BIOPROCESOS II- CURVA DE CALIBRADO PARA AZUCARES REDUCTORES
(DNS)
I.
OBJETIVOS
-Conocer la preparacin y uso adecuada del reactivo DNS (Acido 3,5 dinitrosalicilico).
-Construccin de una curva de calibrado para la determinacin de azcares reductores por el
mtodo del DNS.
II.
MARCO TERICO
Azucares Reductores
Frank Bradley Armstrong, Thomas Peter Bennett dijeron: La mayora de disacridos son
azucares reductores porque uno de sus dos carbonos anomricos (grupo aldehdo o cetona
reductor) de sus estructuras no est formando enlace glucosidico. Una excepcin es la sacarosa
(azcar no reductor) que, tiene los dos carbonos anomricos formando parte del enlace que une
los dos carbonos monosacridos.
En el libro Diccionario de la Qumica se manifiesta diciendo: Azucares reductores:
Monosacridos o disacridos que puede ceder electrones a otras molculas y puede, por tanto,
actuar como agente reductor. Azucares no reductores: Azcares que no son capaces de ceder
electrones a otras molculas y, por tanto, no pueden actuar como agentes reductores.
Acido 3,5 dinitrosalicilico (DNS)
El Ing. Qumico Ramn Mndez, de la Universidad Autnoma de Mxico, menciona que: Para
la determinacin de azucares reductores se emple el mtodo colorimtrico del DNS. Este
mtodo se basa en que los azucares reductores reaccionan con el cido 3,5-dinitrosalicilico,
reducindolo bajos ciertos condiciones y generando un color rojizo-amarronado.
Curva de Calibracin
La Ing. Bioqumica Silvia Quesada Mora expresa, en su libro: Si se diluye sucesivamente una
sustancia coloreada y, de cada dilucin, se mide el valor de absorbancia a una longitud de onda
optima, al representar grficamente estos valores (A vs B), se obtiene una curva de calibracin
de la sustancia. A partir de esta, es posible conocer la concentracin de una muestra; para ello,
se mide su absorbancia a la misma longitud de onda y, con base en ese valor, se interpola la
concentracin.
Espectrofotometra
Carmen Silva Garca Y Jos Garca Bermejo mencionan en su libro: La espectrofotometra de
absorcin consiste en la medida de la radiacin que llega a un detector tras producirse un
fenmeno de absorcin de luz por parte de una sustancia absorvente.
Harold Frederic Walton, Jorge Reyes expresan: Un modo de aumentar la exactitud de
las determinaciones fotomtricas, especialmente en los casos en que las soluciones
presentan fuerte absorbancia, consiste en comparar la intensidad de la luz que pasa por
la solucin con la intensidad de un haz de luz de la misma lmpara o foco luminoso, que
atraviesa una segunda solucin cuya concentracin es conocida exactamente y que es un
poco menor que la de la muestra que se determina.
RESULTADOS
Curva de Calibrado para Glucosa
Se trabaj con los siguientes datos:
Tubos
1
2
3
4
5
6
Agua
destilada
5
4
3
2
1
0
Solucin
madre
[C] g/L
Abs 540 nm
0 ml.
1ml.
2ml.
3ml.
4ml.
5ml.
0
0.04
0.08
0.12
0.16
0.2
0
0.1222
0.2468
0.4126
0.5287
0.6966
Curva DNS para Glucosa
f(x) = 3.48x - 0.01
R = 1
Abs 540 nm
Linear (Abs 540 nm)
CONCLUSIONES
Se desarroll con eficacia un procedimiento para determinar la concentracin de
(azcares reductores) por el mtodo del cido 3,5 dinitro saliclico (DNS); la
determinacin de estos azcares se realiz para obtener una curva de calibracin,
con este reactivo (DNS) que tiene capacidad de oxidar a los azcares reductores
dando resultados colorimtricos que se pueden medir con una longitud de onda
de 540nm en el espectrofotmetro.
2
Las grficas muestran resultados satisfactorios ya que el valor de R
obtenidos tanto en la prueba de azcares para Glucosa y fructuosa fueron 0.997
y . respectivamente.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Frank
Bradley
Armstrong,
Thomas
Peter
Bennett
(1982),
Bioqumica.
-
Silvia Quesada Mora (2007), Manual de experimentos de laboratorio
para bioqumica.
Carmen Silva Garca, Jos Garca Bermejo, Luis Del Castillo Torres,
Jos Manuel Ania Palacio Y Domingo Gmez Martnez (2006),
Tcnicos Especialistas de Laboratorio del servicio Vasco de Salud.
Jos Garca Bermejo, Francisca Colom Valiente Y Juan Antonio
Jaramillo Snchez (2003), Manual Del Auxiliar de Laboratorio.
Carmen Silva Garca Y Jos Garca Bermejo (2006), Tcnico
Especialista en Laboratorio de Atencin Primaria Del Instituto
Cataln de la Salud.
Harold Frederic Walton y Jorge Reyes (1983), Anlisis qumica e
instrumental moderno.
Ramn Mndez Pampn (2007), Produccin limpia en la industria de
curtiembre.
