Propiedades fsico-qumicas y cinticas de la enzima

lacasa inmovilizada de Fusarium proliferatum

Gonzlez Arzola K. y Falcn Sanabria M. A.
Departamento de Microbiologa y Biologa Celular. Facultad de Farmacia.
Universidad de La Laguna. Avenida Astrofsico Francisco Snchez.38206. La
Laguna. Tenerife. Correo electrnico: [email protected]
Las lacasas (EC 1.10.3.2) son glicoprotenas producidas por algunos
hongos y bacterias, que catalizan la oxidacin de diferentes compuestos
fenlicos. Son enzimas excepcionalmente verstiles, que pueden ser
empleadas en diversos procesos industriales (bioblanqueo y depuracin de los
efluentes de industrias papeleras, degradacin de compuestos fenlicos
contaminantes, etc). Actualmente, los estudios van dirigidos a la bsqueda de
nuevas lacasas con mayor estabilidad, y, sobre todo, al empleo de enzimas
inmovilizadas. La inmovilizacin no solo contribuye a la estabilizacin de la
protena, sino que facilita la reaccin enzimtica a gran escala. Los soportes
empleados para ello son muy diversos: celulosas modificadas, chitosano,
carbn activado, perlas de vidrio, entre otros (1). La unin se puede efectuar a
travs de enlaces covalentes con el soporte o con un agente entrelazante, o
bien por adsorcin inica a la matriz. El objetivo de este trabajo consiste
mejorar las propiedades de la enzima lacasa de Fusarium proliferatum a travs
de su inmovilizacin sobre perlas de vidrio, empleando glutaraldehido como
agente de entrecruzamiento (2).
La actividad lacasa inmovilizada present un pH ptimo ms bsico
(4,5) que la enzima libre (3,5), as como una temperatura ptima de reaccin
superior (70C frente a los 60C de la enzima libre). Asimismo, la enzima
inmovilizada mantuvo un 100% de su actividad tras 2 horas de incubacin en
un rango de pH de 5 a 9, y alrededor de un 90% a pH entre 2 y 4, en
comparacin con la lacasa libre (60 y 50%, respectivamente). De la misma
forma, cuando se someti durante 2 horas a 30 y 40C conserv ntegra su
actividad enzimtica, perdiendo solo un 40% de la misma cuando se trat a
50C. Cabe destacar que la enzima resisti el tratamiento a 80C (15% de
actividad). Por otra parte, tambin se mejor la afinidad por el sustrato, ya que
la constante de Michaelis (Km) disminuy 3 veces en comparacin con la
lacasa libre y la velocidad mxima de la reaccin se increment 17 veces, lo
que da lugar a una eficiencia cataltica 38 veces superior. Este ltimo aspecto
contrasta con los descritos para otras lacasas fngicas.
En conclusin, la lacasa inmovilizada presenta una excelente
estabilidad en condiciones extremas de pH y temperatura, as como una mejora
sustancial de sus propiedades cinticas, lo que la convierte en un catalizador
ideal para su aplicacin industrial.
(1) Durn N., Rosa M. A., D Annibale A. y Gianfreda L. (2002). Appications of
laccases and tyrosinases (phenoloxidases) immobilized on differents supports:
a review. Enz. Microbiol. Technol. 31: 907-931.
(2) Leonowicz a., Sarkar J. M. y Bollag J.-M. (1988). Improvements in stability
of an immobilized fangal laccase. Appl. Microbiol. Biotechnol. 29: 129-135.