DIAGNSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS HUMANAS
MTODOS DE ESTUDIO DE LAS
ENTEROPARASITOSIS
Prof. Adjta. Dra. Nora Fernndez
Depto. Parasitologa y Micologa
IMPORTANCIA
Diagnstico
- Enteroparasitosis sintomtica
- Deteccin precoz, asintomtica.
Diagnstico diferencial de infecciones entricas: parasitarias,
bacterianas, virales.
Diagnstico diferencial con otras patologas del tubo
digestivo.
Instaurar el mejor tratamiento (especfico).
Valorar respuesta al tratamiento.
Prevencin.
COPROLOGA
Del griego kopros: excremento, estudio de las materias
fecales.
Comprende la observacin microscpica, macroscpica y el
anlisis qumico de las materias fecales (coprofuncional).
El examen de las heces tiene su indicacin clnica en las
diarreas, en procesos que cursan con insuficiencia digestiva o
en los que se busca un agente etiolgico:
Coprovirolgico
Coprocultivo
Coproparasitario
COPROPARASITARIO
Se trata de un conjunto de tcnicas complementarias, que
permiten demostrar la presencia de las diferentes formas
evolutivas de los protozoos y helmintos enteroparsitos:
esporas, trofozotos, quistes, ooquistes, huevos, larvas y
adultos.
Se utiliza tambin para el diagnstico de parasitosis de
glndulas anexas Ej.: hgado. En la fascioliasis los huevos
de Fasciola hepatica son eliminados con las heces.
CONJUNTO DE TCNICAS ?
No existe un nico mtodo capaz de demostrar todas las
formas evolutivas parasitarias
Diferente morfologa y ciclos.
Diferencias estructurales y tintoriales.
Diferencias en la viabilidad debido a : pH, tratamientos
farmacolgicos, etc.
Distinta localizacin en el tubo digestivo por lo que su
distribucin y ubicacin de los parsitos en el bolo fecal ser
diferente: centro o en la periferia.
Variaciones en la resistencia de las formas evolutivas.
La eliminacin intermitente hace que existan perodos
negativos.
ETAPAS DEL PROCESO DIAGNSTICO
PREANALTICA: est sujeta a mayor porcentaje de errores,
insume mayor tiempos e involucra solicitud, asesoramiento,
,obtencin, almacenamiento, transporte y recepcin en el
laboratorio.
ANALTICA:
corresponde
procedimiento diagnstico.
la
realizacin
del
Incluye: eleccin de los mtodos, la estandarizacin, la
realizacin de control de calidad, etc.
POSTANALTICA: interpretacin de resultados, validacin,
emisin del informe.
FASE ANALTICA
TCNICAS DIAGNSTICAS EN LAS
ENTEROPARASITOSIS
IMPLEMENTACIN DE TCNICAS
Planta fsica del laboratorio, equipamiento, insumos, costos
racionalizacin.
Recursos humanos capacitados y entrenados.
Tiempo.
Actualmente existen diferentes metodologas diagnsticas
con diferente costo, utilidad, simplicidad y sensibilidad.
ELECCIN
Se debe tener presente la poblacin y el objetivo del estudio:
Diagnstico: orientacin de acuerdo a los datos clnicos:
- Edad, procedencia, antecedentes personales; patolgicos;
familiares; ambientales: acceso al agua potable,
saneamiento; control de tratamientos: antiparasitarios;
otros tratamientos : antidiarreicos, laxantes, etc.
Estudio epidemiolgico: guarderas, escuelas, asentamientos,
poblacin rural, hospitales, residencias para ancianos, carn
de salud para manipuladores de alimentos, viajes, etc.
Investigacin:
Especies y variedades
Frmacos
OBTENCIN DE LA MUESTRA
DE HECES PARA COPROPARASITARIO
Emisin
Espontnea.
Se puede administrar laxantes salinos, no oleosos (vaselina, glicerina).
No luego de estudio radiogrfico c/bario.
No en perodo menstrual.
Rgimen alimentario
-
Hay quienes indican durante las 48 -72 hrs previas a la recoleccin de la
muestra no ingerir frutas, verduras y grasas. Desde nuestro punto de vista
no es necesario.
Cantidad de muestra
Aproximadamente 50 grs (tamao de una nuez) para heces formadas;
liquidas al menos 4 mL (10-15 mL).
OBTENCIN DE LA MUESTRA
- En frasco de plstico limpio de boca ancha y tapa rosca.
- Rotulada con nombre paciente, C.I, N registro del
laboratorio.
- La de la maana o la noche anterior, conservacin en
heladera hasta 24 horas (sin conservantes).
- Muestra inadecuada aquella que se mantuvo ms de 24 hrs a
temperatura ambiente.
- Si se utilizan sustancias para conservar la muestra, tener en
cuenta sus efectos sobre las formas evolutivas y
contaminacin del medio ambiente.
- Evitar contaminacin con orina, detergentes, hipoclorito de
Na +.
- La fermentacin altera trofozotos y las larvas de
Strongyloides stercoralis.
RECOMENDACIONES PARA USUARIOS
No dejar las heces expuestas al aire
RECOMENDACIONES PARA
PERSONAL TCNICO-NO TCNICO
Cada laboratorio debe tener sus pautas
Debe existir comunicacin entre :
mensajero-recepcionista-tcnicos-mdicos-enfermeras
Se deben examinar lo mas rpido posible (condicin ideal).
Cuando se reciben varias muestras al mismo tiempo, se
deber separar las que son lquidas, tienen pus, mucus o
sangre, y debern ser examinadas antes que las dems, ya
que puede haber trofozotos de amebas, los que con el
transcurso del tiempo pierden movilidad.
NMERO DE MUESTRAS
Existen varios criterios al respecto.
Para diagnstico de enfermedad por enteroparsitos
COPROPARASITARIO SERIADO 3 MUESTRAS
- Separadas c/3-7 das.
Se considera que una nica muestra tiene una sensibilidad
del 40%-60%, ya que existen perodos negativos por los
propios ciclos biolgicos de los enteroparsitos (eliminacin
intermitente).
Mltiples muestras de material fecal, aumenta la probabilidad
de hallazgo.
Concentracin de mltiples muestras en un solo examen.
Aplicacin de un algoritmo ante la presencia de un resultado
negativo y la persistencia de sntomas.
ALGORITMO CLNICO-PARASITOLGICO
POSITIVA
Diagnstico y mejora con tratamiento. No justifica 2 muestra
NEGATIVA
Desaparicin de los sntomas; se hall otra causa.
Sin otra causa ni mejora: solicitar 2 muestra
POSITIVA
Diagnstico y mejora con tratamiento. No justifica 3 muestra
NEGATIVA
Desaparicin de los sntomas; se hall otra causa.
Sin otra causa ni mejora: solicitar 3 muestra
POSITIVA
Diagnstico y mejora con tratamiento.
NEGATIVA
Desaparicin de los sntomas; se hall otra causa.
Sin mejora y firme sospecha de enteroparasitosis, evaluar
deteccin de coproantgenos, Acs, realizacin de sondeo
duodenal, biopsia, etc.
ESTUDIO DE ENTEROPARSITOS
Mtodos directos:
Coproparasitario
Coloraciones
Deteccin de coproantgenos
Mtodo de Graham (esptula adhesiva)
Mtodos Indirectos:
Deteccin de anticuerpos (Acs) en suero.
Utilizados para amebiasis, fascioliasis, estrongiloidiasis y
esquistosomiasis, etc.
COPROPARASITARIO
1- MACROSCPICO
PARSITOS
PSEUDOPARSITOS
SANGRE
MUCUS
PUS
2 MICROSCPICO
a) Directo en fresco c/ SF
Heces s/concentrar
b) Tcnicas de concentracin
Para heces
c) Directo en fresco c/
colorantes: lugol, azul de
tionina, etc.
d) Recuento de huevos
COLOR
CONSISTENCIA
LIENTERIA
e) Coloraciones
permanentes
f) Mtodo de Graham
COPROPARASITARIO
3
INMUNOLGICOS
Deteccin de
coproantgenos
4
CULTIVOS
INVESTIGACIN
Laboratorios de
referencia *
5
BIOLOGA
MOLECULAR
PCR
6
MICROSCOPA
ELECTRNICA
INVESTIGACIN
Laboratorios de referencia
1- MACROSCPICO
Depende de la dieta y de la ingesta
de agua.
1 y 2 indican constipacin.
5-7 indican diarrea.
2a- MICROSCPICO : directo en fresco c/ SF
DATOS QUE APORTA
formadas
quistes
Las heces s/concentrar
Movilidad de trofozotos y
larvas.
pastosas
Clulas de mucosa intestinal.
Clulas inflamatorias.
Productos de una mala
digestin/ absorcin de
alimentos.
semi-lquidas
trofozotos
ooquistes
lquidas
2a - PREPARACION DEL EXAMEN DIRECTO
En
portaobjetos
colocar
1 gota de SF y otra de lugol.
Se hace una suspensin
c/ aprox. 2 mg de heces.
Se coloca un cubreobjetos de
24 x 24 mm y se observa al
MO a 10 x y luego a 40 x.
La suspensin de heces
preparada debe permitir leer a
travs de la preparacin.
2a- MICROSCPICO : directo en fresco c/ SF
Huevos de Hymenolepis diminuta
Quistes de Giardia lamblia
2b- TCNICAS DE CONCENTRACIN
Fundamento: aumentar el nmero de parsitos a
partir de un volumen de heces preestablecido.
Procedimientos
a) Sedimentacin
b) Flotacin
c) Biolgicos
Cada uno posee ventajas y desventajas.
Sensibilidad variable para protozoos y helmintos.
a) SEDIMENTACIN
Estn basados en la utilizacin de agua u otros lquidos de
baja densidad, recobrndose las formas evolutivas
microscpicas de los parsitos, en el fondo de un y tubo
cnico, donde se depositan por ser ms densos.
Sedimentacin espontnea o simple
Sedimentacin-centrifugacin
Telemann (ter-cido clorhdrico)
Carles y Barthlmy (ter -cido ctrico)
Ritchie (formol-ter)
TCNICA DE SEDIMENTACIN ESPONTNEA
Se homogeniza 2-5 grs de heces en 10 mL de SF.
La mezcla se vierte en tubo cnico de 50 mL de capacidad, filtrndola
a travs de gasa (se puede utilizar las unidades de filtracin).
Se completa el volumen solucin salina y se tapa.
Se agita y se deja reposar 45 minutos.
Se elimina el sobrenadante .
Se toma con una pipeta una muestra del fondo del tubo.
Se colocan 3 gotas en dos lminas portaobjetos diferentes y se cubre
c/laminilla.
Sensibilidad 55 %
No requiere centrfuga
Disponible [Link]
TCNICA DE SEDIMENTACIN/CENTRIFUGACIN
MTODO DE RITCHIE
Fundamento: lavados/centrifugados sucesivos partiendo de
un volumen de heces preestablecido, para eliminar la mayor
cantidad de restos vegetales y grasas que estn presentes,
ya que pueden interferir en la visualizacin microscpica.
Es el ms utilizado, por su reproducibilidad, sensibilidad y
bajo costo.
Con el transcurso del tiempo se han incorporado diferentes
variantes de la misma; tambin hay varios kits comerciales.
RITCHIE FORMOL / TER
TER
Tapn de
grasa y
restos
vegetales
FORMOL
10%
SEDIMENTO
Tambin se usa
acetato de etilo
NO INFLAMABLE
VARIACIONES DEL RITCHIE
HOMOGENEIZADO
Proporcin 1volmen de materias fecales y 9 volmenes de
solucin salina.
En heces lquidas no es necesario agregar SF, se agita el
recipiente que contiene la muestra y se procede a la filtracin.
FILTRACIN
En heces c/grasas o mucus, pueden quedar atrapados en la
gasa, por lo que puede ser innecesario la utilizacin.
Hasta 3 lavados.
LAVADOS
KITS COMERCIALES DE SEDIMENTACIN/CENTRIFUGACIN
ASPECTOS COMUNES
Unidades de filtracin
Limpios
Bioseguridad
DIFERENCIAS
tubos
c/ conservantes o sin
c/surfactante o sin
Cucharitas
Hisopos
COSTOS
bolsas
FECAL PARASITE CONCENTRATOR JUMBO
EVERGREEN
Reemplaza el embudo y la gasa.
Un vial 30 mL adapta a una unidad de filtracin de 50 mL.
Los orificios del filtro miden 0,6 mm de dimetro, permitiendo el pasaje
de larvas, huevos, quistes y retiene la mayor parte de los desechos
fecales.
Surfactante Tritn X-100, disuelve y disgrega las heces y el mucus.
FECAL PARASITE CONCENTRATOR JUMBO
EVERGREEN
PARATEST
Utiliza como conservante formol tamponado al 5 %.
En un solo paso se procede a la dilucin, filtrado y
concentracin de la muestra.
Posee un filtro de 266 mm.
Disponibles 2 tipos ms de conservantes: el SAF til en
laboratorios que realizan la coloracin tricrmica y el Greenfix ,
biodegradable, no contamina el medio ambiente ni es txico.
VIDEOS ON LINE
[Link]
[Link]
OTROS KITS COMERCIALES
b) FLOTACIN
Los elementos parasitarios se recogen de la superficie de un
lquido denso, a la cual ascienden por su menor peso
especfico.
Flotacin simple, Bass.
Faust (sulfato de zinc) huevos de helmintos, estudios de
tierra.
Sheather modificado ( azcar) para coccidios.
Isospora
Cyclospora
Cryptosporidium
b) FAUST
FUNDAMENTO
Los elementos parasitarios se recogen de
la superficie de un liquido denso al cual
ascienden por su menor peso especifico.
Pelcula
superficial
CLASIFICACIN
Flotacin Simple
Flotacin / Centrifugacin
Sulfato de
Zn
Sedimento
c) BIOLGICOS
Basados en el conocimiento y la aplicacin del ciclo vital del
parasito, fundamentalmente en formas juveniles.
HARADA-MORI Strongyloides stercoralis
Fundamento:
Busca embrionar huevos de tremtodos y cestodos.
Separar larvas de nemtodos .
Sobre papel de filtro.
Agua destilada
Incubacin a 20 C
Examinar luego de 3 das.
MTODO DE BAERMANN Strongyloides stercoralis
Apropiado para el diagnostico de estrongiloidiasis.
Las larvas poseen termotropismo e hidrotropismo +.
til en coproparasitarios reiteradamente negativos.
c) BIOLGICOS
HARADA-MORI Strongyloides stercoralis
30-60% de sensibilidad para 1 sola muestra
c) BIOLGICOS
MTODO DE BAERMANN
Gasa
Heces, tierra, cultivo: 8- 10 grs
Malla
Agua 40 C
Se deja por 60-90 minutos.
Las larvas sedimentan en el tubo.
Se abre la pinza, para obtener
gotas en portaobjetos, y se
observan al MO.
30-60% de sensibilidad para 1 sola muestra
2c- MICROSCPICO : directo en fresco c/ lugol
Quistes de Giardia lamblia
Forma vacuolar
Blastocystis hominis
Larvas de Strongyloides stercoralis
d) RECUENTO DE HUEVOS
Se utilizan para saber la intensidad de la infeccin
helmintos transmitidos por el suelo.
de
Ascaris lumbricoides
Trichuris trichura
Hymenolepis nana, entre otros.
Tiene utilidad en estudios epidemiolgicos y clnicos (eficacia
de tratamiento).
Cuantifican el nmero de huevos por gramo de materias
fecales (h.p.g):
- Leves
- Moderadas
- intensas
d) TCNICAS PARA RECUENTO DE HUEVOS
Recuento en placa microscpica
Sencillo, poco exacto.
Se realiza un ex. directo que contenga aproximadamente 2
mg de heces, se cubre c/ laminillas de 22 x 22 mm.
Se recorre toda la laminilla y el nmero de huevos se
multiplica por 500, el resultado se informa en h.p.g.
Tcnica de Kato-Katz
Es el sugerido por la OMS, para diagnsticos individuales,
como para investigaciones epidemiolgicas.
Ms compleja, exacta.
Disponible kit comercial.
e) COLORACIONES PERMANENTES:
PREPARACIN DE FOTIS
Heces frescas s/concentrar
Heces concentradas
Rotular con lpiz
Confeccin
Fijacin: metanol
Luego de la coloracin
pueden sellarse
e) COLORACIONES PERMANENTES
1) Kinyoun
2) Kinyoun modificado
3) Safranina
4) Tricrmica
5) Tricrmica modificada
f) MTODO DE GRAHAM
Diagnstico de oxiurosis : Enterobius vermicularis.
FUNDAMENTO
Sobre la base del ciclo biolgico del agente, obtener
huevos de E. vermicularis que estn en la regin peri-anal.
Mediante la aplicacin de un baja lenguas c/ cinta adhesiva
o paleta de plstico engomada, alrededor de dicha zona.
Durante 3 maanas consecutivas.
Higiene la noche previa; no aplicar cremas.
Realizar el estudio en la maana antes de que el nio se
levante.
Si usa paal y a la maana nota que est con materias
fecales : no realizar el estudio ese da.
No requiere refrigeracin.
Lavarse las manos despus de realizar la toma de muestra.
f) MTODO DE GRAHAM
DETECCION DE COPROANTGENOS
Productos especficos parasitarios
Utilizan anticuerpos (Acs) mono o policlonales
Los Acs se inmovilizan en diferentes tipos de soporte
slido: microplacas , membranas cromatogrficas y otros
materiales inertes.
ENSAYO INMUNOENZIMTICO
DETECCIN DE COPROANTGENOS
Duracin del ensayo 1h:20
Placas con AcMo protenas especficas: de
la pared qustica, membrana, etc.
Giardia lamblia (GSA 65 CWP1)
Cryptosporidium sp
Entamoeba histolytica (lectina Gal/gal Nac)
Cualitativo.
VENTAJAS
> Sensibilidad
Estudios de campo
DESVENTAJAS
Costo
Equipos
INMUNOFLUORESCENCIA
Giardia lamblia
Crypstosporidium sp
Microsporidios
VENTAJAS
Mayor sensibilidad
DESVENTAJAS
Costo
Microscopio IF
INMUNOCROMATOGRFICOS
FUNDAMENTO
Reaccin Ag-Ac colorimtrica
Tcnica cualitativa
Heces frescas.
No concentradas.
Diluidas en buffer NaNO3 al 0,1%.
Ac conjugado con fosfatasa alcalina a un sustrato (indoxil
fosfato) la reaccin positiva da una lnea azul.
AcMo ESPECFICOS
[Link] protena 29kDa
[Link] a-l-giardina
C. parvum protena disulfido isomerasa
Sensibilidad y especificidad menor para E. histolytica
DETECCIN DE ANTICUERPOS
nica herramienta: Estrongiloidiasis, Fascioliasis.
Herramienta complementaria: Amebiasis, Criptosporidiosis,
Giardiasis.
Se realizan en suero.
Presentan mayor sensibilidad que las tcnicas clsicas.
VENTAJAS
Buena sensibilidad y especificidad.
Control de tratamiento, negativizacin/ quimioterapia eficaz.
Diferenciacin especies de amebas.
Procesar gran nmero de muestras simultneamente.
DESVENTAJAS: COSTOS
EN SUMA:
Recursos de cada laboratorio.
Poblacin a estudiar.
Orientacin clnica
Implementacin de coloraciones permanentes.
Capacitacin
Controles
Mtodos tradicionales siguen siendo los de primera lnea.
Racionalizacin de todos los recursos.
nfernandez@[Link]
