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 TERCERA EDICIN
MINISTERIO DE SALUD

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

JR. Cpac Yupanqui 1400, Jess mara Telf. 471-3254 / Fax: 471-7443 Lima, Per, 1997 Diseo e impresin: Art. Lautree [Link].

MANUAL DE LABORATORIO COLERA

COMIT RESPONSABLE:
Dr. Carlos Carrillo Parodio Blgo. Nora Bravo Cruz Dr. Jos Aguilar Olano Dr. Alfredo Guillen Oneeglio Dr. Augusto Yi Chu (tJ

COMIT EDITOR:
Dr. Alfonso Zavaleta Martnez- Vargas Dr. Csar Cabezas Snchez Dr. Jaime Chang Neyra

MINISTERIO DE SALUD ALTA DIRECCIN

Dr. Marino Costa Bauer Ministro Dr. Alejandro Aguinaga Recuenco Viceministro

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Dr. Carlos Carrillo Parodio Jefe.

CENTRO NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD

Dr. Csar Cabezas Snchez Directpr General

PERFIL DE LOS AUTORES

Mdico Cirujano, Doctor en Medicina Profesor Principal, Departamento Acadmico de Microbiologa. Facultad de Ciencias y Filosofa, Universidad Peruana Cayetano Heredia. Jefe, Instituto Nacional de Salud

Dr. Carlos Carrillo Parad;

Biloga, Estudios en Maestra Microbiologa. Ex Miembro del Laboratorio de Enteropatgenos, Divisin de Bacteriologa, Centro Nacional de Laboratorios de Salud Pblica, INS, MINSA. Profesor Auxiliar, Facultad de Tecnologa Mdica, Universidad Federico Vil/arreal.

Blga. Nora Bravo Cruz

Dr. Jos Aguilar Olano

Mdico Cirujano, Master en Medicing., Especialista en Inmunologia y Reumatologa. Mdico Asistente, Hospital Nacional [Link] Heredia. Profesor Asociado, Departamento de Medicina, Universidad Peruana Cayetano Heredia.

Dr. Alfredo Guilln Oneeglio

Mdico Cirujano Laboratorio de Bacteriologa Especial, Centro Nacional de Laboratorios de Salud Pblica, INS, MINSA. Profesor Auxiliar Facultad de Tecnologa Mdica, Universidad Federico Villarreal

Mdico Microbilogo ExJefe del Laboratorio Central, Hospital Nacional Cayetano Heredia. Profesor Principal, Departamento de Microbiologa, Facultad de Ciencias y Filosofa, Universidad Peruana Cayetano Heredia.

Dr. Augusto Yi Chu(t)

PERFIL DE LOS EDITORES

Dr. Alfonso Zavaleta Martnez- Vargas
Mdico Cirujano, Doctor en Farmacologa Director General, Centro Nacional de Control de Calidad, Instituto Nacional de Salud, MINSA Profesor Principal, Seccin Farmacologa, Departamento Acadmico de Ciencias Fisiolgicas, Facultad de Ciencias y Filosofa, Universidad Peruana Cayetano Heredia Miembro, Instituto de Medicina Tropical "Alexander Von Humbolt", Universidad Peruana Cayetano Heredia. Mdico Cirujano, Master en Medicina, Especialista en Enfermedades Infecciosas y Tropicales Director General, Centro Nacional de Laboratorios de Salud Pblica, Instituto Nacional de Salud, MlNSA. Profesor invitado de Medicina Tropical, Universidad Nacional Mayor de San Marcos y Universidad Peruana Cayetano Heredia. Mdico Cirujano, Master of Science in Community Health in Developing Countries Director Ejecutivo de Certificacin y Garanta de la Calidad, Centro Nacional de Control de Calidad, Instituto Nacional de Salud, MINSA, Investigador, Instituto de Medicina Tropical "Alexander Von Humbolt", Universidad Peruana Cayetano Heredia.

Dr. Csar Cabezas Snchez

Dr. Jaime Chang Neyra

La edicin de este Manual se efectu en el marco del Convenio de Cooperacin suscrito entre el Instituto Nacional de Salud y la Universidad Peruana Cayetano Heredia.

CONTENIDO

Pg.

1. INTRODUCCION 2. ALCANCE 3. TOMA Y ENVIO DE LA MUESTRA 3.1. OBTENCION DE LA MUESTRA 3.2. ENVIO DE LA MUESTRA 4. PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA 5. REMISION DE LA CEPA A INVESTIGAR 6. NORMAS DE BIOSEGURIDAD 7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 8. FLUXOGRAMA DE AISLAMIENTO DE Vibrio cholerae 9. ANEXOS 9.1. MATERIAL Y EQUIPOS 9.2. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO 9.3. FICHA CLINICO-EPIDEMIOLOGICA DE ENVIO DE MUESTRAS

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PRESENTACION

Este documento tiene como finalidad explicar el conjunto de procedimientos simplificados para el tratamiento de las muestras humanas en la bsqueda e identificacin del Vibrio cholerae 01. La epidemia de clera que afecta al pas, ha puesto en evidencia los graves problemas de salud pblica y el estado de deterioro de las estructuras sanitarias y de control ambiental, representando uno de los principales desafos de la salud pblica en el Per. Debe mencionarse que este documento no aborda todas las metodologas para el estudio bacteriolgico del V. cholerae dedicndose a aquellos procedimientos de fcil acceso y de bajo costo, que pueden realizarse en el momento actual en la mayora de los laboratorios a nivel nacional. Es nuestra esperanza que este esfuerzo del Instituto Nacional de Salud conlleve a un consenso sobre la necesidad de iniciar una etapa de publicaciones a manera de Notas Tcnicas que contribuyan a la diseminacin de la informacin cientfica en el pas.

CARLOS CARRILLO PARODI

1. INTRODUCCION

El clera es una infeccin intestinal aguda causada por el Vibrio cholerae, el que posee una enterotoxina termolbil que produce diarreas acuosas profusas (como agua de arroz), sin moco, ni sangre, acompaada de vmitos y calambres, pudiendo ocasionar una deshidratacin severa, hipotensin, muchas veces shock y a veces la muerte. Los casos epidmicos son causados por el Vibrio cholerae serogrupo 01, biovar El toro El clera existe en forma endmica en algunos pases de Asia y frica con condiciones de salubridad muy deprimidas, y desde Enero de 1991 se viene presentando un brote epidmico en el Per dentro de la sptima pandemia. En el diagnstico de laboratorio del clera se deben considerar los siguientes aspectos: a. El envo de muestras desde cualquier establecimiento de salud que no tenga servicio de laboratorio de microbiologa. b. El cultivo para el aislamiento del Vibrio cholerae en los laboratorios locales (Centro de Salud, Hospitales, Clnicas, Institutos especializados), yel envo de los cultivos sospechosos al Instituto Nacional de Salud (Laboratorio Nacional de Referencia de Enteropatgenos) para la confirmacin y serotipificacin. c. La confinnacin, serotipia y pruebas especiales para la identificacin final en el Laboratorio Nacional de Referencia de Enteropatgenos (LANARE), Instituto Nacional de Salud, Lima.

2. ALCANCE

Esta norma describe el equipamiento, material de laboratorio, medios de cultivo y procedimientos necesarios para que los laboratorios de Microbiologa de los Centros de Salud, Hospitales, Institutos especializados u otras Instituciones del Sector Salud puedan realizar el aislamiento y la identificacin de V. cholerae.

3. TOMA Y ENVIO DE LA MUESTRA

3.1. Obtencin de la muestra:

La muestra de heces de un paciente sospechoso de clera debe recolectarse antes de la administracin de cualquier antibitico. La muestra se obtiene con un hisopo de algodn previamente esterilizado, el cual se desenvuelve de su proteccin de papel, se lubrica previamente introducindolo en el espesor del medio de transporte y luego se introduce en el recto unos 3 cms. imprimiendo movimientos de rotacin, tratando de obtener una pequea cantidad de muestra. Una vez obtenida sta, se introduce el hisopo hasta el fondo del tubo que contiene el medio de transporte que puede ser el de Cary y Blair o el de Amies. En estas condiciones el microorganismo patgeno permanece viable hasta por 4 semanas a temperatura ambiente. Cuando las deposiciones son evacuadas en un recipiente la muestra se puede obtener directamente con el hisopo. NO SE
DEBE REFRIGERAR LA MUESTRA.

En la etiqueta de cada tubo se debe poner el nombre del paciente o cdigo que identifique la muestra y debe ir acompaada de una ficha clnicoepidemiolgica (Anexo 2) con los datos del paciente. Se debe escribir el mismo cdigo tanto en el tubo de medio de transporte como en la ficha que lo acompaa.

Fig. N1 toma de muestra mediante hisopado rectal

Si el procesamiento de la muestra va a realizarse en el mismo da, se puede enviar una muestra de heces (1 a 3 mI o media cucharadita) en un frasco limpio o tomar la muestra y ponerla directamente en un medio de enriquecimiento como es el caldo peptonado. En estos casos tampoco debe refrigerarse la muestra. 3.2. Envo de las muestras: Las muestras deben ser enviadas al hospital ms cercano que cuente con servicio de Microbiologa, el mismo que debe encargarse de proporcionar los medios de transporte a sus centros perifricos.

4. PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
La tcnica para el diagnstico bacteriolgico del clera no se diferencia mucho de la que se emplea para el aislamiento de bacterias de la familia Enterobacteriaceae y se utilizan los mismos medios de cultivo y el Agar TCBS. En el caso de pacientes con cuadro de diarrea aguda se puede sembrar la muestra de heces, hisopado rectal o vmito directamente en agar TCBS. Otra alternativa para pacientes convalescientes o en la bsqueda de portadores es

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sembrarla en un medio de enriquecimiento como es el caldo peptonado. El enriquecimiento de la muestra se realiza al inocular 0.5 ml 1 g de muestra en un tubo que contenga aproximadamente 10 ml de caldo peptonado alcalino. Incubar el medio de seis a ocho horas a 37C. Luego de este tiempo se toma una asada de la superficie del medio de enriquecimiento o se aplica la muestra directamente en el medio selectivo que es el agar TCBS, se distribuye la muestra haciendo estras en la superficie del agar,(la superficie de la placa debe estar seca antes de colocar la muestra) y se incuba por 24 horas a 37C. Conjuntamente con la investigacin de V. cholerae se debe buscar la presencia de otros enteropatgenos bacterianos que producen cuadros similares que pueden ser E. coli enterotoxignico, V. parahaemolyticus, Salmonella entrica serovar Enteritidis. En el agar TCBS las colonias de V. cholerae son de color amarillo, redondas, cremosas, ligeramente convexas, de 2 a 4 mm de dimetro, mientras que las de V. parahaemolyticus son de color verde azuladas. Si se observan colonias de color amarillo, stas deben inocularse en placas o tubos de TSA el inculo debe ser abundante para obtener un crecimiento a las 6 u 8 horas y poder realizar pruebas presuntivas rpidas: oxidasa,

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Foto N1. Siembra primaria en TCBS. Colonias amarillas sospechosas de Vidrio cholerae prueba del cordn (String test) y la serologa con suero polivalente 01, para obtener un diagnstico rpido. Al mismo tiempo las colonias sospechosas se deben inocular en TSI, LIA (con un papel filtro impregnado en re activo Kovac o de Gilles para la prueba de indol). Estos se incuban a 37C por 18 a 24 horas. De no contarse con suero polivalente se puede hacer la prueba de tolerancia a la sal para confirmar la presencia de V. cholerae.

Prueba de Oxidasa: Sobre un pedazo de papel filtro en una placa de petri, se colocan 2 a 3 gotas de reactivo de oxidasa. Se extiende el cultivo sobre el papel hmedo utilizando un palillo de dientes (no se debe utilizar el asa de siembra que generalmente es de nicrn pues dan falsos positivos). La coloracin violeta oscura que aparece en 30 segundos a 1 minuto indicar un resultado positivo caracterstico de Vibrio. Como control negativo de la prueba se utiliza una cepa de Escherichi coli y como control positivo una cepa de Pseudomonas aeruginosa.

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Foto N2. Prueba de la oxidasa, el color violeta oscuro (derecha) indica la prueba positiva. Prueba del Cordn (String test o de la cuerda): Sobre un portaobjetos se coloca una gota de desoxicolato de so dio al 0.5% y se hace una suspensin con el cultivo en evaluacin. La prueba ser positiva si la suspensin se vuelve viscosa y se aprecia la formacin del cordn al levantar suavemente el asa de siembra. Si slo se observa turbidez que persiste ms de un minuto la prueba es negativa.

Foto N 3. Prueba del cordn positiva.

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 Serologa con antisuero polivalente 01: En una lmina portaobjetos se hace una suspensin del cultivo con una gota de suero fisiolgico, frente a sta se coloca una gota de antisuero polivalente 01 de Vibrio cholerae, se mezcla con el asa de siembra e inmediatamente se mueve la lmina en vaivn unas 15 veces para obtener una mezcla ptima; la lectura debe realizarse antes de un minuto y si se observa la presencia de grumos de aglutinacin sta se considera como prueba positiva.

Foto N 5. Serologa con antisuero polivalente: Reaccin positiva (derecha).

Lectura e interpretacin del TSI. LIA: El Cultivo de V. cholerae, produce en:

- En el TSI: K/A--, se observa el fondo del tubo de color amarillo indicando acidez en el medio (ataque a la glucosa) y la punta del plano inclinado de color rojo, no hay formacin de gas a partir de glucosa ni de hidrgeno sulfurado; muchas veces se observa que el plano inclinado es de color amarillo durante las primeras horas de cultivo A/A-- y se va tornando alcalino rpidamente para dar la lectura de K/ A --.

- En el LIA: K/K, se observa la decarboxilacin de la lisina (fondo y plano inclinado de color morado intenso), indicando la alcalinidad de todo el medio.
- lndol: En el tubo de LIA se observa que el extremo del papel de filtro

impregnado con re activo de Kovac o de Gilles (para la prueba de lndol) toma

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un color rosado o fucsia indicando un resultado positivo

Foto N 4. Vidrio cholerae: Reacciones en TSI LIA INDOL.

PRUEBAS COMPLEMENTARIAS

Prueba de tolerancia a la sal Se prepara soluciones de caldo peptonado o caldo nutritivo con diferentes concentraciones de Cloruro de Sodio: 0%, 7% Y 10%, se siembra el cultivo a investigarse y se deja 24 horas en la incubadora a 37C. La lectura se efecta observando el crecimiento del germen, de acuerdo con el siguiente cuadro:
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------

BACTERIA

Concentracin de CINa 0% 7% 10%

-----------------------------------------------------------------------------------------------------Vibrio cholerae Vibrio alginolyticus + + +

------------------------------------------------------------------------------------------------------

Determinacin de Serotipo Se pone una gota de cada uno de los antisueros Inaba y Ogawa en una lmina de vidrio, se aade una pequea cantidad de cultivo al suero con ayuda de una asa de siembra y se mezcla inmediatamente para obtener una suspensin uniforme. Mientras se va rotando la lmina se observa la presencia

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de aglutinacin que debe aparecer antes de los 60 segundos. Slo una aglutinacin franca debe considerarse como positiva. Se debe probar si es que ocurre aglutinacin espontnea de la bacteria usando una gota de solucin salina fisiolgica en lugar del antisuero. ---------------------------------------------------------------------------------------------Antisuero Inaba Ogawa ------------------------------------------------------------------------------------------------------------Serovar Inaba + Serovar Ogawa + Serovar Hikojima + + -------------------------------------------------------------------------------------------------------------

5. REMISION DE LA CEPA A INVESTIGAR

Los Laboratorios que realizan cultivos de V. cholerae deben remitir al Instituto Nacional de Salud (LANARE), todos los cultivos en agar nutritivo o en TSA en tubos con tapa con rosca o de jebe, o en su defecto en cualquier frasco pequeo de vidrio con tapn sellados con parafina (el cierre debe ser hermtico). Debe rotularse el frasco de tal manera que no se borre o pierda la identificacin, as como transportarse y conservarse a temperatura ambiente, acompaados de su respectiva ficha. Estos tubos deben transportarse dentro de un recipiente seguro para evitar accidentes, se puede utilizar latas como las de caf instantneo, con las paredes y el fondo acolchado con algodn o papel para que los tubos no se rompan. Estas latas deben estar cerradas hermticamente utilizando para esto tiras de cinta adhesiva alrededor de la tapa. Las mismas deben ir correctamente identificadas por fuera indicando la direccin a donde van a ser enviadas y sealndose que contiene material biolgico, como se indica a continuaci

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6. NORMAS DE BIOSEGURIDAD
El error humano y las prcticas impropias de laboratorio pueden comprometer las mejores medidas de proteccin, por ello es indispensable que cada laboratorio adopte un cdigo de prcticas apropiadas a su trabajo y que todo el personal lo observe estrictamente El personal de laboratorio est expuesto a riesgos profesionales como cualquier otro trabajador. La mayora de las infecciones adquiridas en el laboratorio pueden atribuirse a uno o varios de los siguientes procedimientos peligrosos comunes a todo el personal de laboratorio: - Procedimientos que entraan riesgos de inhalacin por ejemplo al sembrar placas de agar, emplear pipetas, centrifugar, homogenizar, flamear asas, abrir cultivos. - Procedimientos que engendran riesgos de ingestin, por ejemplo el pipear con la boca, manipulacin de muestras, hacer frotis y cultivos. - Procedimientos relacionados a la eliminacin de material infeccioso. Son raros los reportes sobre casos de enteritis por Vibrio cholerae como consecuencia de una infeccin en el laboratorio. A pesar que todos los vibrios patgenos pueden encontrarse en las heces, la ingestin de V. cholerae constituye el principal peligro. La dosis oral infectante de V. cholerae en individuos sanos no aclorhdricos est en el orden de 108 grmenes. La importancia de la exposicin por aerosoles no es conocida. El riesgo de infeccin seguida de

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una exposicin oral puede incrementarse en individuos aclorhdricos. Aunque las vacunas han provisto una proteccin parcial de duracin corta (3 a 6 meses) para individuos no inmunes en reas altamente endmicas, su uso rutinario en el personal de laboratorio no se recomienda. Todos los procedimientos para el diagnstico de clera con cultivos o materiales clnicos infectados potencialmente, deben ser realizados segn el Nivel 2 de Bioseguridad. Esto implica las siguientes medidas: 1. El personal de laboratorio debe tener un entrenamiento especfico en el manejo de esta bacteria. 2. N o se debe pipetear material infeccioso con la boca (suero sanguneo, muestras, cultivos). 3. No se permitir comer, beber, fumar, almacenar alimentos ni aplicarse productos de tocador en el sector de los trabajos de laboratorio. 4. El laboratorio siempre estar ordenado, limpio y libre de todo el material que no sea pertinente a los trabajos. 5. Las mesas de trabajo sern descontaminadas por lo menos una vez al da y despus de que caiga" sobre ellas cualquier material contaminado. 6. Todas las personas debern lavarse las manos despus de manipular material infeccioso y tambin al salir del laboratorio. 7. Todos los procedimientos se practicarn cuidadosamente a fin de reducir al mnimo la formacin de aerosoles. 8. Se descontaminarn todos los deshechos lquidos o slidos contaminados antes de su eliminacin o de darles otro destino. 9. El personal de laboratorio deber llevar mandiles u otro uniforme apropiado. 10. El jefe del laboratorio garantizar que solamente tengan acceso al laboratorio las personas a quienes se les han advertido los posibles peligros y renan los requisitos especficos para entrar en el local. 11. Mientras se llevan a cabo los trabajos, las puertas del laboratorio permanecern cerradas

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12. No se permitir la entrada en el laboratorio a las personas expuestas a un mayor riesgo de adquirir una infeccin o para quienes la infeccin puede resultar extraordinariamente peligrosa, entre estas personas figuran los nios y los individuos afectados por inmunodeficiencia o inmunosupresin. 13. Se utilizarn guantes para todos los procedimientos que obliguen al contacto directo con material infeccioso. 14. Cualquier derrame peligroso, accidente o exposicin manifiesta o potencial a material infeccioso se notificar de inmediato al Jefe del laboratorio.

7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
CDC-Cholerae-Per,[Link]. 40: 108-110, 1991. Ewing WH. Edwars and Ewing's Identification of Enterobacteriaceae. 4th edition. Elsevier Science Publishing Co., New York. 1986. Farmer JJ III, Hickman-Brenner FW, Kelly MT. Vibrio. In: Lennete EH, Balows A, Hausler WJ Jr, et al, (eds). Manual ofClinical microbiology. 4th ed. Washington, DC: American Society for Microbiology, 1985: 282301. Grados O. Vibrio parahaemolyticus. Diagnstico. 11: 73-62, 1983. Grados O. Gua para el aislamiento y vigilancia de Salmonella y Shigella. Lima 1982, 55 pp. Organizacin Mundial de la Salud. Cuadernos de Salud Pblica NQ 40. Principios y prcticas de lucha contra el clera. Ginebra 1970.149 pp. Organizacin Mundial de la Salud. Manual de Investigaciones de Laboratorio de Infecciones Entricas Agudas. Edicin en Espaol. Reimpresin 1991.126 pp. Richardson JH, Barkley WE, (eds). Biosafety in microbiologycal and biomedicallaboratories 2 nd ed. 1988. Washington DC. U.S. Deparment ofHealth and Human Services. 139 pp. West PA, Russek E, Brayton PR, Colwell RR. Statistical evaluation of a quality control method for isolation of pathogenic Vibrio species on selected

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Thiosulfate-Citrate-Bile-Saccharose medium. J. Clin Microbiol. 16:11101116,1982.

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9. ANEXOS

Anexo N- 1
9.1. MATERIAL Y EQUIPO NECESARIOS

9.1.1. Equipo
a. Estufa que pernta mantener los cultivos a 37C. b. Autoclave. c. Horno para esterilizacin. d. Refrigeradora. e. Balanza.

9.1.2. Material de vidrio

a. Placas Petri 100 x 10 o similares. b. Tubos de borosilicato 13 x 100. c. Tubos de borosilicato 13 x 100 con tapa de rosca. d. Balones de 500 mI 1000 mI. e. Frascos de boca ancha. f. Frascos tipo penicilina de diferentes tamaos. g. Probetas graduadas de volmenes diferentes. h. Pipetas de 1, 2, 5 Y 10 mI. i. Lminas portaobjetos.

9.1.3. Medios de cultivo

a. Agar TCBS. (Tiosulfato, Citrato, Bilis, Sacarosa). b. Agar TSI. (Triple Sugar Iron). c. Agar LIA. (Lysine Iron Agar). d. Agar Tripticase soya (TSA) e. Peptona. f. Medio de Transporte: Cary y Blair o Amies.

9.1.4. Reactivos y colorantes

a. Cloruro de sodio. b. Desoxidacin de sodio. c. reactivo de aoxidasa. d. reactivos de kovac.

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9.1.5. Material de laboratorio

a. Gradillas. b. Mechero Bunsen. c. Asas de cultivo. d. Esptula. e. Algodn. f. Lpices marcadores. g. Hisopos con punta de algodn. h. Papel filtro.

9.2. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO 9.2.1. Medio de transporte de Amies

Tioglicolato de sodio Cloruro de sodio Cloruro de potasio Cloruro de calcio Cloruro de magnesio Fosfato de potasio monobsico Fosfato de sodio dibsico Agar pH7.3 1.00g 3.00g 0.20g 0.10g 0.10g 0.20g 1.15g 4.00g

Preparacin: Pesar 10 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada, disolver con calor y distribuir en frasquitos o tubos, se auto clava a 121C por 15 minutos 9.2.2. Medio de transporte de Cary y Blair
Tioglicolato de sodio Fosfato disdico Cloruro de sodio Agar Agua destilada pH 8.4 1.50g 1.10g 5.00g 5.00g 991 ml

Preparacin: Disolver los ingredientes en agua destilada en Bao Mara calentando hasta que la solucin se aclare (no se deje hervir). Una vez enfriada la preparacin a 50C, aadir 9 ml de solucin de cloruro de calcio al 1 % recin preparada y ajustar el pH a 8.4 (con hidrxido de sodio ION). Distribuir cantidades de 5 mI en tubos limpios y esterilizados de 13x100 con tapa de rosca dejando un pequeo espacio de aire en la parte superior y con las tapas sin enroscar. Esterilizar a vapor fluente durante 15 minutos, dejar enfriar y ajustar las tapas. De no contar con tubos se puede emplear frasquitos tipo penicilina con tapa de jebe.

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9.2.3. Agar TCBS

Extracto de levadura Peptona Citrato de sodio Tiosulfato de sodio Bilis de buey Sacarosa Citrato frrico Cloruro de sodio Agar Azul de bromotimol Azul de timol pH8.6 5.00 g 10.00g 10.00g 10.00g 8.00g 20.00g 1.00g 10.00g 15.00g 0.04g 0.04g

Preparacin: Suspender 89 g de medio deshidratado en 1000 ml de agua destilada, disolver los ingredientes en Bao Mara hirviendo durante algunos minutos, agitando frecuentemente. Enfriar a 45-50C y distribuir en placas. El medio distribuido presenta una coloracin azul verdosa. No se debe esterilizar el medio en autoclave. La frmula del medio puede variar de acuerdo al fabricaI)te, seguir las instrucciones que figuran en el frasco que se use. 9.2.4. Agar TSI
Extracto de carne Extracto de levadura Peptona Proteosa peptona Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato ferroso Cloruro de sodio Tiosulfato de sodio 3.00 g 3.00 g 15.00g 5.00 g 10.00g 10.00g 1.00 g 0.20 g 5.00 g 0.30 g
12.00 g 0.024g

Agar .
Rojo de fenol pH 7.4

Preparacin: Pesar 65 gramos para 1 litro de agua destilada, calentar al fuego hasta licuar completamente. Repartir 3 ml por tubo de 13 x 100. Autoclavar a 121C por 15 minutos. Dejar solidificar dando una inclinacin muy corta. 9.2.5. Agar LIA
Peptona Extracto de levadura 5.00 g 3.00 g

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Glucosa L-lisina Citrato frrico amoniacal Tiosulfato de sodio Prpura de bromocresol Agar pH6.7

1.00 g 10.00 g 0.50 g 0.04 g 0.02 g 15.00 g

Citrato frrico amoniacal Tiosulfato de sodio Prpura de bromocresol Agar pH6.7

Preparacin: Pesar 34.5 gramos para 1 litro de agua destilada. Llevar al fuego y licuar. Repartir 3 mI en cada tubo de 13 x 100. Autoclavar a 121C por 15 minutos. Dar una inclinacin muy corta. 9.2.6. Agar TSA
Tryptona Soytona Cloruro de sodio Agar pH7.3 15.00 g 5.00 g 5.00 g 15.00 g

Preparacin: Pesar 40 gramos para 1 litro de agua destilada. Calentar hasta disolver por completo. Repartir en tubito s de 12 x75 10 x 75, aproximadamente 2.5 a2 mI por tubo o en tubos 15x125, aproximadamente 4 mI por tubo. Esterilizar a 12PC por 15 minutos, dejar enfriar. Los tubos destinados al cepario no necesitan inclinacin. 9.2.7. Reactivo de Kovac (lndol)
Alcohol amlico o isoarm1ico Puro Paradimetilamino benzaldehido Acido clorhdrico Q. P. 75.0 ml 5.00 g 25.00 g

Preparacin: Disolver el aldehdo en el alcohol, luego agregar el cido lentamente. Guardar en frascos oscuros y en refrigeracin. Los papeles de filtro cortados en tiras delgadas de unos 5 cm. de longitud por 0.5 cm. de ancho se impregnan con el re activo de Kovac's. Se hacen secar en estufa y se almacenan en frascos oscuros. Los papeles as preparados tienen una duracin de tres meses aproximadamente

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9.2.8. Reactivo de Gilles

Alcohol metlico (metanol) Paradimetilamino benzaldehido. Acido ortofosfrico Preparacin: Similar al re activo de Kovac. 50 ml 5.00 g 10 ml

9.2.9. Caldo peptonado

Peptona Cloruro de sodio Agua destilada pH8.6 10.00 g 5.00 g 1000.0 ml

Preparacin: Disolver y ajustar el pH a 8.6; repartir 10 mI en tubos de 15x125, esterilizar en autoclave a 121C por 15 minutos.

9.2.10. Prueba de Oxidasa

Preparar solucin acuosa al 1% de N-N dimetil parafenilenodiaminaoxalato, distribuir en frascos de vidrio oscuro y refrigerar (no congelar), preparar slo 2 mI cada vez.

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Anexo N 2
SECTOR SALUD RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD RED DE EMERGENCIA DE LABORATORIOS DE COLERA FICHA CLINICO EPIDEMIOLOGICA DE ENVIO DE MUESTRAS CODIGO INS ( ) FECHA: /.. /....... 1. ESTABLECIMIENTO DE PROCEDENCIA: ........................................................................................................................................... 2. DATOS DEL PACIENTE: CODIGO..... HISTORIA CLINICA...;........... NOMBRE y APELLIDO:............................................................................................... EDAD: ............SEXO: M () F () OCUPACION............................................................ PROCEDENCIA: ............................... / ....................... .../ ....................../........................................................ DEPARTAMENTO PROVINCIA DISTRITO LOCALIDAD RESIDENCIA PROVISIONAL: ..../.../............................ DEPARTAMENTO PROVINCIA DISTRITO HOSPITALIZADO ( ) AMBULATORIO ( ) FALLECIDO ( ) 3. MANIFESTACIONES CLINICAS: FECHA DE INICIO DE SINTOMAS:... //......................... DIA MES AO SINTOMAS: FIEBRE () DOLOR ABDOMINAL ( ) DIARREA () NAUSEAS () VOMITOS ( ) CALAMBRES ( ) CARACTERISTICAS DE LA DIARREA: . LIQUIDA () CON MOCO () CON SANGRE ( ) Nro. DE DEPOSICIONES POR DIA: .......................................................................... TRATAMIENTO CON ANTIBIOTICO SI ( ) NO ( ) TIPO: ... ... ... ... ... ... ... ... ........ ... ...... ... .............................................. 4. DATOS DEL LABORATORIO: TIPO DE MUESTRA: HECES ( ) HISOPADO RECTAL ( ) OTRO............................ FECHA DE TOMA DE MUESTRA:................. / /............ DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO:.... FECHA DE AISLAMIENTO:... /../.......

.............................................. PERSONA RESPONSABLE

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Esta publicacin se tnnino de imprimir en diciembre de 1997 en los Talleres Grficos de Art. Laulrec [Link]. Av. Paseo de la Repblica 731 - Lima 13 Tel/Fax: 4237616

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