equipos que produzcan
vibraciones (centrifugas, agitadores), que tenga un tamao
adecuado que permita ubicar al lado del lector los equipos
complementarios.
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3. Una fuente de suministro elctrico de acuerdo con las normas y
estndares implementados en el pas. En pases americanos se
usan por lo general voltajes de 110V a 60 Hz.
