Universidad Nacional Autnoma de Mxico
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Biologa
Laboratorio de Investigacin Formativa III
Unidad II: Embriologa
Prctica 3: Viabilidad de gametos
M. en C. Ral Zavala Chavero
Equipo 9
Rosiles Prez Pamela
Osorio Celis Cristian Alan
Franca Lpez Tania Lorena
Grupo: 2301
Prctica 3: Viabilidad de gametos
INTRODUCCIN
La espermatobioscopia es un estudio de laboratorio que sirve para comprobar que
los gametos masculinos funcionan correctamente; se analizan caractersticas
fisicoqumicas del semen, al igual que caractersticas numricas, funcionales y
estructurales de los espermatozoides. Para dicho estudio es necesaria una
muestra en fresco de semen, el cual est compuesto por lquido seminal y
espermatozoides.
-
Lquido seminal Es un lquido compuesto por diversas sustancias. Tiene
como lugar de formacin el epiddimo, las vesculas seminales y la prstata;
dependiendo del lugar de formacin ser la cantidad de sustancias que lo
componen, quedando as: Vesculas seminales 60% de sustancias que
componen el semen; Epiddimo 20% de sustancias que componen el
semen; Prstata 20% de las sustancias restantes.
Espermatozoides Tienen como lugar de formacin los Testculos,
produciendo as el 100% de los espermatozoides.
Existen 2 tipos de espermatobioscopia, la directa y la indirecta. En la directa la
toma de muestra es va masturbacin. En la indirecta (Mtodo de Sims Hunter) se
cita una pareja heterosexual, se realiza el coito y la muestra es tomada va vaginal
de la mujer.
Hay ciertas situaciones en las que se indica una espermatobioscopia:
a) Animales de registro (sementales) se realiza para verificar y producir
estrictamente, semen de alta calidad.
b) Diagnstico de la pareja estril se toma como 1era opcin el diagnstico
de esterilidad en la pareja; resulta un mtodo de ms fcil y rpido
diagnstico (en el varn) que estudios hormonales y de largo seguimiento
(en la mujer).
c) Donacin a bancos de semen se realiza el estudio para saber si la
muestra es de calidad y as almacenarse hasta que sea requerida.
d) Control de natalidad se realiza la vasectoma y despus de un tiempo se
realiza el estudio para determinar si an hay restos de semen.
Para
tener la muestra necesaria y el objeto de estudio para la
espermatobioscopia, los espermatozoides sufren diversos cambios; pasando por
diferentes etapas de formacin y de maduracin llamadas espermatognesis y
espermiognesis.
La espermatognesis es el proceso por el cual se originan las clulas gamticas,
dando como resultados 4 clulas haploides (dos con 23X y dos con 23Y). Tiene 5
etapas: espermatogonia, espermatocito primario y secundario, espermtida y
espermatozoide.
La espermiognesis es la etapa de maduracin entre espermtida y
espermatozoide, tambin es llamada etapa de diferenciacin. Tiene diferentes
fases:
1.- Inicia con la cabeza, esta se forma gracias a las modificaciones que sufre el
ncleo. ste tiene que disminuir su tamao perdiendo jugo nuclear lquido y
cubierta nuclear, tambin el material gentico se condensar.
2.-El sistema acrosmico (la parte superior de la cabeza) proviene del aparato de
Golgi. ste sistema tiene un grnulo acrosmico con 2 derivados:
a) Caperuza o casquete es una doble membrana que se extiende hasta la
mitad de la cabeza.
b) Acrosoma es un espacio con gran cantidad de enzimas acrosmicas y es el
marcador espermtico que reconoce el vulo.
3.- Sistema de centriolos:
a) Centriolo proximal determina la presencia del cuello en el espermatozoide.
b) Centriolo distal contribuye a la formacin del flagelo.
4.- Cuando aparece el anillo de Jensen, ste manda seales para que las
mitocondrias se agrupen alrededor del flagelo, as se forma el cuerpo. Las
mitocondrias brindarn la energa necesaria para que el espermatozoide tenga
una alta movilidad, le brindan una fbrica de energa propia.
5.- Cuerpo residual: son todas las estructuras que no sirven, se desechan.
Cualquier tipo de alteracin estructural se da durante la espermiognesis, dando
origen a la teratozoospermia: Permutacin de cabeza y pieza intermedia, bicfalo,
megacfalo, bicaudo y microcfalo, entre otras.
OBJETIVOS
Aplicar la metodologa de la espermatobioscopia para determinar la viabilidad
espermtica, la estructura, la movilidad y el recuento.
Analizar caractersticas fsicas del semen
Observar caractersticas morfolgicas normales y anormales de los
espermatozoides.
Describir las caractersticas funcionales (movilidad, nmero y estructura)
normales y anormales de los espermatozoides.
MATERIAL Y EQUIPO
Material biolgico: muestra en fresco de semen
Material:
-Termmetro
-Vaso de precipitados de 250 ml
Equipo:
-Placa de calentamiento
-Microscopio ptico
-Pipeta Pasteur con bulbo
-Portaobjetos
Reactivos:
-Pipeta de Thoma para glbulos blancos
-Azul de Tripano
-Cmara de Neubauer
-Metanol
-Jeringa de insulina de 1ml
-Giemsa
-Esptula
-Vaselina slido (Petrolato)
-Tubo cnico de centrfuga
-Solucin de Citrato de Sodio
-Tira de pH
-Hipoclorito de Sodio
-Palillo
METODOLOGIA
1. Toma de muestra
2. Despus de un periodo de abstinencia sexual de 3 a 5 das previos a la
recoleccin.
3. Se realizara espermatobioscopia directa por mtodo de masturbacin, puesto
que permite que la muestra sea completa y sin contaminacin. No deben
aceptarse las muestras recogidas en preservativos ya que contienen sustancias
espermicidas que alteraran el resultado.
4. Se suelen utilizar frascos de polipropileno neutro diseados para la recoleccin
de orina, los cuales son limpios, secos y estriles. Previamente a la recogida se
debe realizar un lavado minucioso del meato urinario y del glande.
5. Una vez realizada la recoleccin, debe conservarse a bao mara a 37C para
evitar los cambios de temperatura que afectan su calidad.
Examen fsico del semen
6. Color: Se observa y se anota el color que representa. El semen recin emitido
es denso, viscoso, opaco y blanquecino. El color amarillento indica piospermia
por infecciones y el color rojizo hemospermia por procesos varicosos o
traumticos.
7. Volumen: La medida del volumen se realiza colocando la muestra en un tubo de
centrfuga graduado y se registra el volumen. El volumen normal es de 2 a 5 ml,
siendo el volumen medio 3.5 ml. Un volumen superior a 10 ml se denomina
polisemia y es patolgico, ya que los espermatozoides van muy diluido y llegan
en poca concentracin al moco cervical. Un volumen inferior a un ml se
denomina oligocemia y tambin es completamente patolgico.
8. Licuacin: Para evaluar, al verter en el tubo cnico en la orilla se pondr una
gota y se alejara para observar la forma en que escurre que debe ser en hilo;
despus de 1 hr, se homogeneizara y con un palillo se tomara un poco de la
muestra y se observara como escurre que debera ser en gota. El semen
coagula tras su emisin y en circunstancias normales deben licuarse totalmente
a los 15 minutos. Un semen que se emite ya licuado indica posible inflamacin
prosttica o de las vesculas seminales. Un tiempo de licuacin superior a 4
horas supone un obstculo para la fecundacin.
9. pH: El pH se determina fcilmente con una tira reactiva y debe hacerse
relativamente pronto porque se va alcalinizando con el tiempo. El lquido
seminal tiene un pH alcalino oscilando entre 7,2 y 8. Si hay inflamacin de la
glndula, el pH es superior a 8. Si hay una obstruccin en el conducto
eyaculador el pH puede ser cido.
Estudio microscpico: Consiste en el estudio de las caractersticas de los
espermatozoides comprende los siguientes exmenes.
10. Recuento: Dilucin de la muestra con una pipeta de Thomas de glbulos
blancos hasta la seal 0,5 y el lquido diluyente (solucin de citrato de sodio)
hasta la seal 11. Con ello se obtienen una dilucin 1/20. El citrato de sodio
tendr 2 propsito, evitar la aglutinacin de los espermatozoides y como
ayuda para conservar.
Se homogeniza la muestra agitando intensamente la pipeta sujeta por ambos
extremos haciendo girar la bolita de su interior. Llenamos la cmara de
recuento de Neubauer. Se desecha las 3 o 4 primeras gotas, y se llena la
cmara dejando reposar 2 minutos en una cmara hmeda para que
sedimente los espermatozoides.
Se coloca la cmara en la platina del microscopio y con el objetivo 10x se
comprueba que la distribucin que es homognea y que no hay aglutinacin
de espermatozoides. Se procede al conteo de 1 cuadricula grande para
leucocitos, la cantidad obtenida se multiplica por 200,0000 y el resultado es el
nmero de espermatozoides por ml.
11. Movilidad: La movilidad puede medirse mediante observacin directa, para
esto, se monta una gota de semen lquido o licuado entre porta y cubre con el
portaobjeto precalentado a 37 y que en los bordes de la gota tiene vaselina,
para evitar la desecacin. Se observa microscpicamente.
La movilidad se valora observando varios campos con el objetivo de 40x,
contando por lo menos 100 espermatozoides por campo. La movilidad se
registra en % de espermatozoides mviles y en % de inmviles.
Es necesario que los espermatozoides tengan una movilidad activa para que
atraviesen el moco cervical y lleguen hasta el vulo. Esta movilidad va a
depender de factores intrnsecos para los espermatozoides.
12. Vitalidad: Se toma una gota homognea de la muestra de semen y se coloca
en un portaobjetos, para teir con azul de tripano. Observar al microscopio a
10x y a 40x. Los espermatozoides muertos sufren una alteracin en su
membrana, que hace que esta deje pasar a su interior el colorante (azul de
tripano) mientras que las formas vivas no se colorean. Es un estudio
complementario que se distingue dentro del grupo de las formas inmviles de
las que estn vivas de las que estn muertas, el % de espermatozoides
teidos nunca puede ser superior al de formas inmviles.
13. Estudio morfolgico: Se realiza un frotis tomando una gota de la muestra de
semen con una pipeta Pasteur y extendiendo la por capilaridad y arrastre con
un portaobjetos. Se deja secar la laminilla y se fija con metanol durante 5 min.
Concluido el tiempo de fijado se tie con Giemsa por 5 min y luego del tiempo
se hace un lavado simple. Observar a microscopio a 10x y 40x. Contar 100
espermatozoides e identificar cuantos presentan anormalidades.
Es muy importante el conocimiento de las caractersticas morfolgicas de los
espermatozoides para valorar el potencial fecundativo de una muestra junto
con el nmero total de espermatozoides y su movilidad. La morfologa del
espermatozoide se valora mediante recuentos diferenciales de los tipos de
espermatozoides morfolgicamente normales y anormales en extensiones
teidas.
RESULTADOS
Licuacin del semen al
inicio
Licuacin del semen 1hr
despus
Volumen
pH
Color
Movilidad
Vitalidad
Morfologa
Recuento
Valores de referencia
Viscoso escurre en hilo
Valores de la muestra
escurre en hilo
Liquido escurre en gotas
escurre en gotas
3.5 5 ml
7.5 8
Blanco opalescente
2.5 ml
7
Blanco
con
tonalidad
amarilla muy ligera
80%
85 - 90%
10/100 son anormales
predominan macrocfalos
98600000 por ml
80%
90%
70% de normales
30% de anormales
Mnimo 50 a 60 millones por
ml
100 millones por ml
2.- Estructura de los espermatozoides:
Aumento con lente 40x.
A-1
Aumento con lente 40x.
A-2
Aumento con lente 40x.
A-3
Aumento con lente 40x.
A-4
ANALISIS DE RESULTADOS
En licuacin al inicio y a la hora, la muestra presenta valores normales.
Su volumen que presente es ms bajo por 1 ml que el promedio.
El pH se encuentra dentro del rango ya que tena una coloracin un poco ms
fuerte que el valor de 7, pero menor al valor de 8; por lo cual en el resultado se
coloca al 7 siendo un valor normal.
El color que presenta la muestra tiene una coloracin normal con algunos matices
amarillentos, muy ligeros para representar algn problema.
En la observacin de la movilidad, la mayora presentan movilidad en un ndice de
80%, un valor normal.
Al observar la laminilla de vitalidad, se encontraron pocos espermatozoides
teidos por lo que se valora que hay de un 85 a 90% vivos, el cual est dentro de
los parmetros normales.
En el recuento se obtuvieron en todas las casilla un valor de 21-36
espermatozoides, que al sumar nos dan 493. Se multiplico por 200,000 ya que
solo se hizo el conteo de una cuadricula grande, y da como resultado 98,600,000
por ml, el cual es un valor normal.
21
24
30
36
34
32
31
32
32
30
29
32
32
36
34
28
Estructura de los espermatozoides:
En la muestra A-1con lente 40x se observa al centro un tipo de teratozoospermia,
la cual es megacfalo. Teniendo as una cabeza muy grande y un flagelo normal,
sobresale entre los dems.
En la muestra A-2 con lente 40x se observa, a las 7 de las manecillas del reloj,
otra teratozoospermia: un megacfalo y una prdida de fragmento en la parte de la
cabeza.
En la muestra A-3 con lente 40x se observa claramente, a las 4 de las manecillas
del reloj, un bicfalo (tipo de teratozoospermia en la cual presentan 2 cabezas y un
solo flagelo) y un bicaudo (una sola cabeza con dos flagelos)
Finalmente en la muestra A-4 con lente 40x, se observan espermatozoides
normales, presentan cabeza, pieza media y flagelo de tamao y estructuras
correctas.
CONCLUSIONES
Se aplic la metodologa de la espermatobioscopia directa que determina la
viabilidad, vitalidad espermtica, estructura, movilidad y recuento de los
espermatozoides (en cmara de Neubauer), y se analiz las caractersticas
fsicas de la muestra de Semen, podemos determinar mediante los resultados
obtenidos y teniendo control sobre el correcto manejo de la muestra que:
La Evaluacin realizada y con base a los valores de referencia se puede
determinar que el individuo es frtil, se encuentra en un estndar normal y dentro
de los parmetros.
CUESTIONARIO
1.
Escriba cuales estructuras celulares estn involucradas en el proceso espermiognico.
En este proceso estn involucrados los organelos de la espermtida que son:
Centriolo: sistema de propulsin para trasladar el ncleo
Aparato de Golgi: provee la formacin de la vescula acrosmica y que contiene enzimas que
dirigen protenas y glcidos complejos
Granulo autosmico
Mitocondrias: proveen de energa al espermatozoide
Desarrollo del acrosoma: almacena enzimas que son utilizadas para degradar y atravesar la
cubierta externa del gameto femenino.
2.
Describa en detalle los mecanismos celulares que se llevan a cabo durante el proceso
espermiognico.
La primera etapa es la construccin de la vescula autosmica desde el aparato de Golgi. El
acrosoma forma un casquete que cubre al ncleo del espermatozoide. A medida de que se
forma el casquete acrosmico el ncleo rota de modo tal que el casquete quedar despus
enfrentado a la membrana basal del tbulo seminfero. Esta rotacin es necesaria debido a que
el flagelo que est comenzando a formarse desde el centriolo desde el otro lado del ncleo, que
se extender hacia la cavidad. Durante el ltimo estadio de la espermiognesis, el ncleo se
aplana y se condensa, el citoplasma restante se desecha y las mitocondrias forman un anillo
alrededor de la base del flagelo.
Uno de los principales cambios en el Ncleo es el remplazo de las histonas por protaminas. La
transcripcin de los genes por protaminas es observada en las espermtides haploides
tempranas, aunque la traduccin es demorada por varios das. Las protaminas son protenas
relativamente pequeas con cerca de un 60% de arginina.
Durante la espermiognesis los ncleos se disocian, y las histonas del ncleo haploide son
finamente reemplazadas por protaminas. Esto causa la paralizacin completa de la
transcripcin en el ncleo y facilita que este adquiera una estructura casi cristalina. El
espermatozoide resultante luego ingresa en la cavidad del tbulo.
3.
Defina los trminos esterilidad e infertilidad.
La infertilidad: la incapacidad para conseguir o mantener el embarazo, no es una enfermedad
en el usual sentido de la palabra. No es un sntoma o afeccin que impide el bienestar fsico de
individuos o parejas infrtiles. No hay definicin precisa de infertilidad. En su lugar la infertilidad
es la ausencia de embarazo despus de un tiempo apropiado del intento de concepcin
mediante relaciones sexuales regulares.
La infertilidad puede ser causada por el fracaso para ovular o madurar al ovocito, por pocos
espermatozoides o que estos sean defectuosos, mediante el bloqueo fsico de los conductos
masculinos o femeninos o por la incompatibilidad entre el espermatozoide y el entorno del
ovocito o del tracto reproductivo.
4.
Especifique las diferencias entre vialidad y vida espermtica u ovular indicando para
cada caso sus valores normales.
La viabilidad espermtica es la cantidad de espermatozoides vivos en una muestra y se mide en
porcentajes, el normal es de 75 %
La vida espermtica depende de las condiciones en las que se encuentre el espermatozoide.
Generalizando, se puede considerar que, en medio seco y a temperatura ambiente, no
consiguen sobrevivir ms de algunos segundos, en cualquier caso hasta que se observe que el
semen, el lquido que los contiene, se ha secado, porque no olvidemos que el semen es un
medio ptimo de humedad. Dentro de los conductos deferentes del hombre, el espermatozoide
tiene una vida de 42 das aproximadamente. En el interior del canal vaginal (un medio hmedo),
el pH cido no les suele ser favorable, por otra parte el pH neutro de las secreciones seminales
crea un entorno favorable que protege a los espermatozoides del pH cido de la vagina, si
consiguen llegar hasta el cuello del tero, o ms all de ste en las trompas, pueden vivir y
permanecer activos hasta unos tres a cinco das. Si el pene acaba de eyacular, aunque se
observe que el semen ya se ha secado, puede contener restos de espermatozoides en su
conducto deferente (el mismo lquido preseminal los arrastra en su salida), por lo que una nueva
penetracin sin proteccin tiene riesgo de embarazo. Igualmente, si previamente hubo
penetracin sin proteccin, aun sin eyacular dentro, ya que como expuse antes, pueden vivir
hasta 42 das en los conductos deferentes del hombre.
En cuanto al agua, tener en cuenta que no cualquier tipo de agua es vlido para permitir la
supervivencia de las clulas espermticas; pues estas necesitan unas condiciones especficas
para su conservacin ptima como son, por ejemplo, un pH adecuado. El agua potable de red
tratada con cloro, nos asegura una baja carga microbiana, pero dicho cloro es txico para el
semen, sin embargo el agua del mar es bastante adecuada.
5.
Qu significa el termino Reproduccin asistida y como lo relaciona con la metodologa?
Reproduccin asistida o fecundacin artificial es el conjunto de tcnicas o mtodos biomdicos,
que facilitan o sustituyen a los procesos naturales que se dan durante la reproduccin. La
Reproduccin Asistida no puede considerase como un mtodo teraputico en el sentido habitual
ya que no cura las diversas situaciones patolgicas de la infertilidad. El paciente sigue con el
mismo problema orgnico despus de su utilizacin y tendr que volver a someterse a estas
tcnicas si desea lograr otro embarazo.
Mientras que hay numerosos tratamientos para las mujeres que pueden llevar a la maduracin
y ovulacin de los ovocitos, hay relativamente pocos tratamientos para los hombres que no
estn produciendo suficientes espermatozoides. En las mujeres las gonadotrofinas exgenas o
las drogas antiestrognicas ( clomifeno o tamoxifeno ), pueden ser utilizadas para estimular los
ovarios. En los hombres los espermatozoides pueden ser concentrados e inyectados en el
ovocito o en el tracto reproductivo cerca del ovocito, puede existir una relacin directa con la
metodologa de la espermatobioscopia, ya que esta nos predice si los espermatozoides
utilizados en cualquier tcnica de reproduccin asistida son viables o no, se considera a esta
tcnica la primera a considerar en el estudio de la pareja estril, en torno a los espermatozoides
por ser precisa en torno a las caractersticas fsicas y morfolgicas normales y anormales. La
tcnica de la espermatobioscopia es muy sencilla y fcil de realizar adems de ser de bajo
costo econmico.
BIBLIOGRAFIA
- Dollander A., Fenart R., (1990), Elementos de embriologa (Embriologa
general), Editorial Noriega Limusa, Mxico D.F., pp. 93-100
- Balinsky B. I., (1978), Introduccin a la embriologa, Ediciones Omega,
Espaa Barcelona, pp. 19-24
- Gilbert S. Biologa del desarrollo. 7a Edicin. Editorial Mdica
panamericana. Mxico. 673 680 pp.
- Langman T. Embriologa mdica 7a Edicin Ediorial Mdica panamericana.
Mxico 16-20 pp.
