UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE CIENCIAS LABORATORIO DE ESPECTROSCOPIA MOLECULAR POSTGRADO EN QUMICA ANALTICA (PQA)

Clasificacion Lab. FIRP - ULA Angelica Mara Villareal Carvajal. Formulacin de una nanoemulsin dermocosmtica, nutritiva y regeneradora de la piel Tesis de Maestria (ULA) Informe Tecnico FIRP No 0405 (2004)

FORMULACIN DE UNA NANOEMULSIN DERMOCOSMTICA, NUTRITIVA Y REGENERADORA DE LA PIEL

Realizado por Farm. Anglica Mara Villarreal Carvajal Tutora: Dra. Mara del Rosario Brunetto de Gallignani Co-tutora: Dra. Cormarie Fernndez Pulido Trabajo presentado ante la ilustre Universidad de Los Andes como requisito parcial para optar al Grado de Magster Scientiae en Qumica Analtica Mrida Venezuela -Septiembre 2004-

RESUMEN
El objetivo principal de este trabajo ha sido formular una nanoemulsin dermocosmtica con propiedades nutritivas y regeneradoras de la piel. Una nanoemulsin es un sistema disperso constituido por dos o ms componentes inmiscibles entre s, uno de ellos disperso dentro del otro en forma de gotas estabilizadas por un surfactante. Para la realizacin de este estudio se introdujo por primera vez en el campo de la cosmtica el concepto de Formulacin ptima empleando el HLB como variable de formulacin para la caracterizacin de los sistemas utilizados en la formulacin de la nanoemulsin dermocosmtica del tipo O/W. El mtodo de emulsionacin empleado para la formacin de la nanoemulsin base es de baja energa y la optimizacin de variables fueron: velocidad de agitacin de 350 r.p.m., un caudal de agua de 3 mL/min, una temperatura de 65 C, la adicin de la nanoemulsin al gel de carbopol 940 la cual se mezcla a una velocidad de agitacin de 250 r.p.m. La nanoemulsin se realiz con una mezcla de surfactante no inicos Span 60/Tween 80 a un HLB de 11,31 y a una concentracin total de surfactante de 8 %. La relacin aceite de maz/parafina fue de 2/10. En estas condiciones se lograron nanoemulsiones con tamao de gota de 100 nm, un pH de 5,5 y una viscosidad de 5 cps. La nanoemulsin base fue transformada en crema dermocosmtica mediante la incorporacin de vitaminas liposolubles y agentes conservadores, humectantes y viscosantes, esta present una viscosidad de 700 cps, ajustando el pH al mismo valor de la nanoemulsin. Ambas formulaciones presentaron alta estabilidad a temperatura ambiente (25 C) y acelerada (45 C). Se realiz el control de calidad del producto final y para ello se determinaron sus propiedades fsicas y se cuantificaron las vitaminas y los parabenos por cromatografa lquida de alta resolucin con deteccin UV arreglo de diodos. En este sentido se optimiz y valid un mtodo por cromatografa de reparto en fase reversa donde las vitaminas y los parabenos se separaron en un tiempo inferior a 20 minutos bajo rgimen de gradiente de elucin con intervalos de trabajo lineales comprendidos entre 10,0 30,0 g/mL para la vitamina A, 50,0 400,0 g/mL para la vitamina E, 10,0 50,0 g/mL para el metilparabeno y 2,5 15,0 g/mL para el propilparabeno. La exactitud del procedimiento se estim

realizando estudios de recuperacin y los resultados mostraron porcentajes de recuperacin cuantitativos para todos los analitos (entre 93,36 % y 106,21%). Del mismo modo se evalu la precisin del procedimiento durante un da (n=5) y en das diferentes (n=5) y la desviacin estndar relativa fue menor al 2 % en todos los casos demostrando una reproducibilidad y una estabilidad del sistema cromatogrfico muy satisfactorias. Se utiliz el mtodo propuesto para la cuantificacin de las vitaminas liposolubles y de los parabenos tanto en las nanoemulsiones como en las cremas dermocosmticas con el fin de evaluar la homogeneidad y la reproducibilidad de las mismas en la formulacin.

El secreto de la felicidad no est en hacer siempre lo que se quiere, sino en querer lo que se hace.

Len Tolstoi

AGRADECIMI ENTOS
A Dios Todopoderoso porque siempre gui mis pasos e ilumin mi camino. Por protegerme y darme fortaleza en los momentos ms inciertos. A la Virgen por rociarme de sus bendiciones y escuchar siempre mis peticiones. A mis padres por haberme aconsejado y apoyado en todo momento, este nuevo xito es tambin de ustedes. A mi hermano por estar siempre a mi lado y apoyarme. A la Dra. Mara del Rosario Brunetto por su sabio asesoramiento en el desarrollo de este trabajo, mil gracias por instruirme y creer en m. A la Dra. Cormarie Fernndez por su constante estimulo, apoyo y por brindarme su amistad y confianza. A la Dra. Ana Mara Forgiarini por su orientacin y dedicacin incondicional. Gracias por sus valiosos consejos en los momentos ms oportunos y ser una gran amiga. Al Dr. Jean Louis Salager por compartir sus conocimientos y haberme dado la oportunidad de pertenecer a tan prestigioso grupo de investigacin. Gracias por su apoyo y asesoramiento. A las personas que forman parte del Laboratorio de Espectroscopia Molecular (LEM) y el Laboratorio de Formulacin, Interfase, Reologa y Proceso (FIRP) con quienes he compartido maravillosos momentos y de quienes he recibido mucho estimulo. A mis queridos amigos Jimmy, Lubin, Yelitza, Boris, Carlos, Jos Miguel, Ninoska, Mario, Francy, Nilo, Vito, Jrmie, Hobermy, Csar, Tito, y Mimi, por haberme acompaado durante este tiempo. A la Ilustre Universidad de Los Andes por acogerme nuevamente en su seno y brindarme la oportunidad de lograr sta meta. Al Consejo de Estudios de Postgrado (CEP) por el soporte econmico ofrecido.

NDICE
Pg. 1. INTRODUCCIN 2. LA PIEL 2.1. ESTRUCTURA DE LA PIEL 2.1.1. Epidermis 2.1.2. Dermis 2.1.3. Hipodermis 2.2. 2.3. COMPOSICIN QUMICA DE LA PIEL TIPOS DE PIEL 1 4 4 4 5 5 6 7 7 7 7 8 9 9 9 9 10 10 10 10 11 11 11 11 humectantes, emolientes y 12 12 13 13

2.3.1. Piel normal 2.3.2. Piel seca 2.3.3. Piel grasa 3. FORMULACIONES COSMTICAS 3.1. SOLUCIONES 3.1.1. Soluciones hidrfilas 3.1.2. Soluciones lipfilas 3.2. 3.3. 3.4. 3.5. 3.6. 3.7. 3.8. LOCIONES PASTAS O UNGENTOS BARRAS POLVOS AEROSOLES GELES CREMAS

3.8.1. Cremas limpiadoras 3.8.2. Cremas protectoras 3.8.3. Cremas nutritivas, reparadoras 3.8.4. Cremas cosmticas de accin especfica 4. EMULSIONES 4.1. TIPOS DE EMULSIONES

4.1.1. Emulsin agua en aceite (W/O) 4.1.2. Emulsin aceite en agua (O/W) 4.1.3. Emulsin aceite en agua en aceite (O1/W/O2) 4.1.4. Emulsin agua en aceite en agua (W1/O/W2) 4.2. COMPONENTES DERMOCOSMTICAS 4.2.1. Principios activos 4.2.1.1. 4.2.1.2. 4.2.2.1. 4.2.2.2. 4.2.2.3. 4.2.2.4. 4.2.2.5. 4.2.2.6. 4.3. Vitaminas liposolubles Vitaminas hidrosolubles Fase acuosa Fase oleosa Agente emulsificante o surfactantes Agentes conservadores Agentes humectantes Agentes viscosantes EN SISTEMAS SURFACTANTE-AGUAESENCIALES PARA EMULSIONES

13 13 13 14 14 14 15 18 19 20 20 21 28 29 30 30 31 31 34 35 38 39 39 39 40 40 42 48

4.2.2. Vehculo dermocosmtico

FORMULACIN

ACEITE AL EQUILIBRIO 4.3.1. Conceptos bsicos en la formulacin de emulsiones: HLB, PIT, R de Winsor y Formulacin ptima 4.3.1.1. 4.3.1.2. 4.3.1.3. 4.3.1.4. 4.4. Mtodo de HLB: Balance Hidroflico-Lipoflico Mtodo de PIT: Temperatura de Inversin de Fase Comportamiento de fase - R de Winsor Formulacin ptima

4.3.2. Protocolo de emulsionacin PROPIEDADES DE LAS EMULSIONES 4.4.1.1. 4.4.1.2. Macroemulsiones Nanoemulsiones 4.4.1. Tamao de gota

4.4.2. Estabilidad de las emulsiones 4.4.3. Reologa de una emulsin

4.4.4. pH de las emulsiones 5. ANTECEDENTES DEL PROBLEMA A INVESTIGAR 5.1. FORMULACIN 5.1.1. Formulacin emprica o por ensayo y error 5.1.2. Formulacin fsico-qumica 5.2. ANLISIS QUMICO - CONTROL DE CALIDAD 6. JUSTIFICACIN DEL EMPLEO DE EMULSIONES EN COSMTICA 7. HIPTESIS 8. OBJETIVOS 8.1. 8.2. 9.1. OBJETIVOS GENERALES OBJETIVOS ESPECFICOS MATERIALES Y EQUIPOS crema 9.1.2. Reactivos y solventes utilizados para el control de calidad del producto 9.1.3. Equipos empleados a la formulacin 9.1.4. Equipos empleados en el anlisis qumico 9.2. MTODOS Y PROCEDIMIENTOS 9.2.1. Control de calidad de aceite de maz 9.2.2. Caracterizacin de los sistemas agua surfactante no inico/aceite. Barridos unidimensionales a 25 y 50 C 9.2.3. Optimizacin del protocolo de emulsionacin 9.2.4. Estudio de la relacin aceite de maz/parafina 9.2.5. Estudio del tamao de gota de la emulsin base con respecto a la mezcla y tipo de surfactantes no inicos 9.2.6. Emulsionacin 9.2.6.1. 9.2.6.2. Nanoemulsin base Crema dermocosmtica

49 50 50 50 50 52 53 55 56 56 56 57 57 57 58 59 59 60 60 62 62 62 63 63 63 63 64

9. PARTE EXPERIMENTAL 9.1.1. Materias primas empleadas en la formulacin de la

9.2.7. Determinacin de las propiedades de la emulsin

9.2.7.1. 9.2.7.2. 9.2.7.3. 9.2.7.4. 9.3.

Tamao de gota Estabilidad Viscosidad pH

64 65 65 66 66 66 66 67 67 68 69 70 70 71 72 72 SURFACTANTE NO 73 78 86

ANLISIS QUMICO DE LA NANOEMULSIN Y DE LA CREMA DERMOCOSMTICA

9.3.1. Optimizacin de los parmetros de la tcnica analtica aplicada 9.3.2. Soluciones patrones 9.3.3. Fase mvil 9.3.4. Tratamiento de muestra 9.3.5. Procedimiento 9.3.6. Caractersticas analticas del mtodo 9.3.7. Evaluacin de las nanoemulsiones como sistemas homogneos 9.3.8. Homogeneidad de la crema dermocosmtica 9.3.9. Reproducibilidad de la formulacin 10. RESULTADOS Y DISCUSIN 10.1. DETERMINACIN DE NDICES PARA EL CONTROL DE CALIDAD DEL ACEITE DE MAZ 10.2. ESTUDIO DE LA FORMULACIN PTIMA PARA LOS SISTEMAS: MEZCLA DE INICO/AGUA/ACEITE 10.3. OPTIMIZACIN DE LOS PARMETROS DEL PROTOCOLO DE EMULSIONACIN 10.4. ESTUDIO DE LA RELACIN DE ACEITE DE MAZ/PARAFINA 10.5. ESTUDIO DEL TAMAO DE GOTA DE LA EMULSIN BASE CON RESPECTO A LA MEZCLA DE LOS SURFACTANTES NO INICOS 10.6. ELABORACIN DE LA NANOEMULSIN Y DE LA CREMA 10.7. ESTUDIO DE LAS PROPIEDADES DE LA NANOEMULSIN Y 87 87

LA CREMA DERMOCOSMTICA 10.7.1. Tamao de gota 10.7.2. Estabilidad 10.7.3. Viscosidad 10.7.4. pH 10.8. DETERMINACIN QUMICA DE LOS ANALITOS PRESENTE EN LA CREMA 10.8.1. Separacin en la columna analtica 10.8.2. Estudios de recuperacin 10.8.3. Validacin del mtodo 10.8.3.1. Efecto de matriz 10.8.3.2. Precisin del mtodo 10.8.4. Estudio de las nanoemulsiones como sistemas homogneos 10.8.5. Homogeneidad de la crema dermocosmtica 10.8.6. Reproducibilidad de la formulacin 11. CONCLUSIONES 12. RECOMENDACIONES 13. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

88 88 92 95 95 95 95 98 99 99 105 106 107 108 109 111 112

NDICE DE TABLAS
Pg. Tabla 1. Tipos de surfactantes comnmente usados en emulsiones cosmticas Tabla 2. Principales surfactantes no inicos Tabla 3. Intervalos de HLB y sus aplicaciones Tabla 4. HLB de algunos surfactantes de uso cosmtico o farmacutico Tabla 5. Apariencia de la emulsin en funcin del tamao de gota de la fase dispersa Tabla 6. Ensayos acelerados Tabla 7. Composicin porcentual de cidos grasos en el aceite de maz Tabla 8. Solubilidad de los analitos Tabla 9. Longitud de onda de mxima de los analitos en el ultravioleta Tabla 10. Concentraciones en g/mL de las soluciones patrones de vitamina A (VitA), de vitamina E (VitE), metilparabeno (MP) y propilparabeno (PP) y de muestras de cremas enriquecidas con los analitos Tabla 11. Resultados de los ndices del aceite de maz durante el tiempo que se realiz estudios de formulacin Tabla 12. Barrido de Aceite de Maz al 5 % de NaCl, WOR=1 (5/5) Tabla 13. Barrido de Aceite de Maz sin NaCl, WOR=1 (5/5) Tabla 14. Barrido de Aceite de Maz al 5 % NaCl, WOR=2,33 (7/3) Tabla 15. Barrido de Aceite de Maz sin NaCl, WOR=2,33 (7/3) Tabla 16. Barrido de Parafina al 5 % NaCl, WOR=1 (5/5) Tabla 17. Barrido de Parafina al 5 % NaCl, WOR=2,33 (7/3) Tabla 18. Parmetros optimizados en el protocolo de emulsionacin de la nanoemulsin y de la crema dermocosmtica Tabla 19. Emulsiones bases obtenidas a partir de los sistemas Sp60Tw80/agua/aceite de maz-parafina presentes en el estudio de optimizacin Tabla 20. Porcentajes de analitos en crema dermocosmtica en distintos 79 78 72 74 74 75 76 77 77 69 40 47 57 68 69 23 24 32 33

tiempos de mezclado Tabla 21. Clculos necesarios para el ANDEVA del MP Tabla 22. ANDEVA del MP Tabla 23. Clculos necesarios para el ANDEVA del PP Tabla 24. ANDEVA del PP Tabla25. Clculos necesarios para el ANDEVA de VitA Tabla 26. ANDEVA de VitA. Tabla 27. Clculos necesarios para el ANDEVA de VitE Tabla 28. ANDEVA de VitE Tabla 29. Variacin del tamao de gota con respecto a las diferentes mezclas de surfactantes no inicos a un mismo HLB Tabla 30. Composicin porcentual de los ingredientes empleados en la formulacin de la nanoemulsin y de la crema dermocosmtica Tabla 31. Relacin aceite maz/parafina en sistemas Sp60Tw80/agua/aceite de maz-parafina emulsionados Tabla 32. Gradiente utilizado para la separacin de los analitos en estudio Tabla 33. Estudios de recuperacin en muestras de crema Tabla 34. Caractersticas de las rectas de calibrado para la VitA, VitE, MP y PP Tabla 35. Estudio de la precisin del mtodo para la cuantificacin de VitA, VitE, MP y PP Tabla 36. Porcentaje de recuperacin de los analitos en la nanoemulsin dermocosmtica Tabla 37. Porcentaje de recuperacin de los analitos en la crema dermocosmtica Tabla 38. Porcentaje de recuperacin de los analitos en la crema dermocosmtica a un tiempo de mezclado final de 60 min.

83 84 84 84 84 85 85 85 85 87 88 93 98 98 101 105 106 107 108

NDICE DE ECUACI ON ES
Pg. (1) Ecuacin del HLBreq o del aceite (2) Ecuacin R de Winsor (3) Ecuacin R de Winsor modificado (4) Ecuacin de velocidad de sedimentacin (Ley de Stokes) (5) Ecuacin de Deminire (6) Ecuacin de diferencia de presin segn Laplace (7) Ecuacin de velocidad de maduracin de Ostwald (8) Ecuacin de ndice de acidez (9) Ecuacin de ndice de yodo (10) Ecuacin de ndice de perxidos (11) Ecuacin de Fo, Fisher 33 35 35 43 44 44 45 60 61 61 82

NDICE DE F I G URAS
Pg. Figura 1. Estructura de la piel Figura 2. Tipos de emulsiones Figura 3. Estructura de la vitamina A (acetato) Figura 4. Mecanismo de la vitamina E en la piel Figura 5. Estructura de la vitamina E (-tocoferol) Figura 6. Estructura de la vitamina C Figura 7. Estructura del cido D-pantotnico Figura 8. Esquema de surfactante Figura 9. Estructura del Span 60 (monoestearato de sorbitan) Figura 10. Estructura del Tween 80 (monooleato de srbitan, 20EO) Figura 11. Fenmeno de adsorcin Figura 12. Diferentes estructuras producidas por la asociacin de surfactantes Figura 13. steres del cido p-hidroxibenzico Figura 14. Interacciones intermoleculares cerca de la interfase de acuerdo a Winsor Figura 15. Comportamiento de fase de los sistemas surfactante-aguaaceite relacionado con el valor de la relacin R de Winsor Figura 16. Barrido unidimensional Figura 17. Grficos de distribucin de tamao de gotas o partculas Figura 18. Mecanismos de desestabilizacin de las emulsiones Figura 19. Fraccin de volumen coalescido o clarificado en funcin del tiempo Figura 20. Comportamiento de fase del sistema Tw-Sp/(solucin acuosa 10 % NaCl)/aceite de maz, S=1%; WOR=1 (5/5); Temp.=50C Figura 21. Comportamiento de fase del sistema Tw-Sp/(solucin acuosa 5% NaCl)/parafina, S=1%; WOR=1 (5/5); Temp.=50C Figura 22. Estudio de homogeneidad de la crema dermocosmtica Figura 23. Dimetro de gota de emulsiones base (SP6078 82 75 48 37 38 42 43 36 27 29 6 14 16 17 18 19 19 21 25 26 27

Tw80/agua/aceite de maz-parafina) Figura 24. Histograma de la emulsin E1 Figura 25. Histograma de la emulsin E2 Figura 26. Histograma de la emulsin E3 Figura 27. Histograma de la emulsin E4 Figura 28. Histograma de la emulsin E5 Figura 29. Estabilidad de los sistemas E1, E2, E3, E4 y E5. S=8%; WOR=4 (8/2), HLB= 11,31. Tfinal = 45 C. Tipo de emulsin: O/W. n = 3 Figura 30. Estabilidad de los sistemas E1, E2, E3, E4 y E5. S=8%; WOR=4 (8/2); HLB= 11,31. Tfinal = 25 C. Tipo de emulsin: O/W. n = 3 Figura 31. Cromatograma obtenido bajo las condiciones optimizadas para un volumen de inyeccin de 0.010 mL de una solucin de patrones de VitA 2,00 g/mL, VitE 20,00 g/mL, MP 30,00 g/mL, PP 10,00 g/mL. =291 nm Figura 32. Curva de calibracin para la VitA en el intervalo de concentracin estudiado en ( ) una mezcla acetonitrilo-trietilamina 0,015 M, pH 3,9 (5:95) y ( ) en crema enriquecida con los analitos Figura 33. Curva de calibracin para la VitE en el intervalo de concentracin estudiado en ( ) una mezcla acetonitrilo-trietilamina 0,015 M, pH 3,9 (5:95) y ( ) en crema enriquecido con los analitos Figura 34. Curva de calibracin para el MP en el intervalo de concentracin estudiado en ( ) una mezcla acetonitrilo-trietilamina 0,015 M, pH 3,9 (5:95) y ( ) en crema enriquecido con los analitos Figura 35. Curva de calibracin para PP en el intervalo de concentracin estudiado en ( ) una mezcla acetonitrilo-trietilamina 0,015 M, pH 3,9 (5:95) y ( ) en crema enriquecido con los analitos Figura 36. Cromatogramas obtenidos bajo las condiciones optimizadas para un volumen de inyeccin de 0,010 mL de: (a) metanol, (b) una solucin patrn de VitA de concentracin 2,00 g/mL respectivamente, (c) muestra de crema con los analitos en estudio (2,00 g/mL). Tiempo de retencin: VitA 8,50 min. =325 nm

89 90 90 91 91 92 93 94

97

99

100

100

101

102

Figura 37. Cromatogramas obtenidos bajo las condiciones optimizadas para un volumen de inyeccin de 0,010 mL de: (a) metanol, (b) una solucin patrn de VitE de concentracin 20,00 g/mL respectivamente, (c) muestra de crema con los analitos en estudio 20,00 g/mL). Tiempo de retencin: VitE 16,99 min. =291 nm Figura 38. Cromatogramas obtenidos bajo las condiciones optimizadas para un volumen de inyeccin de 0,010 mL de: (a) metanol, (b) una solucin patrn de MP y PP de concentracin 30,00 y 10,00 g/mL respectivamente, (c) muestra de crema con los analitos en estudio 30,00 y 10,00 g/mL). Tiempo de retencin: MP 1,57 min. y PP 2,59 min. =245 nm 104 103

4. INTRODUCCI N
La industria cosmtica que utiliza surfactantes, ha logrado sus formulaciones a expensas de un trabajo laborioso basado en ensayo y error. La fsico-qumica de los sistemas surfactante-agua-aceite abarca hasta hace pocos aos, aspectos empricos ms que tericos. Debido a la complejidad de la qumica de las emulsiones, la tecnologa de las mismas ha sido considerada un arte, ms que una ciencia(1). La comprensin terica se limita a algunos modelos que son muy simplificados para reflejar en general la realidad, sin embargo, ellos sirven como gua cualitativa o aproximativa. La creciente preocupacin por esclarecer y fortalecer los aspectos tericos de la fsico-qumica de los sistemas dispersados ha promovido, en el campo de la cosmtica, numerosas investigaciones(2,3,4,5,6,7,8). Dentro de estos sistemas dispersos, tenemos las nanoemulsiones que, son un tipo de emulsiones con tamao de gota muy pequeos (entre 20 y 500 nm), de baja polidispersidad que, generalmente, les confiere una alta estabilidad cintica y apariencia transparente o translcida, y un comprobado pasaje transdrmico hacindolas ms atractivas, frente a otras emulsiones(9,10,11,12,13). Debido a que estos sistemas son termodinmicamente inestables, requieren energa para su formacin. Esta energa puede ser suministrada por mtodos de dispersin (mecnicos o de alta energa) o por mtodos de condensacin (fisicoqumicos o de baja energa). En los mtodos de dispersin, la energa es suministrada por equipos mecnicos, como homogenizadores de alta presin, generadores de ultrasonido, entre otros, los cuales por medio del cizallamiento rompen las gotas en otras ms pequeas. Mientras que en los mtodos de condensacin, la energa proviene de las diferencias de potencial qumico que se producen en el sistema al cambiar condiciones termodinmicas del mismo, como la temperatura y/o la composicin. En este estudio se introduce por primera vez en el campo de la cosmtica el concepto de Formulacin ptima(14) para la caracterizacin de los sistemas que se utilizaron en la formulacin de la nanoemulsin dermocosmticas, de all la importancia del presente trabajo.

Desde el punto de vista de la calidad, todo producto cosmtico debe ser sometido a ensayos fsicos (estabilidad, tamao de gota, pH, viscosidad) y qumicos que permitan evaluar las concentraciones de los componentes principales presentes en la formulacin, a travs de metodologas rpidas, precisas y exactas, y a la vez comprobar que dichas concentraciones corresponden con las declaradas por el fabricante, esto permite asegurar la efectividad del producto a lo largo de su vida til. El presente trabajo de investigacin tiene como la finalidad aportar al campo de la cosmtica la formacin de nanoemulsiones fase externa agua con propiedades nutritivas y regeneradoras de la piel, mediante mtodos de emulsificacin de baja energa. As mismo se determinar los principios activos (vitaminas A y E) y los conservadores (metil y propil parabenos) del producto cosmtico, utilizando tcnicas cromatogrficas para la separacin e identificacin de los mismos. Este trabajo est conformado por once secciones las cuales se detallan a continuacin:

Piel, trata la importancia, y la influencia de la misma en la formulacin. Formulaciones cosmticas, presenta las diferentes formas que se Emulsiones, muestra la definicin, tipos, sustancias comnmente utilizadas Antecedentes del problema a investigar, describe los diferentes mtodos

encuentran actualmente en el mercado. en emulsiones dermocosmticas, y las propiedades que estas presentan. desarrollados para la obtencin de las nanoemulsiones y describe la necesidad de emplear la cromatografa lquida como tcnica para la determinacin del principio activo y los conservadores empleados en el producto final.

Justificacin del uso de las emulsiones en cosmtica. Hiptesis, propuesta que se plantea para llevar a cabo la investigacin. Objetivos generales y especficos, que fueron planteados para verificar la

hiptesis.

Parte experimental, se menciona los materiales, equipos y mtodos Resultados y discusiones, obtenidos a lo largo de la investigacin. Conclusiones, que se llegaron a travs de los resultados obtenidos. Recomendaciones, se plantean una serie de estudios para su posterior

empleados en la investigacin.

desarrollo.

5. LA P I E L
La piel es una membrana externa, resistente que forma la parte superficial del organismo, y sirve de frontera activa entre ste y el medio ambiente. No slo controla la prdida de fluidos valiosos, sino tambin acta como un cojn frente a golpes mecnicos y evita la penetracin de sustancias extraas, radiaciones, al igual que regula la prdida de calor y transmite estmulos(16). En su funcin de membrana protectora, cubre una superficie que oscila entre los 2500 cm2 para recin nacidos y los 18000 cm2 para el adulto, lo cual corresponde al 5 % del peso total de la persona (aproximadamente 4,8 Kg en el hombre y 3,2 Kg en la mujer)(16). La penetracin y/o la retencin de una molcula activa en la piel, dependen de sus propiedades fisicoqumicas y de la formulacin del producto dermocosmtico(9,10,11,12,13). Es por ello, que tomando en cuenta lo anterior, la investigacin dermocosmtica est cada vez ms unida a los avances realizados en el conocimiento de la fisiologa de la piel, inclinndose siempre hacia la prevencin ms que a la curacin.

5.1. ESTRUCTURA DE LA P I E L
La piel est constituida por tres capas superpuestas (ver figura 1). La ms superficial se denomina epidermis, la capa media dermis, y la capa profunda hipodermis; su coloracin depende del grado de depsito de melanina en la epidermis. En la piel, hay una serie de rganos anexos, como folculos pilosos, glndulas sudorparas, terminaciones sensitivas nerviosas, entre otros, que hacen de la piel un rgano sensitivo, de proteccin y de secrecin(15,16,17).

5.1.1. E p idermis
La epidermis tiene un espesor de 0,1 mm en toda la superficie del cuerpo, siendo ms compleja y ms gruesa en la planta del pie (donde puede llegar a 1,5 mm) y en la palma de las manos (0,8 mm). Es ante todo, un tejido celular denso y no vascularizado (presencia de vasos sanguneos y linfticos); cumple una funcin protectora y en ella tienen lugar numerosas reacciones metablicas, como la

melanognesis (serie de reacciones que condicionan el color de la piel) y la queratinizacin (proceso de formacin de la capa crnea y de los pelos)(16,17,18). Fisiolgicamente, la epidermis es un tejido epitelial constituido por sucesivas capas de clulas superpuestas que se forman en la capa basal. Estas capas son, desde la superficie hasta la ms profunda, las siguientes: estrato crneo, estrato lcido, estrato granuloso, estrato espinoso y estrato basal.

5.1.2.

Dermis

La dermis es un tejido de sostn elstico, extensible y compresible. Mucho ms gruesa que la epidermis (tiene un espesor variable, que alcanza los 3 mm en la planta de los pies), en ella se encuentran los vasos sanguneos, los nervios, las races de los pelos y las uas y las glndulas sudorparas y sebceas (16,17,18). Consta de una asociacin de fibras de protenas envueltas en una sustancia amorfa fundamental rica en mucopolisacaridos, que permite los intercambios entre la dermis, la epidermis y la sangre(16). Existen pocas clulas en esta matriz la mayor parte de ellas son fibroblastos, que secretan los componentes drmicos. Entre stos se destacan las fibras de colgeno, formadas por protenas fibrosas, que proporcionan a la piel su resistencia a los golpes y su extensibilidad. Otro constituyente lo forman las fibras de elastina, responsables de la elasticidad de la piel; representan, ms o menos, el 2 % del total de la piel y estn dispersas entre las fibras de colgeno. Las alteraciones de estas dos fibras, son el origen del envejecimiento cutneo. La dermis representa la principal reserva de agua de la piel, el cual contiene el 60 % de la misma(16).

5.1.3 .

Hipodermis

La hipodermis est compuesta por tejido conjuntivo laxo muy vascularizado, constituida por lbulos rellenos de clulas grasas, llamadas adipocitos, separadas por tabiques conjuntivos que encierran vasos (sanguneos y linfticos) y nervios; uniendo de manera poco firme la dermis con los rganos subyacentes y est formada por una capa variable de tejido adiposo con una funcin de aislamiento,

que permite que la piel se modifique y proteja contra la prdida de calor y traumatismos superficiales(16,17) .

Figura 1. Estructura de la piel(18)

5.2. COMPOSICI N Q U M ICA DE LA PI E L

La piel est constituida principalmente por cuatro componentes qumicos(19):

Agua: constituye el 70-80 % de la piel y el 10-15 % pertenece a la capa crnea.

El agua se encuentra en la piel bajo dos estados: intercelular en el estrato crneo e intracelular bien fijada en las grandes molculas de la dermis (colgeno y elastina), impregnando como una esponja a las sustancias hidrfilas de la dermis. Para que la capa crnea permanezca bien hidratada, es necesario que exista un equilibrio entre la difusin (que es el paso de agua desde la dermis hasta la epidermis) y la evaporacin en la superficie y al mismo tiempo que la capacidad de la capa crnea para fijar el agua, sea ptima. Es este efecto barrera del estrato crneo, el que debe ser mantenido y a veces restaurado porque es la garanta de una buena hidratacin.

 Carbohidratos: lo forman la glucosa y ciertos glcidos complejos llamados

mucopolisacridos.

Lpidos: aseguran el mantenimiento de la acidez de la piel y su proteccin

contra los microbios. Ejemplo: colesterol, fosfolpidos, entre otros.

Protenas: formadas por largas cadenas de aminocidos. Estas molculas

sirven para formar los tejidos, tal como la elastina, el colgeno, entre otros.

5. 3 . TIP OS DE P I E L
Existen tres tipos bsicos de piel: normal, seca y grasa.

5. 3 .1. Piel normal

Piel normal es aquella que presenta una textura fina y suave, es uniforme y lisa al tacto, tiene aspecto lozano y fresco y su tono es luminoso; no tiene arrugas, puntos negros, ni poros dilatados(19,20).

5. 3 .2. Piel seca

La piel seca presenta una disminucin de la hidratacin en la capa crnea y que segrega insuficiente cantidad de sebo. Tiene un aspecto mate, spero, tenso y tirante al tacto, con tendencia a descamarse. La piel es fina, con poca elasticidad, de tono claro, y poros muy cerrados. Es sensible, se irrita fcilmente y es propensa a las alergias. La piel seca favorece la aparicin prematura de arrugas numerosas(19,20).

5. 3 . 3 . Piel g rasa
La piel grasa sufre un desequilibrio hormonal. La glndula sebcea contiene una enzima (alfa-reductora) que por razones desconocidas, estimula de forma anrquica la hormona masculina (testosterona) y la vuelve hiperactiva, aumentando considerablemente la produccin de sebo. Adems, estn influenciadas por otros factores como las exposiciones solares, la alimentacin inadecuada, la falta de higiene, el estrs, entre otros que acentan el fenmeno de hipersecrecin. Son ms gruesas, su envejecimiento ocurre lentamente, tienen un aspecto brillante y al tacto, son ligeramente aceitosas(19,20).

6. FORMU LACI ON ES COSMT ICAS

En el desarrollo de formulaciones cosmticas, son muy frecuentes las dispersiones multifsicas mezclando dos o ms ingredientes que no son miscibles entre s, ni capaces de formar soluciones homogneas(21,22). Algunos ejemplos de estas dispersiones incluyen las suspensiones (slido en lquido), las emulsiones (lquido en lquido) y las espumas (gas en lquido)(22). Debido a que estos sistemas no son homogneos, ni termodinmicamente estables, con el transcurso del tiempo muestran cierta tendencia a separarse(22,23). As, las partculas suspendidas se aglomeran y sedimentan, las gotas emulsificadas coalescen y las burbujas dispersas en las espumas se colapsan. Una manera de retardar esta tendencia natural de separacin de las fases, consiste en adicionar molculas tensioactivas, polmeros o slidos finamente divididos que puedan ubicarse en la interfase para evitar la coalescencia(24,25,26). Estas molculas presentan actividad superficial o interfacial que actan como agentes surfactantes o tensioactivos. Las frmulas de las emulsiones cosmticas son suministradas por libros de cosmtica, revistas cosmetolgicas y por internet (patentes), en forma de recetas y no es difcil, incluso para un estudiante de farmacia, elaborar una emulsin satisfactoria siguiendo las instrucciones descritas. Sin embargo, el formulador dermocosmtico, es competente cuando comprende la importancia de factores cinticos en los procesos de emulsificacin y su relacin con el comportamiento de fase para realizar las emulsiones. Se define un producto cosmtico como toda sustancia o formulacin sin propiedades teraputicas, de aplicacin local, no invasiva en la piel y sus anexos(27), es decir, destinado a ser puesto en contacto con las diversas partes superficiales del cuerpo humano (epidermis, sistema piloso y capilar, uas, labios y rganos genitales externos) o con los dientes y las mucosas bucales, con el fin exclusivo o principal de limpiarlos, perfumarlos, modificar su aspecto, corregir los olores corporales, y protegerlos o mantenerlos en buen estado. Esta definicin adjudica a los cosmticos una funcin eminentemente preventiva. No obstante, los productos dermocosmticos, desarrollados en la actualidad por la industria se

sitan en la frontera en la que su actividad va ms all del efecto esttico o preventivo, debido a que logran ejercer su accin hasta el nivel de la dermis pasando as, a la circulacin sangunea. Como ejemplo podemos citar los preparados a base de elementos hidratantes y cidos grasos esenciales que coadyuvan en el tratamiento de las pieles atpicas, la aplicacin de las vitaminas A, E y C que retardan el envejecimiento cutneo. Por todo ello, el formulador debe conocer adecuadamente las sustancias que se incorporan a las frmulas, las posibles interacciones, su eficacia y tolerancia, as como tambin tomar en cuenta ciertos factores, tales como: el sinergismo entre los componentes, estabilidad, caractersticas reolgicas y sensoriales del vehculo, facilidad de uso y costos del producto(17). Entre las formulaciones cosmticas ms frecuentes tenemos: soluciones, lociones, pastas, barras, polvos, aerosoles, geles y cremas(21,28).

6.1. SO LUCI ON ES
Las soluciones son formas monofsicas lquidas en las que todos los componentes estn disueltos. A su vez pueden distinguirse entre:

6.1.1.Soluciones hid rfilas

Son aquellas soluciones donde el vehculo mayoritario es el agua, aunque pueden contener alcohol o glicoles.

6.1.2.
steres grasos.

Soluciones lipfilas

Son aquellas soluciones donde los disolventes son mezclas de aceites o

6.2. LOCI ON ES
Las lociones tambin se denominan leches. Son emulsiones no grasas, ligeramente viscosas que contienen: agua, bajos niveles de aceites de origen vegetal o ceras, humectantes, surfactantes, conservadores, colorantes y perfumes. Suelen utilizarse en la cara y el cuerpo, o como acondicionadores de cabello. Por su ligera viscosidad, presenta mayores problemas de estabilidad en comparacin con las cremas.

6. 3. PASTAS O UNG ENT OS

Las pastas o ungentos son sistemas dispersos, grasos, altamente viscosos. Estos productos suelen ser anhdridos o contener una baja cantidad de agua. Algunos son base aceite, o mezclas de vaselina, lanolina y aceite mineral. Son usados como base para tinte o cremas para el cabello o medicamentos tpicos para la piel. Presentan pocos problemas de estabilidad y no sufren de contaminacin microbiolgica.

6.4. BARRAS
Las barras son formas cosmticas slidas, que contienen pigmentos o polvos insolubles en bases grasas que a temperatura ambiente son slidas y que se encuentran diseados para una aplicacin en reas especficas (axila, labios, rostro). Tpicamente las barras son productos opacos, generalmente estables, ya que su estructura slida, inhibe la mayora de los procesos desestabilizantes.

6.5. PO LVOS
Los polvos son mezclas de componentes slidos. Se usa para cubrir grandes reas de la piel, adems son capaces de absorber los exudados, y de ejercer un efecto lubricante y protector. Son sedosos y agradables al tacto. Se encuentran en productos tales como: polvo para los pies, polvo para beb, maquillaje, entre otros. Los ingredientes comnmente usados son: talco, almidn, silicatos, y xido de titanio. Los polvos son relativamente estables, y el empaque que los contiene contribuye a esa estabilidad debido a que evita la contaminacin con agua.

6.6. AEROSO LE S
Los aerosoles estn compuestos de una solucin concentrada, la cual es llenada a presin en un recipiente metlico. Cuando se acciona la vlvula el producto es dispensado en pequeas gotas o espuma. Este producto es usado como espuma de afeitar, desodorantes antitranspirantes, lacas, y otros productos para el cabello. Los aerosoles pueden ser formulados como: soluciones, emulsiones y geles.

6.7. G E L ES
Los geles se tratan de sistemas monofsicos o difsicos, transparentes, obtenidos por gelificacin de un lquido acuoso u oleoso, mediante un polmero hidrfilo o lipfilo, respectivamente. Varios agentes gelificantes usados son polmeros acrlicos, gomas naturales, o polmeros derivados de la celulosa.

10

Encontramos este tipo de formulaciones en productos de higiene tales como para el cuerpo, para los dientes, exfoliadores, mascarillas y tambin es usado en gel para el cabello, maquillaje, entre otros. Por su alta viscosidad generada por los agentes espesantes, lo cual dificultan el mezclado, se prefiere aadir estos al final del proceso de manufactura.

6.8. CREMAS
Las cremas son la forma de producto cosmtico ms comnmente hasta ahora representa el 90 % de las preparaciones(19), que se encuentran en el mercado y que tienen ms aceptacin por parte del consumidor. Se caracterizan por contener sustancias incompatibles, que se hacen compatibles por la adicin de surfactantes o emulsificantes (que actan en la interfase). Desde el punto de vista tcnico, las cremas son emulsiones, formado por dos lquidos no miscibles, en el que uno de ellos est disperso en el otro en forma pequeas gotas(21,23). Las cremas cosmticas principales son las siguientes:

6.8.1. Cremas limpiadoras

Las cremas limpiadoras son emulsiones de alto contenido de fase interna oleosa, en una fase externa hidroglicrica y no inica, con la propiedad de remover las impurezas grasas.

6.8.2. Cremas p ro tecto ra s

Las cremas protectoras usualmente, son emulsiones de fase interna oleosa, pero tambin pueden ser de fase interna acuosa. Suelen contener factores de proteccin especficos. Presentan sustancias derivadas de las siliconas, que le conceden al producto resistencia al agua y al sudor. La gama puede comprender desde cremas evanescentes hasta cremas barrera, en funcin de la oclusividad y/o consistencia. Tienen un contenido lipoflico medio que puede llegar a ser bajo.

6.8. 3 . y repa radoras

Cremas nut rit ivas, humectantes, emolientes

11

Este tipo de cremas pueden ser de pH neutro, semigraso y poco untuoso. Indicadas para pieles secas y personas de edad avanzada. Son empleadas para permanecer un tiempo relativamente largo sobre la zona a tratar, es decir, se utilizan preferentemente por la noche, que es cuando las clulas de la epidermis se dividen y por tanto, cuando necesitan ms aporte de energa; son especficas para el rostro y manos (tratamiento antiarrugas, entre otros). En trminos bsicos, todas llevan elementos nutritivos que necesita la piel y que estn incluidos en los alimentos, tal como las vitaminas, cidos grasos esenciales, aminocidos, aceites, entre otros. Los hidratantes humedecen la piel aumentando su flexibilidad; los productos reparadores o reestructurantes se usan con el fin de mejorar el aspecto de la piel envejecida, y los emolientes, se usan para corregir la piel seca asociada con dao actnico y envejecimiento. La resequedad es el resultado de la reduccin del contenido de agua de esta capa que debe estar por encima del 10%. El agua se pierde por evaporacin hacia el medio ambiente, y debe restituirse a partir de las capas epidrmicas y drmicas subyacentes. El estrato crneo debe tener la capacidad de conservar esta humedad, de lo contrario la piel se torna arrugada, escamosa y seca(17,19,27,30). Para rehidratarlo la formulacin debe contener aceites ligeramente oclusivos que retrasan la prdida de agua transepidrmica (ver seccin 4.2.2.2)

6.8.4.
Son

CREMAS ESP ECFI CA

formulaciones que

COSMTICAS
contienen por

DE

ACCI N
de accin

componentes antiestras,

cosmetolgicamente

concreta(19,30),

ejemplo:

anticelulitis,

reductoras, contra la flacidez, despigmentadoras, cicatrizantes, entre otras.

12

7. EMU LSI ON ES
Son sistemas dispersos y termodinmicamente inestables, constituidos al menos por dos componentes inmiscibles entre s, por ejemplo agua y aceite estando uno de ellos disperso dentro del otro en forma de gotas estabilizadas por un tensioactivo(24,25). Las emulsiones son sistemas fuera de equilibrio y sus propiedades dependen de la fsico-qumica del sistema, es decir, de la naturaleza de los componentes (salinidad, tipo del tensioactivo y componente oleoso, temperatura y presin del sistema), del mtodo de preparacin de las mismas y del orden de adicin de los componentes(31,32).

7.1. TIP OS DE EMU LSI ON ES

Al mezclar soluciones acuosas y oleosas en presencia de surfactantes, pueden obtenerse cuatro formas diferentes de emulsiones(23,33,34) (ver figura 2): emulsin agua en aceite W/O (siglas en ingls debido a que las palabras en espaol comienzan por la misma letra), emulsin aceite en agua O/W, emulsin aceite en agua en aceite O1/W/O2 y emulsin agua en aceite en agua W1/O/W2.

7.1.1. Emulsin agua en a ceite ( W/O )

Una emulsin agua en aceite la fase dispersa es el agua y la fase contina el aceite. Generalmente su contenido de agua oscila entre 10 y 40%

7.1.2. Emulsin a ceite en agua (O /W)

Una emulsin aceite en agua la fase dispersa la constituye el aceite, y la fase continua el agua (en un 70 -80 % de agua).

7.1.3 . Emulsin a ceite en agua en a ceit e ( O 1 /W/O 2 )

Una emulsin aceite en agua en aceite no se encuentra con frecuencia, y tiene una forma compleja. Est constituida por una fase continua de aceite en cuyo seno se encuentran dispersos glbulos de agua, lo que a su vez forman una fase continua en la cual se encuentran dispersos glbulos pequeos de aceite.

7.1.4. Emulsin agua en a ceite en agua ( W 1 /O /W 2 )

13

Una emulsin agua en aceite en agua la constituye una fase continua de agua, en la cual se encuentra una primera fase dispersa de aceite, que a su vez, le sirve de fase continua a una segunda fase dispersa de agua.
W2

O1

O W1

O
Oil Water

O2

Emulsin O/W

Emulsin W/O

Emulsin O1/W/O2

Emulsin W1/O/W2

Figura 2. Tipos de emulsiones(23)

7.2.

COMPONENTES

ESENCIALES

PARA

EMULSI ON ES

DERMOCOSMT ICAS
Un producto dermocosmtico, est formado por lo que se denominan principios activos, su actividad define su funcin y el vehculo o excipiente.

7.2.1. P rin cipio s a ct iv o s

Los principios activos son elementos esenciales del producto, que penetran y ejercen los efectos locales(35). La eleccin de uno u otro es importante, al igual que la cantidad que se incluya. Pueden ser de origen: humano, animal, vegetal, mineral, microbiolgico, qumico o afines. Los cientficos buscan principios activos que se opongan a los mecanismos que generan destruccin de las clulas (como por ejemplo: la inhibicin de los radicales libres(19,36,37). Actualmente el importante papel de las vitaminas ha sido ampliamente reconocido por las industrias de cosmticos y puede ser visto en la creciente popularidad de productos que contienen vitaminas(38). Las vitaminas son necesarias para el funcionamiento de los rganos y contribuyen al metabolismo celular. Con pocas excepciones el cuerpo humano no puede producir o sintetizar vitaminas. Para obtener estos nutrientes vitales el cuerpo necesita fuentes externas en la forma de vitaminas. Las vitaminas deben

14

ser suministradas al cuerpo regularmente ya sea a travs de la alimentacin o tomando suplementos. Al igual estas pueden ser aplicadas en la piel con efectos locales(39).

7.2.1.1. Vitaminas lipo solubles

Las vitaminas liposolubles son aquellas que se disuelven en aceites o grasas, dentro de este grupo se incluyen: vitamina A, vitamina E, entre otros.

Vitamina A o retinol, C20H300: el cuerpo no produce vitamina A, por lo tanto

hay que obtenerlo de nuestra alimentacin. La Vitamina A incrementa la actividad de las enzimas y estimula la divisin celular de la piel, mejorando la condicin de sta. Los productos cosmticos que contienen Vitamina A mejoran la elasticidad y regeneran la piel envejecida prematuramente, contribuye a mantenerla joven(39). La vitamina A normaliza la queratizacin de la piel (renovacin celular). Esto la hace muy efectiva para mejorar las condiciones como la psoriasis, eczema y el acn. Tambin mejora la produccin de colgeno y por lo tanto contribuye a una piel ms firme. El retinol es un aceite cristalino de color amarillo plido, soluble en solventes lipdicos y con un mximo de absorcin UV a 328 nm(39). No es destruida con facilidad por el calor, pero se oxida fcilmente y es sensible a la luz, es menos estable en solucin cida que alcalina. La fuente principal de vitamina A son los pigmentos carotenoides que se encuentra en animales (pjaros y peces), y vegetales (lechuga, col, zanahoria, batata, tomates, cerezas, entre otras)(40). Los steres de vitamina A (retinol) con los cidos: actico y palmtico son importantes comercialmente porque son considerablemente ms estables que el alcohol. Pueden presentarse diluida en aceites comestibles incorporados en excipientes slidos. Para expresar la potencia y la dosificacin en los preparados de la Vitamina A es habitual usar la unidad internacional (UI), la unidad USP equivalente. Una UI ( unidad USP) de Vitamina A se define como la actividad biolgica especfica de 0,3 g del ismero todo trans retinol, 0,344 g de acetato de Vitamina A (C22H32O2), de 0,6 g de -caroteno puro(40,41) (ver figura 3)

15

H3C

CH3 CH=CH-C=CH-CH=CH-C=CH-CH2-OOC-CH3 CH3 CH3 CH3

Figura 3. Estructura de la vitamina A (acetato)(40)

Vitamina E -tocoferol, C29H50O2: es un componente clave en la

estructura de las clulas del cuerpo y ayuda a mejorar el sistema inmunolgico lo que previene la degeneracin celular por su poder antioxidante. La vitamina E en cremas cosmticas aumenta la micro-circulacin de la piel asegurando una mejor alimentacin del tejido, restableciendo la elasticidad de la piel y reduciendo las arrugas(38,40). Por su estructura molecular, ste tambin provee una fotoproteccin natural en contra de los rayos ultravioleta y sus efectos negativos(42,43,44) debido a que es una molcula liposoluble capaz de fijar radicales libres del tipo hidroxilo, peroxilo y alcoxilo debido a su grupo fenlico, estos radicales libres pueden causar varios tipos de dao celular, incluyendo peroxidacin de los lpidos as como una modificacin del ADN y de protenas. Tal dao puede conducir a envejecimientos prematuros y/o la iniciacin de cncer de la piel(39,46). La figura 4 muestra como la vitamina la E atrapa los radicales libres en las clulas de la piel, al ser oxidado, forma radicales hidroquinona estables que no perturban la qumica celular y que posteriormente son restablecidos a Vitamina E mediante la aceptacin de un electrn proveniente de agentes reductores como la Vitamina C(36,39,40,45). Las molculas altamente reactivas con radical libre (simbolizado en barquilla roja) daan la piel a nivel de la membrana celular (1), el ADN en el ncleo de clula (2) as como en las fibras de colgeno (3), que son responsable de la tonicidad de la piel. La Vitamina E (4) puede ser almacenada en la membrana de la clula y puede llevarse as la molcula de radical libre (simbolizado en tringulo rojo) quitndole su efecto perjudicial (simbolizado en 16

disco verde)(46). Adems la vitamina E inhibe la oxidacin de los ingredientes en la formulacin(36,37).

VITAMINA E

VITAMINA C

Smbolo para molculas altamente reactivas con radicales libres Smbolo para radicales libres, que son atrapados por la vitamina E Smbolo para molculas regeneradas sin radical libre

Figura 4 Mecanismo de la vitamina E en la piel(46) La vitamina E es un aceite viscoso de color amarillo claro o amarillo verdoso, prcticamente inodoro, insoluble en agua, y soluble en aceites vegetales, acetona, metanol, puede solidificarse en fro y presenta un mximo de absorcin UV a 292 nm. Las altas temperaturas y los cidos no afectan su estabilidad, pero si se oxida con facilidad en presencia de sales de hierro o grasas rancias. La luz UV provoca su descomposicin(40). Se encuentra en abundancia principalmente

17

en el aceite del germen de trigo, aceite de girasol, aceite de palma, aceite de avellana, aceite de maz(47), cereales y hojas verdes. unidad internacional (UI) la unidad USP equivalente. Una UI ( unidad USP) de Vitamina E equivale a 1 mg de acetato de dl-tocoferil, 0,91 mg dl--tocoferol(ver figura 5), 0,735 mg de acetato de tocoferil (el ster de la forma natural), 0,671 mg de de d--tocoferol (la forma natural)(40,41). Para expresar la potencia y la dosificacin en los preparados de la Vitamina E es habitual usar la

CH3 H3C CH3 O

CH3

CH3

(CH2)3CH(CH2)3CH(CH2)3CHCH3 CH3

HO

CH3

Figura 5. Estructura de la vitamina E (dl--tocoferol)(40)

7.2.1.2. Vitaminas hidro so lubles

Las vitaminas hidrosolubles son aquellas que se solubilizan en agua principalmente, y pertenecen a este grupo: la vitamina C, el pantenol entre otras.

Vitamina C o cido ascrbico, C6H8O6 (ver figura 6): juega un papel

importante en el proceso de sintetizacin del colgeno, mejorando la elasticidad de la piel, as como tambin, reduce los puntos de pigmentacin de la piel. Adems es un antioxidante y se considera la vitamina ms inestable; se destruye fcilmente por el calor y se oxida rpidamente en medios alcalinos. Se presenta en forma de cristales o polvo blanco o ligeramente amarillo, inodoro, soluble en agua, insoluble en cloroformo, ter o benceno(40).

18

CH2OH HOCH

HO

OH

Figura 6. Estructura de la vitamina C(48) Se encuentra difundido en una gran variedad de alimentos, siendo los frutos ctricos (naranjas, limones, mango verde, entre otros), las coles y tomates los ms ricos en el mismo.

Pantenol, pertenece al grupo de la vitamina B (vitamina B5). En la piel es

convertido en cido D-pantotnico (ver figura 7), el cual es esencial para el metabolismo celular. Las cremas que contienen pantenol ayuda a acelerar la queratizacin de la dermis y aumenta el nivel de humedad en la piel, dejndola suave y elstica. Se halla en todos los tejidos vegetales y animales(38,40).

H3C HO

HOCH2 C C C NHCH2CH2COOH H3C H

Figura 7. Estructura del cido D-pantotnico(40)

7.2.2. Vehculo dermoco smti co

El vehculo dermocosmtico, est formado por una serie de sustancias diversas, que favorecen su aplicacin y penetracin. As mismo le aportan las 19

cualidades cosmticas de tacto, color, olor y textura. Algunos componentes que forman parte de los excipientes, tambin poseen otras acciones como hidratantes, emolientes, entre otras(19). El vehculo debe elegirse cuidadosamente de acuerdo con su inocuidad, compatibilidad, estabilidad y tolerancia, de ah la importancia de formular una excelente emulsin base, que permita asegurar un producto final ptimo. Entre las sustancias que pueden formar parte del mismo, podemos citar:

7.2.2.1. Fase a cuosa

En la fase acuosa generalmente se emplea agua que debe ser desionizada y microbiolgicamente pura. En esta fase suelen adicionarse todos los principios activos, que por su hidrofilicidad puedan ser solubles en ella, as como tambin, se disuelven agentes humectantes, se incorporan agentes viscosantes y agentes conservadores, que evitan la contaminacin con hongos, levaduras o bacterias(19,49,50).

7.2.2.2. Fase oleosa

La fase oleosa su principal funcin en la mayora de los preparados, es la de proveer emoliencia, renovando la flexibilidad y suavidad de la piel. La naturaleza de la capa residual de la fase oleosa, que queda adherida a la piel, modula el grado de oclusividad del producto. La formulacin contiene aceites ligeramente oclusivos que retrasan la prdida del agua de la piel. A continuacin algunas sustancias que ms se emplean(19,51).

Aceites derivados del petrleo: parafina, vaselina Aceites vegetales: aceite de maz, aceite de oliva, aceite de coco, aceite de

almendras, entre otros Grasa animal: esperma de ballena, lanolina cidos grasos: cido lanolineico, cido esterico Alcoholes grasos: alcohol cetlico, alcohol estearilco steres de cera: cera de abeja 20

Ceras vegetales: carnauba, candelilla Fosfolpidos: lecitina En otras ocasiones, la fase oleosa ejerce una funcin de disolvente-

transportador de principios activos liposolubles, perfumes, esencias, y/o acta como agente de limpieza emulsificando las impurezas cutneas(19). La presencia de antioxidantes (19,37)se hace necesaria, cuando algn componente de la fase oleosa, es sensible a la oxidacin como las vitaminas. Al igual debe incorporarse un conservador liposoluble a la fase oleosa, para evitar su contaminacin.

7.2.2.3 . Agente su rfa ctante o tensioa ct iv o

Los agentes surfactantes o tensioactivos son sustancias anffilas, cuya molcula posee esencialmente dos partes: (i) un grupo hidroflico (H), inico o no inico formado generalmente por heterotomos de N, S, O, como por ejemplo los sulfonatos, sulfatos, polixidos de etileno, entre otros), y (ii) un grupo lipoflico (L), que consiste en general, en una cadena hidrocarbonada con o sin grupo aromtico. Las sustancias anfiflicas pueden representarse esquemticamente por la frmula L-H (ver figura 8). Por esta doble afinidad y dependiendo de la actividad interfacial que tiene el surfactante, podr adsorberse a la interfase y mantener una dispersin, lo cual lo caracteriza como dispersante o emulsificante(23,33,52,53).

Grupo Lipoflico L

Grupo Hidroflico

Figura 8. Esquema de surfactante(23) Las caractersticas que debe presentar un agente emulsionante, son las siguientes(54):

21

 Producir una baja tensin interfacial en el sistema especfico, en el cual va a ser utilizado Tener una alta tendencia a migrar hacia la interfase y adsorberse rpidamente alrededor de las gotas dispersas, formando una pelcula condensada, que evite la coalescencia Debe ser relativamente ms soluble en la fase continua, lo cual favorece la adsorcin alrededor de las gotas dispersas Una pequea cantidad de emulsionante, debe ser suficiente para obtener la emulsin deseada Debe ser relativamente econmico No debe ser txico e irritante La seleccin de un surfactante, se hace basndose en las propiedades que debe poseer el producto final y tambin en la combinacin de ingredientes que lo constituye.

clasificacin de los surfactantes: segn el tipo de disociacin del

grupo hidroflico en fase acuosa, (ver tabla 1) se clasifican en(22,50,54,55,56): inicos, no inicos, anfteros y polimricos. Surfactantes inicos Surfactantes aninicos: se disocian en un anin anffilo y un catin, el
cual es en general, un metal alcalino o un amonio cuaternario. A este tipo pertenecen los detergentes sintticos, como los alquil benceno sulfonatos, los jabones (sales de sodio, de cidos grasos), los agentes espumantes como el lauril sulfato, los humectantes del tipo sulfosuccionato, los dispersantes del tipo lignosulfonatos, dodecil sulfato de sodio, entre otros.

Surfactantes catinicos: se disocian en solucin acuosa, en un catin

orgnico anffilo y un anin generalmente del tipo halogenuro. La gran mayora de estos surfactantes son compuestos nitrogenados del tipo sal de amina grasas o de amonio cuaternario.

22

Tabla

1.

Tipos

de

surfactantes

comnmente

usados

en

emulsiones

cosmticas(22,55) SUR FAC TANTES

Sintticos Aninicos cidos carboxlicos steres de cido carboxlico steres de cido sulfrico cidos sulfnicos Amidas de aminocido Catinicos Aminas Cuaternarias Anfteros Fosfatos Derivados amino No inicos Alcoholes teres steres Polmeros Naturales Coloides hidrfilos Arcillas coloidales Hidrxidos metlicos Acacia, gelatina, lecitina, colesterol Bentonita, veegum Hidrxido de magnesio Alcoholes grasos teres alcohlicos grasos de polieoxietileno, teres fenolPOE steres de cidos grasos de sorbitn, steres de cidos grasos de polioxietileno-sorbitan. POE*/POP**, derivados de siliconas, PVP*** Fosfolpidos N-alqui aminocido, alquilaminas POE* alquil amina, sal tetralquil amonio (Bromuro de cetiltrimetilamonio, cloruro de laurildimetilbencilamonio) Jabones (laurato de potasio, estearato de trietanolamina) Lactilatos. POE*, alquil carboxilatos Alquil sulfatos, monoglicridos sulfatados (laurilsulfato de sodio, sulfatos de alquilpolietoxietilenos) steres sulfosuccinato (Dioctilsulfosuccinato de sodio) Pptido acilado

EJEMPLOS

*POE -Polioxietileno, **POP - Polioxipropileno, ***PVP Polivinilpirrolidona

Surfactantes no inicos
Los surfactantes no inicos son buenos detergentes, humectantes y emulsionantes. En solucin acuosa no se ionizan, puesto que ellos poseen grupos hidrfilos del tipo alcohol, fenol, ter o amida. Algunos presentan un bajo nivel de toxicidad y se utilizan en la fabricacin de frmacos, cosmticos y alimentos (Ejemplo: Span y Tween). Existen numerosos tipos, sin embargo el mercado lo dominan los productos etoxilados,

23

aquellos donde el grupo hidroflico es una cadena poli-xido de etileno fijada por la funcin hidroxilo o amina (ver tabla 2). Tabla 2. Principales surfactantes no inicos(54) TI PO DE SU RF ACT ANTE
Alcoholes Lineales Etoxilados Alquil Fenol Etoxilados steres de cidos Grasos Derivados de Aminas y de Amidas Copolmeros xido de etileno-xido de propileno Polialcoholes y Polialcoholes etoxilados Tioles (mercaptanos) y derivados

% TOTAL
40 20 20 10 -------

No obstante, se observar que la cadena polixido de etileno es globalmente hidroflica, aunque cada eslabn posee un tomo de oxgeno (hidroflico) en una funcin ter, con dos grupos metileno (-CH2-) los que son lipoflicos. La cadena poli-xido de etileno (-CH2-CH2-O-) tiene un carcter hidroflico dominante; sin embargo tiene tambin un cierto carcter lipoflico. Un aumento del nmero de xido de etileno (EON) provoca entonces un aumento de hidrofilicidad (dominante), acompaado por un aumento de lipofilicidad. Los surfactantes poli-oxi-etilenos estn disueltos en agua, mediante un proceso de solvatacin, es decir, por hidratacin de los tomos de oxgeno. Al aumentar la temperatura, los enlaces por puente hidrgeno tienden a aflojarse y como consecuencia se observa una disminucin de la hidrofilicidad (al contrario de los anonicos)(57)

steres de cidos grasos: la esterificacin de un cido graso por un

grupo hidroflico que contiene un hidroxilo (polietilenglicol, polialcoholes naturales) produce una parte muy importante de los surfactantes no inicos, no solamente por su porcentaje (20%) sino tambin por el hecho que estos surfactantes no son txicos(54) y pueden ser utilizados en farmacia, en alimentos y en los productos cosmticos por su comprobada tolerancia en la piel y ojos(56). Dentro de estos tenemos:

24

 cidos grasos etoxilados (polietoxi-steres) steres de glicerol steres de hexitoles y de anhidrohexitoles cclicos. Los hexitoles son los hexa-hidro-hexanos obtenidos por la reduccin de hexosas o de monosacridos. El ms corriente es el sorbitol, producto de la reduccin de la D-glucosa. Los anillos sorbitan poseen 4 grupos hidroxilo libres. Estos grupos hidroxilo son susceptibles de recibir: a. cidos grasos, los cuales confieren a la molcula uno o varios grupos lipoflicos. b. Un producto de policondensacin del xido de etileno, lo cual aumenta la hidrofilicidad. Gracias a estas dos posibilidades y las variaciones de cada una de ellas, se pueden elaborar surfactantes a la medida. Los productos comerciales de SPAN y sus homlogos son steres de sorbitan desde el monolaurato hasta el trioleato(54), como por ejemplo el SPAN 60 (ver figura 9).
CH2 COO- (C17H35) HC - OH O OH

OH

Figura 9. Estructura del Span 60 (Monoestearato de sorbitan)(48) Los productos comerciales de TWEEN y sus homlogos contienen un cierto nmero de grupos de xido de etileno (en general 20) repartidos en los diferentes grupos hidroxilo, antes de fijarles uno o varios cidos grasos para dar un polietoxisorbitan ster, como por ejemplo el TWEEN 80(ver figura 10)(54).

25

H33C18OO (EO)a H3C (EO)d

O (EO)b (EO)c

CH3

CH3

a+b+c+d = 20 EO (oxido de etileno)

Figura 10. Estructura del Tween 80 (Monooleato de srbitan, 20EO0(48)

Surfactantes anfteros
Los surfactantes anfteros se caracterizan por tener dos grupos funcionales: uno aninico y otro catinico. Segn el pH, una de las dos disociaciones domina (aninico a pH alto, catinicos a pH bajo). Cerca del punto isoelctrico, son realmente anfteros y presentan una mnima actividad superficial. Como por ejemplo los aminocidos, las betanas o los fosfolpidos(58)

Surfactantes polimricos
Los surfactantes polimricos son producidos asociando estructuras polimerizadas de tipo hidroflico o lipoflico, en forma de bloques o de injertos(54).

Propiedades de los surfactantes en solucin acuosa: con excepcin del

poder bactericida de ciertos surfactantes, fenmeno del cual no hay una explicacin absolutamente segura, se puede decir, que todas las propiedades y usos de los surfactantes, provienen de dos propiedades fundamentales de estas sustancias(58): adsorcin y asociacin.

Adsorcin
Cuando una molcula de surfactante, se coloca en una interfase agua-aire agua-aceite, ella puede orientarse de manera que el grupo polar est en el agua, mientras que el grupo apolar se ubica fuera del agua, en el aire o en el aceite. La adsorcin de un surfactante en una superficie gas-lquido o en una interfase lquido-lquido, produce en general una reduccin de la tensin superficial o interfacial, de donde proviene el nombre tensioactivo. La tensin es

26

responsable de la curvatura de las interfases, de la formacin de gotas, entre otros (ver figura 11).

Figura 11. Fenmeno de adsorcin(58)

Asociacin
Cuando a una solucin acuosa se le aade cada vez ms surfactante, esta comienza por adsorberse a las interfases disponibles, luego su concentracin en forma monomolecular aumenta, hasta que se forman las primeras micelas(58). La micela es un compuesto de asociacin de varias molculas de surfactantes (100 500), en el cual este alcanza una posicin favorable (ver figura 12). En solucin acuosa la fuerza motriz principal que favorece la formacin de micelas, es el efecto hidrfobo, es decir, la sustraccin de la parte apolar del surfactante del contacto con las molculas del agua y la formacin de un contacto ms favorable desde el punto de vista energtico, con las partes apolares de otras molculas de surfactante.

Micela Normal

Cristal Lquido Laminar

Micela Inversa

Figura 12. Diferentes estructuras producidas por la asociacin de surfactantes(58)

27

7.2.2.4.

Agentes conservado res

Dentro de los productos cosmticos, las cremas son un medio propicio para la proliferacin de bacterias, influido por dos factores, el oxgeno y el calor(59,60); por esta razn, se hace necesario el uso de conservadores que permitan protegerlos eficazmente contra el crecimiento de microorganismos y contaminaciones accidentales, lo que garantiza una vida estable del producto, por lo menos dos aos(61), incluso durante su consumo(62). Estos agentes conservadores pueden ser de tres tipos: antioxidantes que retardan o impiden su enranciamiento; bactericidas que luchan contra el desarrollo de bacterias, y fungicidas que evita el crecimiento de hongos(19,59). Los agentes de conservacin ms usados en productos del cuidado personal son: los parabenos (preservativos sintticos), incluyen la mezcla de varios steres del cido p-hidroxibenzico (metilo, etilo, propilo y butilo)(60,62) (ver figura 13).La actividad antimicrobiana que proporcionan estas sustancias, aumenta a medida que incrementa la cadena hidrocarbonada del grupo alquil, por esta razn es frecuente la combinacin entre ellos, para obtener efectos sinrgicos. Son efectivos a un pH entre 4-8. La concentracin de parabenos en una formulacin tpica, es de 0,02-0,3% metilparabeno y de 0,01-0,6% propilparabeno cada uno(48), pero en total, la frmula no excede el 0,8%(59,63). Es la composicin ms popular que ha sido usada exitosamente para combatir moho y bacteria gram-positiva(48). Sin embargo, muestra una actividad dbil contra pseudomonas. Es eficaz en un amplio rango de pH, aunque el pH ptimo es 8. Los parabenos pueden complementarse con otros agentes de proteccin microbiolgico con efectos especiales contra los organismos gram-negativo, contra pseudomonas tal como la urea imidazolidinlica (Germall 115)(48,60), que es soluble en agua y tiene un amplio rango de tolerancia al pH, urea diazolidinlica, fenoxietanol (derivado fenlico), alcohol etlico, alcohol benclico, cido dehidroactico, sorbato potsico, metilcloroisotiazolinona y metilisotiazolinona (Kathon CG), hidantona DMDM (Glydant), cloroxilenol (Ottasept), glutaral (Ucarcide), alcohol feniletlico, cido srbico, cido saliclico(60,61,62).

28

COO - R R: -CH3 = Metilo -CH2CH3 =Etilo -CH2CH2CH3=Propilo -CH2CH2 CH2CH3=Butilo OH

Figura 13. steres del cido p-hidroxibenzico(48) El sistema debera ser libre de toxicidad con mnima irritacin. Un gran nmero de problemas de sensitividad en nuevas formulaciones tiene lugar debido a las interacciones qumicas entre agentes de conservacin y sustancias incluidas tales como estabilizadores para mejorar la esttica del producto. En efecto, la actividad antimicrobiana de los parabenos es considerablemente reducida en presencia de surfactantes no inicos (etoxilados, propoxilados) tal como el Tween 80, como resultado de micelizacin(64,65,66). Sin embargo un 10% de propilenglicol en la formulacin se ha observado que potencia la actividad de los parabenos en presencia de surfactantes no inicos y previene la interaccin entre ellos(48,67).

7.2.2.5. A gentes humectantes

Se consideran agentes humectantes a la glicerina, el propilenglicol, el sorbitol, entre otros, por las siguientes funciones: Impiden por su higroscopicidad, que las emulsiones (O/W) se espesen, por evaporacin durante los intervalos sucesivos de apertura del envase, lo que desvirta en parte sus propiedades como vehculo(19,29,51) Depositan una capa que atrae la humedad del medio ambiente hacia la zona tratada de la piel, retardando de este modo la prdida de humedad endgena por transpiracin Facilitan la solubilizacin de determinados principios activos en la fase acuosa

29

 Son responsables del pasaje transdrmico (propilenglicol)(14)

7.2.2.6.

Agentes v is co santes

Los agentes viscosantes tales como: avicel, carboximetil celulosa sdica (CMC-Na), metil celulosa (MC), carbopoles, alginatos, gomas naturales, entre otros; particularmente en emulsiones de fase interna oleosa (O/W) estabiliza la emulsin, evitando la coalescencia, por lo que actan como estabilizadores(68,69). No obstante, hoy en da, los emulgentes derivados de las siliconas, permiten conseguir emulsiones fluidas, incluso lquidas, de muy buena estabilidad.

7. 3 .

FORMU LACI N

EN

SISTEMAS

SURFACTANTE-

AGUA-ACE IT E AL E Q U I L I BR I O
El equilibrio fsico-qumico depende de un gran nmero de variables susceptibles de alterar el balance hidroflico-lipoflico del sistema. Variables fsico-qumicas. El estudio de la influencia de las variables fsico-qumicas, sobre el comportamiento de fase de los sistemas surfactante/agua/aceite, es de gran importancia en el momento de formular. Salager(70)ha clasificado estas variables en tres grupos:

Variables de formulacin o de naturaleza: se refieren a la naturaleza

qumica de los componentes bsicos de los sistemas estudiados:

Fase acuosa
Se caracteriza por la salinidad, que se define como los gramos de cloruro de sodio por cien mililitros de fase acuosa (expresado en % en peso).

Fase oleosa
Se caracteriza por el nmero de tomos de carbono de la molcula del alcano (ACN). Para sustancias ms complejas se caracterizan por el nmero de tomos de carbono equivalente (EACN), que corresponde al ACN del alcano que tendra el mismo comportamiento y propiedades fisico-qumicas que el aceite correspondiente(71,72)

30

 Surfactante
Influye por su tipo, su estructura molecular y peso molecular.

Alcohol
Influye en el balance hidroflico-lipoflico (HLB) del surfactante.

Variables externas o fsicas: estn representadas por la temperatura y la

presin.

Temperatura
Los surfactantes no inicos, particularmente los polietoxilados, tienden a disminuir su carcter hidroflico con el aumento de temperatura. En efecto, la solubilizacin est asegurada por la solvatacin de los grupos oxido de etileno y un aumento de sta inhibe los enlaces por puente de hidrgeno y disminuye la solvatacin(73).

Presin
En condiciones normales de experimentacin, la presin no influye en la fsico-qumica de los sistemas.

Variables de composicin: sirven para ubicar sobre el diagrama ternario la

posicin de un punto representativo del sistema. Se pueden considerar como tales: la relacin agua/aceite (en ingls Water-Oil-Relation WOR) y la concentracin del surfactante.

7. 3 .1. Concep tos

bsi co s

en

la

fo rmulacin

de

emulsiones: HLB , P I T , R de Win so r y Fo rmulacin p t ima

Existen varios conceptos bsicos que guan al formulador para obtener una emulsin. En vista del gran nmero de variables de formulacin, el surfactante es el parmetro susceptible a presentar el mayor efecto cualitativo.

7. 3 .1.1. Mtodo

de

HLB:

Balance

Hidroflico-

Lipoflico
El HLB, es un concepto que permite, una cuantificacin prctica y prediccin del comportamiento de los tensioactivos en un sistema determinado 31

debido a que cada surfactante presenta un balance entre sus afinidades hidroflicas (para la fase acuosa) y lipoflica (para la fase olica). Este mtodo consiste en asignar a cada surfactante o mezcla de surfactante, un nmero representativo de su balance de afinidades. Griffin(74) asign un HLB igual a uno al cido olico y un HLB de veinte al oleato de sodio, los cuales fueron tomados como los surfactantes de referencia. A pesar de que el valor HLB es un buen parmetro para la eleccin del surfactante, tienen serias limitaciones; por ejemplo este no determina la eficiencia del surfactante, ni tampoco su efectividad y vara con la temperatura(74). Por tanto, el valor HLB, solo nos permite saber el tipo de emulsin que el surfactante generar, es decir, sistemas O/W W/O. Dado que el HLB, mide la polaridad de la molcula de surfactante, Griffin(74,75), estableci que dicha polaridad debe asemejarse a la del aceite a emulsionar. A los emulsionantes relativamente ms lipoflicos, se les asigna un valor bajo de HLB y a los relativamente ms hidroflicos, un valor ms alto. El punto medio es aproximadamente 10. En la tabla 3, se muestra una escala de HLB, relacionada con sus aplicaciones(22,53). Cada aceite tiene un HLB especfico, conocido como HLB requerido por el aceite. Para estimar el HLBreq, es necesario un barrido de HLB donde se determinar la estabilidad de la emulsin. Esto se hace preparando varios sistemas, con la misma cantidad de fase aceite y agua, pero con diferentes HLB de surfactantes (ver tabla 4) o mezcla de surfactantes. Tabla 3. Intervalos de HLB y sus aplicaciones(22) INTERVALOS HLB
4-6 7-9 8-18 13-15 10 -18

APLICAC IONES
Emulsiones W/O Humectantes Emulsiones O/W Detergentes Agentes solubilizantes

Tabla 4. HLB de algunos surfactantes de uso cosmtico o farmacutico(22,37,48) 32

NOMBRE QUMICO*
Monoestearato de sorbitol, Span 60 Estearato de dietilenglicol Monoestearato de glicerol (autoemulsionante) Laureato de dietilenglicol Monopalmitato de sorbitol, Span 40 Dioleato de sacarosa Oleato PEG-4 Monolaurato de sorbitol, Span 20 Laureth-4 Monoestearato de sorbitol con polioxietilen (4), Tween 61 Monooleato de sorbitol con polioxietilen (5), Tween 81 Triestearato de sorbitol con polioxietilen (20), Tween 65 Oleato de PEG-8 Estearato de PEG-4 Nonoxynol-9 Laureato de PEG-8 Monolaureato de sorbitol con polioxietilen (4), Tween 21 Monooleato de sorbitol con polioxietilen (20), Tween 80

HLB
4,7 4,7 5,5 6,1 6,7 7,1 8,0 8,6 9,5 9,6 10,0 10,5 11,4 11,6 13,0 13,1 13,3 15,0

* Nomenclatura del International Cosmetic Ingredient Dictionary Cuando se mezclan dos emulsionantes para ser usados con un aceite determinado, hay una mezcla ptima que proporciona la mejor emulsin o el mejor producto final deseado. Esto se expresa por la relacin(53): W1HLB1 + W2HLB2 = HLBreq o del aceite (1) W1 + W2 donde: W1, W2 son las fracciones msicas de emulsionantes usados en la mezcla. HLB1, HLB2 son los valores de HLB asignados a los surfactantes. HLB del aceite es el requerido por el aceite, para el tipo de emulsin a preparar. Es necesario enfatizar que el nmero de HLB de un surfactante, es indicativo slo del tipo de emulsin que puede obtenerse, an cuando esto tambin est condicionado a la temperatura de preparacin de la emulsin, Relation Water and Oil (WOR), concentracin relativa de surfactante, entre otras(76,77,78). 33

Las

emulsiones

pueden

prepararse

mediante

modalidades

principales(22,49): Adicin de la fase interna a la fase externa Adicin de la fase externa a la fase interna Mezcla de las dos fases despus de calentar cada una(50,79,80,81,82) Adicin alternada de las dos fases al agente emulsificante

7. 3 .1.2. Mtodo de P IT: Temperatu ra de In versin de

Fase
Shinoda, 1967(83); las propiedades de las soluciones de surfactantes, en particular las que tiene relacin con la solubilizacin, varan con la temperatura. Los surfactantes no inicos, particularmente los polietoxilados, muestran un comportamiento inverso. En efecto, la solubilizacin en el agua est asegurada por la solvatacin de los grupos xido de etileno, y un aumento de la temperatura inhibe los enlaces por puente de hidrgeno y disminuye la solvatacin. En consecuencia, el carcter lipoflico de los surfactantes no inicos aumenta con la temperatura. En el caso de los surfactantes no inicos, el HLB tiende por tanto a disminuir cuando la temperatura aumenta. En consecuencia, es posible que una variacin de temperatura cambie el HLB de un surfactante de un valor que corresponde a una emulsin O/W a un valor que corresponde a una emulsin W/O. Tal posibilidad muestra que el HLB no es una caracterstica del surfactante cuando vara la temperatura, los que limita su aplicacin. Al tener una fase acuosa, una fase oleosa y surfactante presentes simultneamente se observa que a cierta temperatura el comportamiento de fase sufre una transicin y que, en efecto, el tipo de emulsin cambia. Shinoda y colaboradores(84) utilizan el trmino temperatura HLB para la temperatura en la cual las interacciones hidrfilas-lipfilas del tensioactivo estn balanceadas, es decir, el tensioactivo no tiene solubilidad preferencial por el agua o por el componente oleoso y su curvatura natural es cero. A temperaturas

34

inferiores a la temperatura HLB, el tensioactivo es hidrfilo y forma micelas normales (curvatura positiva) mientras que a temperaturas superiores a la temperatura HLB el tensioactivo es lipfilo y forma micelas inversas (curvatura negativa); si bien es cierto que sta terminologa se utilizan para poner el acento sobre la equivalencia entre la PIT y el concepto de HLB.

7. 3 .1.3 . Comportamiento de fase - R de Winso r

El comportamiento de fase de los sistemas surfactante/agua/aceite, pueden representarse a temperatura y presiones constantes, sobre un diagrama ternario de tipo clsico(23,85). Winsor, 1954 describi el concepto de formulacin, a travs de un parmetro llamado R que indica la relacin entre las interacciones del surfactante con la fase agua de un lado y con la fase aceite del otro. En su forma original la relacin R de Winsor era:

R=

ACO ACW

(2)

donde Aco es la sumatoria de las interacciones entre el surfactante y la fase aceite y Acw la sumatoria de las interacciones entre el surfactante y la fase acuosa(86). Las interacciones moleculares se entienden por unidad de rea interfacial. Posteriormente se prefiri usar las interacciones netas entre el surfactante y el agua(87)

R=

ALCO + AHCO ! AOO ! ALL ALCW + AHCW ! AWW ! AHH

(3)

donde las interacciones son aquellas indicadas en la figura 14.

35

AOO ALCO

Fase aceite

O
Capa interfacial donde se adsorbe el surfactante

ALL AHH AWW

ALCW

AHCO

AHCW

W Fase acuosa

Figura 14. Interacciones intermoleculares cerca de la interfase de acuerdo a Winsor(23,85,88) La interaccin lipoflica Aco entre el surfactante adsorbido a la interfase y el aceite aumenta con la longitud de la cadena lipoflica del surfactante. En cuanto a la interaccin hidroflica Acw entre el surfactante y la fase acuosa aumenta cuando se torna ms hidroflico el grupo polar del surfactante. Se puede decir que es el valor de R el cual determina la curvatura interfacial, y como consecuencia el tipo de emulsin que se tiene al agitar un sistema surfactante-agua-aceite. Entre los numerosos casos posibles que se pueden presentar para un diagrama ternario, se consideran solamente los tres tipos clsicos de la Teora R de Winsor (ver figura 15)(23,34,85,89).

Si R < 1 Las interacciones entre el surfactante y la fase acuosa superan

aquellos entre el surfactante y la fase aceite, y por tanto se dice que el surfactante tiene un comportamiento hidroflico. Es el caso de los surfactantes de HLB alto. El sistema se separa en dos fases; una fase acuosa compuesta de una solucin micelar o de una microemulsin tipo S1 y de una fase exceso de aceite. Tal sistema corresponde a la zona difsica del diagrama ternario de tipo I de Winsor. Se utiliza el smbolo 2 para indicar que se trata de un sistema difsico donde el surfactante se encuentra en la fase inferior, acuosa(1).

Si R > 1 Las interacciones entre el surfactante y la fase aceite superan a las

interacciones entre el surfactante y la fase acuosa. Se dice que el surfactante tiene un comportamiento lipoflico. Es el caso de los surfactantes de HLB bajo.

36

Se forma un sistema difsico compuesto por una solucin micelar o microemulsin inversa de tipo S2, y una fase en exceso de agua. Este caso es el inverso al anterior y corresponde a un comportamiento difsico 2 en un diagrama ternario de Winsor de tipo II(1).

Si R = 1 Las tendencias hidroflicas y lipoflicas se equilibran, y se obtiene el

caso III de Winsor(90,91) con dos tipos de estructuras posibles. Una estructura laminar plana, o de micelas cilndricas, que incorpora alternativamente agua y aceite. Estas estructuras son generalmente rgidas y producen sistemas viscosos no newtonianos, geles o cristales lquidos y presentan propiedades pticas particulares como la birrefringencia(1).

Figura 15. Comportamiento de fase de los sistemas surfactante-agua-aceite relacionado con el valor de la relacin R de Winsor(1,86)

37

7. 3 .1.4. Formulacin pt ima

Despus del embargo petrolero en 1973, varios pases buscaron medidas para depender menos del petrleo importado. Comenzaron un conjunto de investigaciones con la finalidad de desarrollar mtodos que permitieran recuperar algo del petrleo que queda en un reservorio despus de la recuperacin secundaria o drenaje con agua, el cual representa un 70 % del total original. Para lograr esto, se deba encontrar una formulacin fisicoqumica de un sistema aguaaceite-surfactante con una tensin interfacial ultra-baja que permitiera la movilizacin del petrleo atrapado en el reservorio. Estas condiciones coinciden con la situacin fisicoqumica descrita por Winsor. La formulacin ptima puede ser descrita como un conjunto de variables fsico-qumicas que proporcionan un mnimo de tensin interfacial, comportamiento trifsico, alta solubilidad de agua y aceite en la fase intermedia (microemulsin) y un coeficiente de reparto del surfactante aproximadamente igual a la unidad (R=1)(14,23,93). Salager y colaboradores 1979(14), propusieron una tcnica experimental conocida como barrido unidimensional (ver figura 16) para conseguir la formulacin ptima, analizar el comportamiento de fase (transicin del sistema)(23,85,92).

Incremento de la Relacin R de Winsor R<1 Tipo 1 R=1 Tipo 3 R>1 Tipo 2

Formulacin ptima Figura 16. Barrido unidimensional(23,85,93) 38

La tcnica consiste en preparar los sistemas agua-aceite-surfactante en una serie de tubos de ensayo, manteniendo una composicin idntica en todos los sistemas y modificando una de las variables de formulacin, que puede ser la salinidad de la fase acuosa en el caso de surfactantes inicos o el nmero de grupos xido de etileno (EON) en sistemas no inicos conteniendo surfactantes etoxilados. La variable de formulacin puede ser tambin el nmero HLB, donde la formulacin ptima (HLB ptimo) es el valor la variable que corresponde a la zona trifsica mejor centrada.

7. 3 .2. P roto colo de emulsionacin

El protocolo de emulsionacin se refiere a la energa que se aplica para la obtencin de la emulsin, tenemos dos mtodos de alta y baja energa.

Mtodo de alta energa o fuerza bruta: este mtodo se emplea para la

obtencin de emulsiones de tamao de gota pequeo en una forma rpida y concisa por cizallamiento a travs de homogenizadores de alta presin, molinos coloidales o generadores de ultrasonido.

Mtodo de baja energa o fsico-qumico: en este mtodo se emplea la

fsico-qumica del sistema para la obtencin de emulsiones de tamao de gota pequeo, adems se requiere de un orden de adicin de los componentes para la obtencin de una buena emulsin, es decir, la forma como se incorporan, es determinante en el momento de la formulacin.

7.4. PROP I EDADES DE LAS EMU LSI O NES

Las emulsiones presentan cuatro propiedades determinantes en la formulacin, estas son: tamao de gota, viscosidad, estabilidad y pH.

7.4.1. Tamao de go ta
La apariencia de las emulsiones es controlada por el tamao de gota de la fase dispersa (ver tabla 5). El tamao de gota de una emulsin es usualmente expresada como el dimetro de gota de la fase interna. Generalmente, dentro del intervalo de tamao 39

de

gota

las

emulsiones

se

pueden

clasificar

en

macroemulsiones

nanoemulsiones. Tabla 5. Apariencia de la emulsin en funcin del tamao de gota de la fase dispersa(33,50) TAMAO DE GOTA (m)
> 500 500 - 1 1- 0,1 0,1 0,05

APAR IENCIA
Macroglbulos visibles Blanca Blanca-azulada Translcida

7.4.1.1. Macroemulsiones
Estn comprendidas entre 1 100 m, (en casos especiales pueden alcanzar un tamao de gota entre 0,5 500 m) en este rango de tamao de gota son lo suficientemente grandes como para ser afectadas por la fuerza de gravedad(22).

7.4.1.2. Nanoemulsiones
Son aquellas emulsiones que poseen tamao de gotas entre 20 y 500 nm, de apariencia translcida y alta estabilidad cintica, sin requerir concentraciones de surfactante tan elevadas para su formacin(93,94,95,96,97,97,99,100,101,102). Alguno estudios han mostrado que son ms estables cuando esta presente una fase de cristal lquidO(52). Las nanoemulsiones poseen tamaos comprendidos entre microemulsiones y las macroemulsiones, por ello han sido referidas por diversas denominaciones, tales como miniemulsioneS(93,97,99), microemulsiones inestables(103), nanoemulsiones(52,104) , emulsiones submicromtricas(105), emulsiones ultrafinas(106), entre otros. El trmino nanoemulsin ha sido adoptado en los ltimos aos debido a que, adems de ser ms conciso, seala la dimensin del tamao de gota de la emulsin en el orden de nanmetros evitando mal interpretaciones con el trmino de microemulsin(107).

40

Las microemulsiones, al igual que las emulsiones, son sistemas formados por un componente oleoso, agua y surfactante(s) con dominio del orden de 0,01 m(108,109). Sin embargo los dos sistemas difieren en que, mientras las emulsiones son sistemas fuera de equilibrio, las microemulsiones son sistemas termodinmicamente estables(110,111). La obtencin y propiedades de una microemulsin, no dependen del orden de la adicin de los componentes, ni de la intensidad de agitacin aplicada para obtenerlas. Se producen de forma espontnea a concentraciones ms altas de surfactante que las emulsiones, es por esta razn que son consideradas como una solucin micelar donde las micelas estn extremadamente hinchadas y se tocan entre s, sin embargo, se prefiere la nocin de estructura bicontnua propuesta por Scriven(112) y se utilizan en diversas industrias como por ejemplo las industrias de detergencia, polmeros, procesos alimenticios, cosmtica y farmacutica.

Evaluacin de las emulsiones segn el tamao de gota: la cuantificacin del

tamao de gotas actualmente es de gran inters, el mtodo ms antiguo y probablemente el ms ampliamente utilizado de stos, es el examen al microscopio. El tamao, la distribucin y las formas de las gotas de la fase dispersa pueden al ojo experimentado, decir mucho sobre la emulsin y su probable estabilidad(9,113). La nica medida realmente absoluta de la estabilidad de una emulsin es la variacin del tamao de gota en funcin del tiempo. Tal informacin se puede obtener experimentalmente mediante mtodos granulomtricos, basados en fenmenos fsicos. Se pueden clasificar: en mtodos "globales" que se basan sobre una propiedad promedio del sistema, tal como su superficie o su reflectancia, dando un solo dimetro equivalente, y en mtodos "individuales" que consideran las propiedades a la escala de la gota, y que mediante un anlisis estadstico, llevan a la distribucin de tamao (ver figura 17), la cual puede subdividirse de acuerdo con los fenmenos involucrados: microscopa y anlisis de imagen, dispersin de radiacin, difraccin de radiacin, propiedades elctricas, y movimiento relativo gota-fase externa(34).

41

Una distribucin de tamao de gotas (DTG), representa la fraccin de gotas que pertenecen a cada tamao. En una representacin grfica, los datos del anlisis del tamao de gota, viene dado por la variable independiente (propiedad fsica escogida para caracterizar el tamao de las gotas), se ubica en el eje de las abscisas y la variable dependiente, la cual caracteriza la medida y el tipo de cuantificacin, es colocada sobre el eje de las ordenadas.

Figura 17. Grficos de distribucin de tamao de gotas o partculas(23) El tamao de gota se reporta como una dimensin lineal. Pueden existir diferentes formas de caracterizar las gotas, para denominar las mismas, se utiliza el dimetro equivalente el cual esta relacionado con la propiedad que se mide. Por ejemplo, podemos definir un tamao de gota, como el dimetro de la esfera que tiene la misma propiedad fsica; esto es conocido como el dimetro de la esfera equivalente. La propiedad fsica a la cual el dimetro es equivalente al tamao de la gota(34).

7.4.2. E stab ilidad de las emulsiones

Se refiere a la resistencia presentada por las emulsiones, a la coalescencia de las gotas de la fase dispersada. Debido a que las emulsiones son sistemas heterogneos termodinmicamente inestables, su estabilidad es slo cintica. El proceso de

42

desestabilizacin de una emulsin involucra un nmero de mecanismos que se pueden suceder simultneamente o de manera consecutiva(114). Los principales mecanismos de desestabilizacin de una emulsin son: sedimentacin, floculacin, coalescencia y maduracin de Ostwald (ver figura 18).

Emulsin inicial

Sedimentacin Inversa

Maduracin de Ostwald

Floculacin

Coalescencia

Completa separacin de fases

Figura 18. Mecanismos de desestabilizacin de las emulsiones(115)

Sedimentacin: la sedimentacin o sedimentacin inversa (cremado) de las

gotas de una emulsin se produce debido a la diferencia de densidad entre las fases. En este mecanismo el tamao de gota no cambia y la emulsin puede recuperarse mediante agitacin (proceso reversible). La velocidad de sedimentacin est descrita por la ley de Stokes(33,34,50,113,116,116):

2r 2 (" 0 # " ) VS = g 9!

(4)

As, la velocidad de sedimentacin puede ser controlada por la g gravedad y por la disminucin de la diferencia de densidad entre las fases (0
-

),

43

disminuyendo el tamao de gota (radio r) de las emulsiones o aumentando la viscosidad cinemtica de la fase externa, . Las emulsiones con tamao de gota menores de 0.1 m exhiben estabilidad cintica frente a la sedimentacin como consecuencia de que la baja velocidad de sedimentacin estara compensada por el movimiento Browniano de las gotas.

Floculacin: consiste en la agregacin de las gotas de una emulsin. En

este proceso la medida de las gotas no se modifica y la emulsin original puede recuperarse mediante una agitacin suave (proceso reversible). La floculacin suele provocar un aumento en las velocidades de sedimentacin y sedimentacin inversa debido a que los agregados de gotas pueden ser de medida muy grande y sedimentan rpidamente(33,34,50,113,115,116)

Coalescencia: consiste en la fusin de gotas dando lugar a la formacin de

gotas ms grandes. Es un proceso irreversible y conduce a la separacin de fases de la emulsin. Para emulsiones concentradas se ha puesto de manifiesto que la coalescencia sigue la ecuacin de Deminire(117):

1 1 8" = 2 # ! *t 2 3 r r0

(5)

donde r0 y r, son el radio inicial de las gotas y en el tiempo t respectivamente y es la frecuencia de ruptura de la pelcula interfacial por unidad de rea. Por lo tanto, el inverso del tamao al cuadrado del radio de las gotas es una funcin lineal del tiempo.

Maduracin de Ostwald: consiste en el crecimiento de las gotas ms

grandes de la emulsin a expensas de las ms pequeas. La presin dentro de las gotas de una emulsin se denomina presin de Laplace y para emulsiones monodispersas, viene dada por la expresin(116):
"# = 2! R

(6)

donde es la tensin interfacial y R es el radio de las gotas de la emulsin. As, la presin de Laplace aumenta al disminuir el tamao de las gotas.

44

En una emulsin polidispersa existe una diferencia de presin entre las gotas de distintos tamaos. Si la fase dispersa es soluble en la fase continua, las molculas de esta fase difundirn desde las gotas pequeas a las grandes. La ecuacin que describe este mecanismo fue desarrollada por Lifshitz y Slezov(85) e independientemente por Wagner(118). La teora LSW asume que las gotas de la fase dispersa son esfricas y estn separadas entre ellas una distancia mucho mayor que el tamao de las gotas y que el transporte de masa est limitado por la difusin molecular en la fase continua. Bajo estas condiciones se obtiene la velocidad de maduracin de Ostwald(116), :

"=

drc3 8c(#)!Vm D = dt 9 RT

(7)

donde D es el coeficiente de difusin de la especie dispersa en la fase acuosa y rc es el radio crtico, c () la solubilidad en la fase continua, es la tensin interfacial, Vm el volumen molar del soluto, R la constante de los gases y T la temperatura. El radio crtico de la gota de la emulsin es el que corresponde a las gotas que no maduran, es decir, que no crecen ni disminuyen de volumen en un tiempo determinado. Este radio crtico no es constante y aumenta con el tiempo, y el cubo de su derivada es el que est dado por la ecuacin previamente sealada. Para retardar el proceso de maduracin de Ostwald los parmetros que son ms fciles de controlar son la tensin interfacial y el coeficiente de difusin. La disminucin de la tensin interfacial permite reducir la velocidad de maduracin pero los factores que promueven la disminucin de sta (trabajar a temperaturas cercanas a la temperatura HLB del sistema, agregar sal en sistemas con tensioactivos inicos) suelen producir un aumento de la solubilidad y, con ella la difusin aumenta. La forma ms efectiva es adicionando a la fase oleosa un componente insoluble en la fase continua de la emulsin. Se ha puesto de manifiesto que una mezcla de componentes oleosos donde uno de ellos es insoluble en la fase continua puede detener la maduracin de Ostwald(119). Debido a que slo puede difundir el componente oleoso soluble se producir una

45

diferencia de concentracin de los diferentes compuestos oleosos provocando un potencial qumico desfavorable a la difusin. Una emulsin no se considera rota, hasta que coalesce despus de flocular. Siendo la coalescencia, la etapa lenta en la ruptura de las emulsiones, es de esperarse que determine la estabilidad de las mismas. Los factores que controlan el proceso de coalescencia, son los que influencian el adelgazamiento y ruptura de la pelcula. Los fenmenos ms importantes en la estabilidad de las emulsiones son:

Naturaleza fsica de la pelcula interfacial

Se refiere a la resistencia mxima constituido por las molculas de surfactante con fuertes interacciones intermoleculares. Los agentes emulsionantes con caractersticas idneas para asegurar una alta estabilidad, son mezclas de dos o ms surfactantes, siendo la combinacin ms recomendada, la constituida por un surfactante hidroflico y uno lipoflico(120).

Viscosidad de la fase continua

Ella determina la frecuencia de las colisiones entre las gotas, a travs del coeficiente de difusin de las mismas. Un incremento en la viscosidad, reduce dicho coeficiente de difusin y consecuentemente retarda la coalescencia. Esta es una razn que justifica la incorporacin de agentes viscosantes a la fase externa.

Distribucin del tamao de gota

Las emulsiones son ms estables cuanto menor es el tamao de gota y ms estrecha la distribucin de dichos tamaos(121,122).

Relacin de volmenes de fases (WOR)

Se refiere a la proporcin relativa entre el volumen de fase dispersa y el volumen de fase continua. Esto es lo que se conoce como WOR (Water-Oil Ration). Cuando la fase interna constituye menos del 30% del volumen total, las gotas individuales no interfieren entre s y las propiedades fsicas del sistema, estn primariamente determinadas por la naturaleza de la fase continua.

Temperatura
Se puede decir, que los cambios de temperatura afectan considerablemente la estabilidad de las emulsiones, a travs de su influencia sobre la tensin interfacial,

46

naturaleza y viscosidad del film interfacial coeficiente de reparto del surfactante, viscosidad de las fases y agitacin trmica de las partculas dispersadas. Evaluacin de la estabilidad de la emulsin: una emulsin se considera estable, cuando no cambia su aspecto fsico-qumico en 2 o ms aos, y es inestable, si se separa completamente despus de pocos minutos(46,103,112). En el caso, que la emulsin tome mucho tiempo para mostrar cambios, se pueden utilizar ciertas tcticas para acelerar el tiempo; por esta razn los laboratorios de formulacin han utilizado los procedimientos de ensayo de envejecimiento denominados acelerados(113,117,123,124,125) (ver tabla 6). Tales procedimientos de ensayos acelerados deben considerarse nicamente como una evaluacin de la resistencia a los cambios de temperatura, y como una indicacin de la estabilidad ambiental normal(106). Tabla 6. Ensayos acelerados(117,125) TEMPERATU RA
25C 37C 45C 50C -20C -20 C a 25C

TIEMPO
1 ao 6 meses 3 das; 1,2,3,4 semanas; 2, 3 meses 1 mes 1 mes 5 ciclos (24 horas a cada temperatura)

Otros ensayos importantes son la centrifugacin y la medicin del volumen de las fases separadas. La centrifugacin, acelera la velocidad de sedimentacin al aumentar el valor de g segn la ecuacin de Stokes (4). Adems constituye un mtodo simple y rpido de evaluar la estabilidad potencial de varias frmulas emulsionadas. Cada laboratorio tiene su propia metodologa detallada. Una buena emulsin debe ser capaz de resistir hasta 5.000-10.000 rpm durante treinta minutos sin mostrar signos de separacin(109).

47

El volumen de las fases separadas, consiste en la medicin de la zona coalescida o clarificada del sistema, en funcin del tiempo. Generalmente los sistemas se separan en tres zonas: una zona central que contiene una nata o emulsin de alto contenido de fase interna y dos fases separadas: la interna (coalescida) y la externa (clarificada)(34), (ver figura 19). Con el fin de cuantificar la estabilidad con valor numrico, es usual utilizar, el tiempo requerido para que coalesca la mitad del volumen de fase interna, por ejemplo el tiempo en el cual Vc/V = (donde Vc es volumen cualescido y V es volumen infinito)

Figura 19. Fraccin de volumen coalescido o clarificado en funcin del tiempo(34)

7.4. 3 . Reologa de una emulsin

La reologa (del griego rheo = derramarse) es la rama de la fsica que estudia el comportamiento de los fluidos sometidos a diferentes tipos de esfuerzos. Para tales estudios se usan aparatos llamados remetros, que permiten graficar la relacin entre el esfuerzo y el cizallamiento de los fluidos(34,53). Si existe una relacin lineal entre el esfuerzo y el cizallamiento, se dice que el fluido es newtoniano; es el caso de la mayora de los fluidos simples, pero no de las emulsiones o suspensiones, las cuales presentan a menudo un comportamiento llamado pseudoplstico. Tal comportamiento se caracteriza por una disminucin de la viscosidad a medida que el cizallamiento aumenta.

48

Adems de estos tipos bien definido, existe otro frecuentemente observado en emulsiones cosmticas, es el comportamiento tixotrpico, que no slo depende de la velocidad de deformacin, sino tambin del tiempo durante el cual se aplica el esfuerzo cortante(33,53). En tal caso se debe especificar las condiciones de cizallamiento cuando se indica un valor de viscosidad. Por esta razn se dice que la viscosidad de una emulsin es la propiedad que caracteriza la resistencia de un fluido a desplazarse(34).

7.4.4. pH de las emulsiones

La piel tiene un pH de 4 a 6, y tiende a ajustarse al pH del producto tpico que se aplica. Cuando ste se encuentra fuera del rango, puede provocar alteraciones no favorables a la piel, es por ello, que el ajuste de pH a este intervalo es de suma importancia al momento de formular las emulsiones(50).

49

8. ANTECEDENT ES DE L PR OB LEMA A INVESTI GAR 8.1. FORMU LACI N

Del anlisis de la revisin bibliogrfica realizada, es posible establecer que la formacin de emulsiones cosmticas, est comprendida en dos grandes grupos:

8.1.1.Formulacin empri ca o po r ensayo y e r ro r

Actualmente, este mtodo es el ms empleado por los Laboratorios cosmticos para la obtencin , de emulsiones. La mayora , y de las (de patentes(2,5,7,8,1267,127) revistas cosmticas(79,128) libros

cosmetologa y farmacia) ms recientes(21.32.44.45.107), hacen referencia a Griffin(74,129) , quien sugiri el mtodo del HLB (ver seccin 4.3.1.1). Por otra parte, cabe destacar que la formulacin emprica, requiere el uso de mtodos de alta energa o fuerza bruta para la obtencin de gotas pequeas en el orden de los nanmetros. La formacin de nanoemulsiones por mtodos de dispersin es generalmente muy costosa, si se tiene en cuenta la energa mecnica necesaria para producir gotas de tamao pequeo, en vista de que sta es mayor que la necesaria para las emulsiones convencionales(130). Entre los equipos de dispersin ms eficaces para producir nanoemulsiones estn los homogenizadores de alta presin, los molinos coloidales(129) y los generadores de ultrasonido(131), este ltimo solo a escala de laboratorio. El-Aasser y colaboradores(93) describen la preparacin de miniemulsiones del tipo O/W con tamaos de gota entre 100 y 400 nm, por mtodos de dispersin (ultrasonido) utilizando una mezcla de tensioactivo inico y alcoholes grasos de cadena larga a concentraciones entre 0,5 y 3 % en peso basado en la fase oleosa. Adems dichos autores describen que el orden de adicin de los componentes influye en la formacin de las miniemulsiones(93,97,132).

8.1.2.

Formulacin fsico-qumica

El conocimiento de las propiedades fisicoqumicas de los sistemas aguatensioactivo-componente oleoso es uno de los aspectos ms importantes en la formacin de nanoemulsiones, empleando mtodos de baja energa o fisicoqumicos, que se caracterizan por requerir baja energa y/o formar

50

emulsificacin espontnea. Cuando a un sistema en equilibrio termodinmico se le cambian las variables del sistema como la temperatura y/o la composicin (salinidad, relacin W/O, entre otros), ste pasa a una condicin de no-equilibrio con una energa libre mayor. En estas condiciones se producen transiciones de fases que podran emulsionar el sistema obtenindose gotas pequeas, con una mnima cantidad de energa. La formacin de nanoemulsiones por mtodos de condensacin fisicoqumicos se ha relacionado con aspectos tales como la emulsificacin espontnea(133,134,135), orden de adicin de los componentes(107,136); inversin de fases(99,102,106), entre otros. Existe acuerdo en que, durante el proceso de emulsificacin por mtodos de condensacin, se producen tensiones interfaciales muy bajas que facilitan la formacin de gotas de tamao pequeo y baja polidispersidad pero an no se conocen los factores y los mecanismos que determinan la formacin de gotas con tamao pequeo. Entre los mtodos de baja energa utilizados para obtener nanoemulsiones se encuentran el de la temperatura de inversin de fases (PIT)(137), donde se produce la inversin de una emulsin W/O a O/W (o viceversa) debido a la disminucin o incremento de la temperatura. En este mtodo, dependiendo de la concentracin del tensioactivo pueden formarse durante el proceso de emulsionacin una regin de tres fases Winsor III o una fase de microemulsin a la temperatura HLB de los sistemas agua/tensioactivo no inico/componente oleoso, en consecuencia, se alcanzan tensiones interfaciales muy bajas lo que facilita el proceso de emulsificacin(124,125,138,139,140). Sin embargo, en la temperatura HLB la velocidad de coalescencia de las emulsiones es muy rpida y las mismas suelen ser muy inestables(139,141,142). Por ello, es necesario controlar todos aquellos factores que afectan la temperatura HLB(143,144,145,146) para poder lograr obtener nanoemulsiones translcidas y cinticamente estables(99,102,147,148). Otro mtodo de emulsificacin por inversin de fases es el llamado EIP (emulsion invertion point)(149), en el cual se produce la inversin de fases de W/O a O/W por adicin de agua en sistemas constituidos por agua, tensioactivo y componente oleoso sin necesidad de una

51

fuerte agitacin y a temperatura constante. Al adicionar agua a una solucin de tensioactivo en hidrocarburo, se forma la emulsin W/O y, al aadir el agua, el tensiactivo difunde a la fase acuosa formndose la emulsin O/W(150,151). Sagitani describe una variante del mtodo, donde es fundamental la formacin de una fase de cristal lquido laminar durante la adicin de agua para obtener emulsiones del tipo O/W de baja polidispersin y tamao pequeo de gota(94,152,153,154).

8.2. ANLISIS Q U M ICO - CONTRO L DE CALIDAD

Estudios realizados en Europa por diferentes investigadores tanto en productos cosmticos(63,155) como en productos farmacuticos(156,157)en la determinacin de parabenos se han desarrollado tomando en cuenta la 6ta Norma del 76/768/EEC. Al igual que estos, otros investigadores de Finlandia, Korea, Estados Unidos, han realizados estudios en productos farmacuticos para la determinacin de parabenos(158,159,160). Hasta ahora slo se han llevado a cabo muy pocos estudios para la deteccin de parabenos en productos cosmticos: crema y champ, algunos de ellos empleando cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR) con UV(63,156) como sistema de deteccin, y electroforesis capilar(63). Al igual que los conservadores, analizar los principios activos(27) es de gran inters, para garantizar la calidad del producto. En la literatura se encuentran estudios para la determinacin de vitaminas liposolubles (A y E) por CLAR fase reversa con UV como sistema de deteccin, en matrices tales como: producto farmacutico(161,162,163,164,165), plasma(39,166,167,168,169,170,171,172) , aceites(173), plantas(174), leche(175,176,177,178,179), alimentos(180) y yogurt(181). Actualmente en la literatura no se ha reportado algn mtodo por CLAR que permita la determinacin simultnea de estas vitaminas en productos cosmticos, junto con los conservadores.

52

9. JUSTIF ICACI N COSMT ICA

DE L

EMPLE O

DE

EMU LSI ON ES

EN

La biodisponibilidad de principios activos liposolubles, tales como: vitamina A, vitamina E, entre otros, para la penetracin y absorcin cutnea, puede aumentar cuando el aceite se encuentra en forma de pequeas gotas, bajo la forma de una nanoemulsin fase externa agua(182,183,184). Prcticamente, a pesar de las dificultades que implican su formulacin y los problemas de estabilidad que pudiesen presentar, las nanoemulsiones poseen varias ventajas importantes con respecto a otras formas lquidas. Estas ventajas pueden resumirse de la siguiente manera(182,183):

En un mismo producto, pueden incorporarse sustancias hidrosolubles y La penetracin y la absorcin de los principios activos, se controlan ms La accin de la nanoemulsin es prolongada y el efecto emoliente es mayor Presenta una gran versatilidad, en relacin a las propiedades del producto

liposolubles simultneamente; compatibles con la capa hidrolipdica de la piel. fcilmente si se incorporan en una nanoemulsin que el observado con preparaciones comparables final, pudiendo obtenerse diversos grados de textura, consistencia, extensibilidad. Por esta razn, la formulacin de nanoemulsiones fase externa agua, es de gran inters no slo con propsitos de obtener tamaos de gotas pequeas que garanticen la penetracin y la absorcin de principios activos liposolubles, sino tambin, para estudios de comportamiento fsico y estabilidad cintica de las mismas. En tal sentido, luego de realizar un estudio exhaustivo de la bibliografa, vemos que para la elaboracin de nanoemulsiones cosmticas, desde el punto de vista prctico los mtodos de alta energa son, en muchos casos, los ms utilizados pero tambin los ms costosos, por el consumo de energa, y el empleo de otros aditivos que se incorporan a la frmula para dar estabilidad y textura encareciendo as el producto final.

Por otra parte, los agentes de proteccin bacteriolgica juegan un rol

importante en la formulacin de un producto cosmtico. La contaminacin

53

microbiolgica en l, es muy comn(185) y ha constituido una gran preocupacin en la industria por muchos aos. Los cosmticos actuales son complejos y requieren agentes de conservacin eficientes y seguros que acten continuamente durante su vida til y estn presentes en los porcentajes requeridos(63,186). En Venezuela a pesar de que existen normas que regulan estos porcentajes, desafortunadamente, no se contempla an dentro del anlisis qumico de un producto cosmtico la cuantificacin de sus conservadores y principios activos. Es por ello que en el presente trabajo se realiz la formulacin de una nanoemulsin cosmtica, nutritiva y regeneradora a bajo costo energtico y se emple un mtodo cuantitativo, rpido y preciso para la determinacin de los mismos en el producto final (crema), lo que permiti garantizar su mayor calidad.

54

10.

HIPT ESIS
La biodisponibilidad de principios activos liposolubles, tales como: vitamina

Si se toma en cuenta que: A, vitamina E, para la penetracin y absorcin cutnea, aumenta cuando la fase oleosa se encuentra en forma de pequeas gotas.

La mezcla de surfactante a utilizar en la emulsin se obtiene mediante un

barrido unidimensional empleando el HLB como variable de formulacin.

Optimizando el protocolo de emulsionacin de baja energa se puede

obtener nanoemulsiones.

El uso del polmero Carbopol 940 proporciona la viscosidad requerida para

la crema y le confiere mayor estabilidad.

La cromatografa lquida de alta resolucin en fase reversa, utilizando un

detector UV de arreglo de diodos, permite la determinacin y cuantificacin de los parabenos (conservadores) y principio activo (vitamina E, vitamina A) de la crema.

Se podr mediante un protocolo de emulsionacin a baja energa,

obtener una nanoemulsin fase externa agua, con tamao de gota menor a 500 nm que favorezca la penetracin y la absorcin de los principios activos de la crema a travs de la piel y evaluar su calidad.

55

11. OBJET IVOS 11.1. OBJET IVOS G EN ERALES

Obtener una nanoemulsin fase externa agua e incorporar vitaminas liposolubles en la fase dispersa. Emplear un mtodo por cromatografa lquida de alta resolucin que permita

cuantificar las vitaminas liposolubles y los parabenos en el producto final.

11.2. OBJET IVOS ESP ECF ICOS

Determinar el HLB ptimo de la mezcla de los surfactantes no inicos (Tween y Span), utilizando un barrido unidimensional para los sistemas agua/surfactante no inico/aceite. Seleccionar la relacin aceite de maz/parafina a utilizar en la

nanoemulsin. Optimizar el protocolo de emulsionacin para obtener gotas menores a 500

nm. Evaluar las propiedades de la nanoemulsin base (estabilidad, tamao de

gota). Incorporar a la nanoemulsin vitaminas liposolubles, con la finalidad de

proporcionarle propiedades nutritiva y regeneradora de la piel. Optimizar un mtodo por cromatografa lquida de alta resolucin con

deteccin UV arreglo de diodos que permita la determinacin y cuantificacin de las vitaminas liposolubles y los parabenos presentes en el producto final.

56

12.

PARTE E XP ER IM ENTAL

12.1. MATER IALES Y E Q U IP OS 12.1.1. Materias p rimas empleadas en la formulacin de la c rema

Principios activos: las vitaminas liposolubles empleadas como principios activos para este estudio fueron: vitamina A (acetato) y vitamina E ( -tocoferol), suministrados por qumicos y cosmticos Dailyn C.A.

Agentes surfactantes o tensioactivos: utilizados en este trabajo pertenecen a

los no inicos y, son steres derivados del sorbitn, tales como: el Span 60 (no etoxilado) cuyo HLB es de 4,7; peso molecular de 430 g/mol aprox. y punto de fusin 50 C, suministrado por ICI Americas Inc. Lot. 3619CL y el Tween 80 (etoxilado) presenta un HLB de 15,0 y un peso molecular de 1308 aprox., distribuido por Sigma-Aldrich Lot. 82H0306.

Fase acuosa: agua destilada. Fase oleosa: est compuesta por aceite de maz, Mazeite (100% de

aceite puro de maz), Lot. 21105457866, comprado en el supermercado; es un aceite triglicrido, caracterizado por poseer los cidos grasos descritos en la tabla 7(187). El otro aceite utilizado es la parafina lquida, aceite mineral ligero resultante de una mezcla de hidrocarburos saturados, lquidos refinados (C10 C15), que se obtiene del petrleo(41,187), suministrada por Cientfica Andina C.A. Tabla 7. Composicin porcentual de cidos grasos en el aceite de maz(187,188). C IDOS GRASOS
Oleco Linolico Esterico Palmtico Araqudico Lignocrico

N de C y n de do bles enlaces
18:1 18:2 18:0 16:0 20:0 24:0

ACEITE DE MAZ
43,4 % 39,1 % 3,3 % 7,3 % 0,4 % 0,6 %

57

Agentes conservadores: los conservadores empleados en la formulacin de Metilparabeno EPIII/USP23 mbH, y (Lot. 8902), pureza por 99,9% y

la crema son steres del cido p-hidroxibenzico, usualmente conocidos como parabenos: CHEMIE Propilparabeno EPIII/USP23 (Lot. 8856), pureza 99,8%. Fabricados por WENDTVertriebsgeselischaft distribuido CENCO-ZOTTI Farmacutica S. A.

Agente humectante: propilenglicol, suministrado por Cientfica Andina C.A. Agente viscosante: Carbopol 940 (polmero del cido acrlico) distribuido

por qumicos y cosmticos Dailyn C.A. y es neutralizado con Trietanolamina suministrada por la Farmacia Humboltd.

Fragancia: Magnolia, estratto di profumo Lot. 10330, distribuido por

LErbolario-Lodi-I-XCVI. (Italia)

12.1.2. React ivo s y solventes ut ilizados para el cont ro l de calidad del p rodu cto
Todos los reactivos utilizados fueron de grado analtico y los solventes grado HPLC:

Cloroformo. J.T. Baker (Phillisburg, N. J. USA). Reactivo de Hanus. Merck Darmstadt. Yoduro de potasio. Merck. Almidn. Merck. Tiosulfato de sodio. Riedel-de Han, (Alemania). Alcohol etlico. J.T. Baker (Phillisburg, N. J. USA). ter etlico. J.T. Baker (Phillisburg, N. J. USA). Hidrxido de sodio. Riedel-de Han, (Alemania). Fenolftalena. Merck. cido actico glacial. J.T. Baker (Phillisburg, N. J. USA). Trietilamina, grado analtico 99,5 % de pureza. Aldrich. cido fosfrico. J.T. Baker (Phillisburg, N. J. USA). Acetonitrilo, y metanol, grado HPLC. J.T. Baker (Phillisburg, N. J. USA).

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Patrones USP de vitamina A acetato y vitamina E -tocoferol. Sigma (San Patrones secundarios de los parabenos (metil y propil). WENDT-CHEMIE,

Luis, MO, USA). suministrado por Laboratorios PlusAndex C.A.

12.1.3.

E quipo s empleados a la fo rmulacin

Agitador de tubo Vari-mix Thermolyne. Balanza de precisin Mettler PC 440. Bao termostatizado de agua HAAKE D1. Sistema lser HeNe Aerolite 100 series Lser. Aerotech, INC, Pittsburg Un agitador mecnico IKA Labortechnick, modelo Eurostar (50 2000 rpm) Plancha de calentamiento Corning. Difractmetro de luz lser, modelo Beckman Coulter LS 13 320. Picnmetro calibrado de 25 mL. pH-metro Orion modelo 720 A. Viscosmetro Brookfield Model RVT Massachussets. Estufa Memmert modelo U10

con turbina de hlice de cuatro aspa, y de ancla.

12.1.4. E quipo s empleados en el anlisis qumico

Cromatgrafo lquido marca WATERS (Milford, Massachussets, USA) que consta de:

Un sistema de introduccin de la muestra modelo Alliance 2690, compuesto de una

bomba cuaternaria de alta presin, un sistema de inyeccin automtico (con volmenes de inyeccin desde 0,005 a 1,000 mL) con automuestreador de cinco carruseles de 24 posiciones de viales de 2 mL c/u y un horno para termostatizacin de las columnas.

Un detector UV-Visible de arreglo de diodos modelo PDA 996. Un computador digital modelo Venturis Fx 51665 con un software Millennium32
versin 32 WATERS que permite el control de todos los componentes del sistema y que realiza la toma y el procesamiento de las seales obtenidas.

59

Para la separacin de los analitos se utiliz una columna analtica Nova-

pak C18 de 15 cm de longitud, 3,9 mm dimetro interno (DI) y 4m de dimetro de partcula (dp) suministrada por Waters.

Las medidas de pH de las soluciones se llevaron a cabo en un pH-metro En el tratamiento de la muestra se utiliz un vortex marca Heidolph,

marca Orion, modelo 701 A. Alemania; un bao ultrasnico modelo Ultra Branson 1210 y una centrfuga modelo Dynac II, Clay Adams Dickinson and Company.

12.2. MTODOS Y PR OCEDIMI ENTOS 12.2.1. Cont rol de calidad del a ceite de maz
Para garantizar que el aceite mantiene sus propiedades y que pueda ser utilizado en la formulacin, se determinaron los ndices de acidez, yodo y perxidos, establecidos en libros oficiales(189,190); cada ndice se realiz por triplicado. ndice de acidez (IA): 1.-Se disuelven 10 g de aceite en 50 mL de una mezcla formada por volmenes iguales de alcohol etlico y ter etlico. El disolvente debe ser neutralizado previamente con hidrxido de sodio 0,1 N VS (Volumetric Solutions), en presencia de 0,5 mL de fenolftalena. 2.-Una vez disuelto, se valora con hidrxido de sodio 0,1 N VS. La valoracin se da por terminada cuando el color rosa persiste durante 15 segundos por lo menos (n = mL de hidrxido de sodio 0,1 N, m = peso de la muestra). El ndice de acidez se calcul aplicando la siguiente frmula: IA= (5,610 x n)/m (8) ndice de yodo (Ii): 1.-En un matraz de 250 mL provisto de un tapn esmerilado, seco, se pesa 0,14 g de muestra y se disuelve en 15 mL de cloroformo.

60

2.-Seguidamente se hacen fluir lentamente 25 mL del reactivo de Hanus. Se tapa el matraz y se coloca en la oscuridad durante 30 minutos, agitando frecuentemente. 3.-Se aaden 10 mL de una solucin de yoduro de potasio TS (Test Solutions) y 100 mL de agua. 4.-Se valora con tiosulfato de sodio 0,1 N VS agitando enrgicamente hasta que la coloracin amarilla prcticamente haya desaparecido. 5.-Se aaden 5 mL de almidn TS y se contina la valoracin agitando enrgicamente, hasta la desaparicin de la coloracin. 6.-Se realiza un blanco en las mismas condiciones (n2 mL de tiosulfato sdico 0,1 N VS). Se calcul el ndice de yodo con la siguiente frmula:

II= [1,269 (n2 - n1) ]/ m (9) ndice de perxidos (Ip): 1.-En un matraz de 250 mL con tapn esmerilado se introducen 5 g del aceite. 2.-Se aaden 30 mL de una mezcla constituida por 3 volmenes de cido actico glacial y 2 volmenes de cloroformo. 3.-Se agita durante 1 min, y se aaden 30 mL de agua. 4.-Se valora con tiosulfato de sodio 0,01 N VS aadido lentamente, agitar enrgicamente hasta que la coloracin amarilla haya prcticamente desaparecido 5.-Se adicionan 5 mL de almidn, se contina la valoracin agitando constantemente hasta la desaparicin de la coloracin (n1 mL de tiosulfato sdico 0,01 N) 6.-Se realiza un blanco en las mismas condiciones (n2 mL de tiosulfato de sodio 0,01 N); el blanco no debe precisar ms de 0,1 mL de tiosulfato de sodio 0,01 N VS. Se calcul el ndice con la siguiente frmula:

IP= [10 (n2 - n1) ]/ m (10)

61

12.2.2. Cara cteriza cin de los sistemas agua/surfactante

no inico/a ceite. Bar rido s unid imensionales a 25 y 5 0 C

Los barridos unidimensionales se prepararon a una relacin agua/aceite (WOR) igual a 1(5/5) y 2,33 (7/3) a diferentes concentraciones de sal (0 y 5 % NaCl en cada tubo); la concentracin total de surfactante es de 1 % p/v. Todos los barridos se prepararon a un volumen total, VT=10 mL, y se colocaron en bao termostatizado a 25 y 50 C. El HLB se calcul mediante la ecuacin (1). El orden de adicin de los componentes del sistema estudiado fue el siguiente: 1.-Surfactante de HLB bajo 2.-Surfactante de HLB alto 3.-Solucin salina o fase acuosa 4.-Fase oleosa (aceite de maz o parafina) Las muestras fueron introducidas en tubos de ensayo, tapadas y selladas con pelcula transparente autoadherente, se agitaron por 20 minutos en un agitador de tubo Vari-mix y se llevaron a un bao termostatizado a la temperatura requerida hasta la completa separacin de fases.

12.2.3.

Op t imizacin del p ro to co lo de emulsionacin

Para lograr reproducibilidad y confiabilidad de los resultados encontrados en la formulacin de la crema, se realizaron estudios de optimizacin. Para ello se llevo a cabo una serie de ensayos donde se evaluaron: HLB de la emulsin base, velocidad de agitacin, velocidad de adicin del agua a la fase oleosa, temperatura, tipo de turbina, orden de adicin y tiempo de mezclado.

12.2.4. maz/pa rafina

E stud io

de

la

relacin

a ceite

de

Para seleccionar la emulsin base se realizaron estudios de emulsionacin variando la relacin aceite de maz/parafina a un determinado HLB, empleando la optimizacin del protocolo anteriormente descrito.

62

12.2.5. inico s

E stud io del tamao de gota de la emulsin

base con respecto a la mez cla y t ipo de surfactantes no

Este estudio se realiz empleando diferentes mezclas de surfactantes no inicos: Span 60/Tween 80(191), Span 20/Tween 60, Span 60/Tween 60 y Tween 80/Tween 85 (mezcla empleada en la caracterizacin de los sistemas, seccin 9.2), y as poder elegir la mezcla ms apta bajo las condiciones previamente optimizadas a un mismo HLB determinado en la seccin 9.3.

12.2.6.

Emulsionacin

La emulsionacin de la nanoemulsin base y la elaboracin de la crema se llev a cabo mediante un protocolo de baja energa.

12.2.6.1.

Nanoemulsin base

La nanoemulsin base (O/W), se prepar de la siguiente manera: 1.-Se pesan todos los componentes oleosos (aceite de maz/parafina) y los surfactantes (Span 60/Tween 80) en un recipiente de acero inoxidable. 2.-Se lleva a un bao Mara a 70 C y se mezclan a 350 r.p.m. durante 10 minutos hasta que la fase alcance una temperatura de 65 C. 3.-Se adiciona el agua a un caudal de 3 mL/min, a temperatura ambiente sobre la fase oleosa para formar la nanoemulsin en un tiempo de 15 minutos, agitando constantemente a 350 r.p.m. 4.-Una vez formada la nanoemulsin, se retira el bao y se mantiene la agitacin hasta que el sistema alcance la temperatura ambiente (25 C).

12.2.6.2.

Crema dermoco smti ca

La crema se formul a partir de la nanoemulsin base de la siguiente forma: 1.-Se pesa la vitamina E junto con los componentes oleosos (antes de emulsionar).

63

2.-Se adiciona la vitamina A previamente pesada cuando la nanoemulsin ha alcanzado una temperatura de 40 C. 3.-Se hidrata el carbopol 940 (gelificacin), y se incorporan los parabenos solubilizados en propilenglicol al mismo. 4.-Se cambia la turbina de hlice por una turbina de ancla y se introduce la nanoemulsin en el recipiente que contiene el gel, se mezcla por 30 minutos a 250 r.p.m. 5.-Se agrega la fragancia. 6.-Finalmente se ajusta el pH entre 5,5 - 6,5 y la viscosidad, con trietanolamina, manteniendo la agitacin por 30 minutos. Durante el proceso de emulsionacin las vitaminas A y E fueron protegidas de la luz, empleando papel aluminio para cubrir los recipientes.

12.2.7. emulsin

Determinacin

de

las

p ro p iedades

de

la

Consiste en analizar las propiedades fsicas que caracterizan la nanoemulsin y la crema dermocosmtica como producto final. Para ello se determinaron: tamao de gota, estabilidad, viscosidad y pH.

12.2.7.1.

Tamao de go ta

El tamao de gota de las emulsiones se determina por medio de un equipo de difraccin de luz lser, Beckman coulter, el cual consta de una fuente lser diodo de 5 mW a una longitud de onda de 750 nm como fuente principal de iluminacin, y una fuente secundaria de luz proveniente de una lmpara de halgeno-tungsteno para el sistema Polarizad Intensity Differential Scattering (PIDS). La luz de la lmpara halgeno-tungsteno es proyectada a travs de un conjunto de filtros los cuales transmite tres longitudes de onda (450, 600 y 900 nm) a travs de 2 polarizadores orientados ortogonalmente para cada una. Un lente de transformada de Fourier y un detector con un gran nmero de segmentos fotosensibles en crculos concntricos de diferentes dimetros. Cuando el haz paralelo de luz coherente monocromtica (lser) pasa a travs de la muestra la luz

64

es dispersada en un ngulo que es inversamente proporcional a su tamao. Esta luz dispersada es recogida por el detector y los patrones de luz dispersada permiten el clculo de la distribucin del tamao de gotas de la emulsin utilizando la teora de Mie y la teora de Fraunhofer. El dimetro de gota de las emulsiones se determin colocando pequeos volmenes de la misma en la clula de medicin del equipo, la cual contiene agua, la muestra es aadida en el equipo hasta que este indique la elevacin ptima de obscuracin (no saturacin en la seal de la luz). La distribucin de tamao es presentada en histogramas y el dimetro medio utilizado es el dimetro Sauter, D(3,2)(192)

12.2.7.2.

Estabilidad

Todos los ensayos de estabilidad a temperatura ambiente se llevaron a cabo en un bao termostatizado a 25 C, y los estudios acelerados en estufa y nevera, donde se observ y se midi el volumen de clarificacin o de coalescencia con respecto al volumen de emulsin inicial, en funcin del tiempo (inspeccin visual). Las emulsiones resultantes de la variacin relacin aceite de maz/parafina fueron envasadas en tubos de vidrio con tapa, sellados con papel transparente autoadherente y se colocaron a 25 C (en un bao termostatizado) y a 45 C (en una estufa). Las formulaciones se chequearon frecuentemente por un perodo de 3 meses. Para ello se evaluaron 6 emulsiones cada una por triplicado. La nanoemulsin base y la crema fueron envasadas en recipientes de vidrio con tapa de rosca para observar su estabilidad, se mantuvieron en bao termostatizado a 25 C, en estufa a 45 C y en nevera a 8 C. Para este estudio se analizaron visualmente 3 nanoemulsiones y 3 cremas, para cada uno de los casos.

12.2.7. 3 .

Visco sidad

Se evalu la viscosidad a 12 muestras de nanoemulsin y 21 muestras de crema dermocosmtica, cada una por triplicado con el viscosmetro Broofield. Para

65

ello se emple la aguja nmero 1 para la nanoemulsin, a 10 r.p.m. por un lapso de 5 minutos y la aguja nmero 3 para la crema, a 50 r.p.m. por un lapso de 5 minutos.

12.2.7.4.

pH

Para la evaluacin de este parmetro se midieron 12 muestras de nanoemulsin y 21 muestras de crema dermocosmtica cada una por triplicado. El pH de la crema y de la nanoemulsin se midi con un pHmetro Orion, directamente y diluida en agua (1:10)

12.3. .ANLISIS Q U M ICO DE LA NANO EMULSI N Y DE LA CR EMA DERMOCOSMT ICA

Con la finalidad de optimizar un parmetro del protocolo de emulsionacin y adems garantizar la calidad del producto, se llevaron a cabo estudios analticos y para ello se evalu el contenido de cada uno de los analitos. Las determinaciones se realizaron por cromatografa lquida de alta resolucin.

12.3.1.

Op t imizacin de los pa rmet ro s de la tcnica

analt ica aplicada

La optimizacin de las condiciones experimentales se realiz en el mdulo de separacin Alliance de Waters (Milford, Massachussets, USA).

12.3.2.

Soluciones pat rones

Las soluciones patrones de cada vitamina y de cada parabeno se prepararon en metanol grado HPLC a una concentracin final de: 2000 g/mL (vitamina A), 2000 g/mL (vitamina E), 2000 g/mL (metilparabeno) y 2000 g/mL (propilparabeno). Las soluciones de trabajo de concentraciones intermedias se prepararon tambin en metanol grado HPLC, a una concentracin final de 500 g/mL (vitamina A), 1000 g/mL (vitamina E), 1000 g/mL (metilparabeno) y 250 g/mL (propilparabeno). Estas soluciones patrones se almacenaron bajo

66

refrigeracin a 8 C en frascos mbar. Finalmente, las soluciones de trabajo se preparaban diariamente por dilucin de estos estndares intermedios en metanol.

12.3. 3 .

Fase mvil

La separacin de los analitos se realiz utilizando un gradiente de elucin y para ello se prepararon las fases que se describen a continuacin:

pH 3,9

Fase mvil A: 5% de acetonitrilo en una solucin de trietilamina 0,015 M a Fase mvil B: Acetonitrilo La solucin trietilamina 0,015 M, pH 3,9 se prepar solubilizando 1050 L

de trietilamina en 500 mL de agua grado HPLC, se ajust pH con cido fosfrico concentrado. Las fases se filtraron a travs de membranas de 0,45 m de dimetro de poro (HV, Millex de Millipore) y se desgasificaron en un bao ultrasnico Branson 2210 antes del anlisis.

12.3.4.

T ratamiento de muest ra

Las cremas estudiadas son nanoemulsiones que contienen una fase acuosa, una fase oleosa y surfactantes y por ello, los analitos de inters se extrajeron de las mismas con metanol. En ese sentido, antes de su introduccin en el sistema cromatogrfico, las muestras se trataron segn el protocolo que se detalla a continuacin En un matraz volumtrico de 10 mL, se pesaron 0,2 g de crema, se agregaron 5 mL de metanol y se agit vigorosamente en un vortex durante 5 minutos para favorecer el proceso de extraccin. Posteriormente se enraz hasta el aforo con metanol y se llev a un bao ultrasnico por 20 minutos. La mezcla obtenida se centrifug a 3000 r.p.m. durante 25 minutos. Inmediatamente se filtr y se trasvas a un vial. Un volumen de 10 L de esta solucin se inyect en el sistema cromatogrfico para su anlisis. Es importante sealar que en todo momento tanto los matraces como los tubos de centrfuga se envolvieron con papel aluminio para protegerlos de la luz directa y preservar de esta forma aquellos analitos que son sensibles a la misma.

67

En lo que respecta a la sntesis de las cremas, se realizaron estudios para poder establecer el tiempo ptimo de mezclado que permitiera obtener la mxima homogeneidad del sistema. En ese sentido se evaluaron los analitos de inters en cremas obtenidas para tiempos de mezclado diferentes (entre 15 y 60 minutos). Para ello, se analizaron muestras de cremas de tres lotes de 100 g cada uno, a escala de laboratorio. El procedimiento de muestreo fue aleatorio, cada lote se dividi en cuatro partes de 25 g. Cada parte se extendi en un vidrio reloj, se dividi en cuadrantes y con una jeringa de insulina se tomaron muestras en el cuadrante superior e inferior pero del lado opuesto. Un total de 12 muestras se tomaron de cada crema que se analizaron por triplicado.

12.3. 5.

P ro ced imiento

La determinacin de las vitaminas A, E y los parabenos (metil y propil) se realiz por cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR). Para ello, teniendo en cuenta las propiedades fsico-qumicas de los analitos se emple la modalidad por cromatografa de reparto en fase reversa (ver tabla 8). sta consiste en la retencin de los analitos en una fase estacionaria hidrofbica del tipo C-18, (octadecilsilano) y la elucin de los mismos con una fase mvil de polaridad variable.
Tabla 8. Solubilidad de los analitos.

ANALITOS
Metilparabeno Propilparabeno Vitamina A Vitamina E
(*)

SOLUBILIDAD ( * ) ( mL)
1 en 400 de agua, 1 en 3 de alcohol, y 1 en 10 de ter; libremente soluble en metil alcohol 1 en 2500 de agua, 1 en 400 de agua caliente, 1 en 1,5 de alcohol, y 1 en 3 de ter; libremente soluble en metil alcohol Insoluble en agua y en glicerina, solubles en alcohol deshidratado y en aceites vegetales, muy soluble en cloroformo y en ter. Insoluble en agua, soluble en alcohol, miscible con acetona, cloroformo, ter y aceites vegetales

Referencia tomada del Martindale(20)

68

La deteccin de los componentes separados por CLAR se realiz por espectroscopia de absorcin molecular en el ultravioleta a la longitud de onda de mxima absorbancia de cada uno de los analitos, como se muestra en la tabla 9. Tabla 9. Longitud de onda de mxima de los analitos en el ultravioleta. ANALITOS
Metilparabeno Propilparabeno Vitamina A Vitamina E
(*)

UV ( * ) (nm )
245 metanol 245 metanol 325 etanol 291 metanol

Referencia tomada del IDDA(193)

12.3.6.

Cara cterst i cas analt ica s del mt odo

Para acceder a las caractersticas analticas del mtodo se realizaron estudios de precisin y exactitud. La precisin del procedimiento se evalu por la medicin del rea del pico de cinco rplicas de los analitos en solucin y de muestras de cremas enriquecidas con los analitos a diferentes niveles de concentracin (ver tabla10). Tabla 10. Concentraciones en g/mL de las soluciones patrones de vitamina A (VitA), de vitamina E (VitE), metilparabeno (MP) y propilparabeno (PP) y de muestras de cremas enriquecidas con los analitos. Vit A
10,00 15,00 20,00 25,00 30,00

VitE
50,00 100,00 200,00 300,00 400,00

MP
10,00 20,00 30,00 40,00 50,00

PP
2,50 5,00 7,50 10,00 15,00

La exactitud del mtodo se estim realizando un estudio de recuperacin. Para ello, se evaluaron por el procedimiento descrito un blanco y muestras de cremas dermocosmtica enriquecidas con los analitos a los niveles de

69

concentracin antes mencionados. Posteriormente, se compararon las reas de los picos de los analitos obtenidas para las muestras de crema enriquecidas con las reas obtenidas del patrn correspondiente teniendo en cuenta el factor enriquecimiento. Para evaluar el efecto de la matriz en el anlisis, se realizaron curvas de calibracin y de adicin de estndar de los analitos en metanol y en muestras de cremas sometidas al tratamiento descrito previamente. Los intervalos de concentracin estudiados para los analitos estuvieron: VitA entre 10,00 y 30,00 g/mL, VitE entre 50,00 y 400,00 g/mL, MP entre 10,00 y 50,00 g/mL y PP entre 2,50 y 15,00 g/mL, con un volumen de inyeccin de 0,010 mL. Cada curva de calibrado incluy al menos una serie de cinco puntos y un blanco, y se midieron un mnimo tres veces cada uno.

12.3. 7.

E valuacin

de

las

nanoemulsiones

como

sistemas homogneos
Segn la literatura las nanoemulsiones son sistemas dispersos, pero debido a la presencia de dimetro de gota tan pequeo (< 0,5 m) y a la uniforme distribucin, pudieran llegar a comportarse como sistemas homogneos, es decir, una sola fase. Para verificar lo anteriormente dicho, se evaluaron 12 muestras de una misma nanoemulsin dermocosmtica por triplicado, y as observar la dispersin de cada uno de los componentes.

12.3.8.

Homogeneidad de la c rema dermo cosmtica

Para demostrar la homogeneidad de la crema dermocosmtica tambin se determinaron todos los analitos en 12 muestras de una misma formulacin, las muestras se tomaron de forma aleatoria por cuarteo y rodado, y se analizaron por triplicado.

12.3.9.

Rep roducib ilidad de la fo rmulacin

La reproducibilidad del procedimiento de formulacin de la crema es muy importante, debido a que representa la certeza de obtener siempre el mismo 70

resultado, bajo las condiciones preestablecidas. Para demostrar la homogeneidad de la crema dermocosmtica tambin se determinaron todos los analitos en 7 lotes de 100 g dividiendo cada lote en 4 porciones de 25 g y de cada uno se tomaron 3 muestras en forma aleatoria por cuarteo y rodado, adems cada una sintetizada en das diferentes. En conclusin se muestrearon un total de 28 muestras que se analizaron por triplicado.

71

13.

RESU LTADOS Y DISCUSI N 13.1. DET ERMINACI N DE NDICES PARA E L CONTROL

DE CALIDAD DE L ACE IT E DE MA Z
Se llev a cabo la determinacin de los ndices de acidez, yodo y perxido con la finalidad de evaluar el aceite de maz debido a que las condiciones de almacenamiento, temperatura, naturaleza del aceite y hasta pequeas cantidades de agua influyen en el proceso de enranciamiento(194). ndice de acidez que expresa en miligramos la cantidad de hidrxido de sodio necesario para neutralizar los cidos libres presentes en 1 g de sustancias, estos cidos pueden crear incompatibilidades y ser causa de irritaciones en la piel. ndice de yodo es el nmero de gramos de yodo que en determinadas condiciones puede fijarse en 100 g de aceite y da una idea de la cantidad de cidos no saturados y, por ende, la posibilidad de enranciamiento. ndice de perxidos es la cifra que expresa, en miliequivalentes de oxigeno activo, la cantidad de perxido contenida en 1000 g de sustancia(22). Un producto de bajo ndice de perxidos resiste mejor su deterioro. Los resultados que se encuentran en la tabla 11, demuestran que el aceite estuvo en buenas condiciones para la realizacin de la formulacin durante el estudio, es decir, no present deterioro en cuanto a enranciamiento y cambio en su aspecto (en intervalo de 12 meses). Tabla 11. Resultados de los ndices del aceite de maz durante el tiempo que se realiz estudios de formulacin. INDICES
Acidez Iodo Perxidos Aspecto

06/12/02
0,22 112,10 1,00

Resultados* 06/11/03
0,31 117,50 3,39

06/02/04
0,38 120,05 5,00

Lmites USP
0,5 102 -130 10,0

Lquido oleoso, claro de color amarillo con olor y sabor caracterstico

*(n=3), United Stated Pharmacopoeia segn lo reportado en el Handbook of excipients of pharmacy

72

13.2. ESTUDI O DE LA FORMU LACI N PT IMA PARA LOS SIST EMAS: ME ZCLA DE SURFACTANTE NO I N ICO /AG UA/ACE IT E
Este estudio se realiz con la finalidad de caracterizar los sistemas: mezcla de surfactante no inico/agua/aceite tanto para el aceite de maz como para la parafina y as observar el comportamiento fsico en los diferentes barridos unidimensionales a una relacin agua/aceite de 1 (5/5) y 2,33 (7/3); esta ltima se realiz debido a que la formulacin dermocosmtica se encuentra alrededor de sta relacin. El comportamiento fsico viene dado por un sistema Winsor I donde se presenta una fase acuosa micelar y una fase oleosa en exceso, es decir, 2; Winsor II, fase oleosa micelar y la fase acuosa en exceso, 2; Winsor III, sistema correspondiente a una solucin micelar con fase acuosa y oleosa en exceso, 3; y un sistema de cuatro fases 4 propia de estructuras rgidas tal como geles o cristales lquidos, solucin micelar con fase acuosa y oleosa en exceso. Se conoce por formulacin ptima al sistema trifsico que presenta una alta e igual solubilidad tanto para el agua como para el aceite en la microemulsin(14), de tensin interfacial y viscosidad baja. En los barridos de aceite de maz a 25 C no se observ ningn cambio de transicin en el intervalo de HLB comprendido entre 8,60 y 15,00 para todos los casos (ver tablas 12, 13, 14 y 15); observndose que a temperatura ambiente el surfactante tiene preferencia por la fase acuosa (2); caso contrario a 50 C que presentan cuatro fases tal como se observa en la figura 20, notndose que para estos sistemas, la formulacin ptima present un valor de HLB de 11,16 (ver tablas 12, 13, 14 y 15) con presencia de cristales lquidos, lo que garantizara obtener emulsiones del tipo O/W de baja polidispersidad y tamao de gota pequeo(94,152,153,154). Como puede observarse en las tablas 12 y 14 la adicin de NaCl 10 % al sistema, se observ ms tubos con trifsicos, adems hubo un incremento de la zona trifsica (mayor volumen) debido a la saturacin de la fase acuosa, lo que permite ver con mayor claridad el HLB ptimo. Por otro lado la relacin agua/aceite para estos sistemas no present ninguna diferencia, se obtuvieron los mismo resultados.

73

Tabla 12. Barrido de Aceite de Maz al 5 % de NaCl, WOR=1 (5/5).

HLB 8,60 8,98 9,08 10,52 11,00 11,16 11,32 12,92 15,00 Sp 20 (mL ) 2,5 2,1 2,0 0,5 Tw8 5 (mL ) 0,4 0,5 2,0 2,5 2,4 2,3 1,2 Tw8 0 (mL ) 0,1 0,2 1,3 2,5 N a Cl 10% (mL ) 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 Agua (mL ) 2,5 2,1 2,0 0,5 Maz (mL ) 2,5 2,9 3,0 4,5 5 5 5 5 5 F as e s 25 C 2 2 2 2 2 2 2 2 2 F as e s 50 C 2 2 3 4 4 4 4 2 2

HLB ptimo

Tabla 13. Barrido de Aceite de Maz sin NaCl, WOR=1 (5/5).

HLB 8,60 8,98 9,08 10,52 11,00 11,16

Sp 20 (mL ) 2,5 2,1 2,0 0,5 -

T w 85 (mL ) 0,4 0,5 2,0 2,5 2,4 2,3 1,2 -

T w 80 (mL ) 0,1 0,2 1,3 2,5

Agua (mL ) 5,0 4,6 4,5 3,0 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5

Maz (mL ) 2,5 2,9 3,0 4,5 5 5 5 5 5

F as es 25 C 2 2 2 2 2 2 2 2 2

F as es 50 C 2 2 2 2 4 4 4 2 Repartid

11,32 12,92 15,00

HLB ptimo

74

Om

O M

O M CL W

O M CL W

O M CL W

O M CL W

O M W

Wm

HLB 8,60

HLB 8,98

HLB 9,08

HLB 10,52

HLB 11,00

HLB 11,16

HLB 11,32

HLB 11,64

HLB 12,92

HLB 15,00

HLB ptimo

Figura 20. Comportamiento de fase del sistema Tw-Sp/(solucin acuosa 10 % NaCl)/aceite de maz, S=1%; WOR=1 (5/5); Temp.=50C. Donde: W O simboliza una fase acuosa. simboliza una fase oleosa.

Wm simboliza una fase acuosa por la cual pasa el lser. Om simboliza una fase oleosa por la cual pasa el lser. CL simboliza una fase birrefringente: Cristal lquido. M simboliza una fase surfactante: microemulsin bicontnua. Tabla 14. Barrido de Aceite de Maz al 5 % NaCl, WOR=2,33 (7/3).
HLB 8,60 8,98 9,08 10,52 11,00 11,16

Sp 20 (mL ) 2,5 2,1 2,0 0,5 -

Tw 85 (mL ) 0,4 0,5 2,0 2,5 2,4 2,3 1,2 -

Tw 80 (mL ) 0,1 0,2 1,3 2,5

N a Cl 10% (mL ) 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5

Agua (mL ) 3,5 3,1 3,0 1,5 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0

Maz (mL ) 0,5 0,9 1,0 2,5 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0

F as es 25 C 2 2 2 2 2 2 2 2 2

F as es 50 C 2 2 3 4 4 4 4 2 2

11,32 12,92 15,00

HLB ptimo

75

Tabla 15. Barrido de Aceite de Maz sin NaCl, WOR=2,33 (7/3).

HLB 8,60 8,98 9,08 10,52 11,00 11,16

Sp20 (mL ) 2,5 2,1 2,0 0,5 -

T w 85 (mL ) 0,4 0,5 2,0 2,5 2,4 2,3 1,2 -

T w 80 (mL ) 0,1 0,2 1,3 2,5

Agua (mL ) 7,0 6,5 5,0 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5

Maz (mL ) 0,5 0,9 1,0 2,5 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0

F as es 25 C 2 2 2 2 2 2 2 2 2

F as es 50 C 2 2 2 4 4 4 4 2 Repartido

11,32 12,92 15,00

HLB ptimo

Por lo expuesto anteriormente en los barridos de aceite de maz, se decidi reportar para los barridos de parafina slo los resultados encontrados para los sistemas con NaCl, ya que permite apreciar mejor la zona trifsica (mayor volumen) y ver con mayor claridad el HLB ptimo. El comportamiento de fase en los barridos de parafina, a diferencia de los barridos de maz, mostraron una transicin de fases 2 4 2 a temperatura de 25 C a un rango de HLB comprendido entre 7,09 y 15,00. A 50 C se observ un HLB ptimo correspondiente a 11,16, al igual que en el barrido de aceite de maz. En las tablas 16 y 17 se observ una zona trifsica comprendida entre los HLB 9,18 y 12,92, lo que permiti encontrar un HLB ptimo de 11,16 con presencia de cristales lquidos, como se puede observar en la figura 3 con carcter ilustrativo.

76

Tabla 16. Barrido de Parafina al 5 % NaCl, WOR=1 (5/5).

HLB 7,09 8,18 9,18 10,52 10,90 11,00 11,16

Sp 80 (mL ) 1,1 0,8 0,5 -

Sp 20 (mL ) 1,0 0,7 0,5 0,5 0,1 -

Tw 85 (mL ) 0,4 1,0 1,5 2,0 2,4 2,5 2,4 1,2 1,1 -

Tw 80 (mL ) 0,1 1,3 1,4 2,5

N a Cl 10% (mL ) 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5

Agua (mL ) 2,1 1,5 1,0 0,5 0,1 -

Par a f (mL ) 2,9 3,5 4,0 4,5 4,9 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0

F as e s 25 C 2 4 4 4 4 4 4 2 2 2

F as es 50 C 2 2 3 3 3 3 4 3 2 2

12,92 13,24 15,00

HLB ptimo

Tabla 17. Barrido de Parafina al 5 % NaCl, WOR=2,33 (7/3).

Sp 80
(mL )

HLB

Sp 20
(mL )

Tw 85 (mL ) 0,4 1,0 1,5 2,0 2,4 2,5 2,4 1,2 1,1 -

Tw 80 (mL ) 0,1 1,3 1,4 2,5

N a Cl 10% (mL ) 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5

Agua (mL ) 3,1 2,5 2,0 1,5 1,1 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0

Par a f (mL ) 2,9 3,5 4,0 4,5 4,9 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0

F as es 25 C 2 4 4 4 4 4 4 2 2 2

F as es 50 C 2 2 3 3 3 3 4 3 2 2

7,09 8,18 9,18 10,52 10,90 11,00 11,16 12,92 13,24 15,00

1,1 0,8 0,5 -

1,0 0,7 0,5 0,5 0,1 -

HLB ptimo

77

Om

O M W

O M W

O M W

O M W

O M CL W

O M W

Wm

HLB 7,09

HLB 8,18

HLB 9,18

HLB 10,52

HLB 10,90

HLB 11,00

HLB 11,16

HLB 12,92

HLB 13,24

HLB 15,00

HLB ptimo

Figura 21. Comportamiento de fase del sistema Tw-Sp/(solucin acuosa 5% NaCl)/parafina, S=1%; WOR=1 (5/5); Temp.=50C.

13.3 . OPT IMI ZACI N

DE

LOS

PARMETROS

DE L

PROTOCO LO DE EM U LSI ONACI N

Con la finalidad de optimizar el protocolo de emulsionacin se estudiaron: HLB para la emulsionacin base, velocidad de agitacin (r.p.m.), velocidad de adicin del agua a la fase oleosa (mL/min), temperatura, tipo de turbina y tiempo de mezclado. Estos resultados se resumen en la tabla 18. Tabla 18. Parmetros optimizados en el protocolo de emulsionacin de la nanoemulsin y de la crema dermocosmtica.
PARMETROS
HLB de emulsionacin Velocidad de agitacin (r.p.m.) Velocidad de adicin del agua (mL/min) Temperatura (C) Tipo de Turbina Orden de adicin Tiempo de mezclado (min)

NA NO E MU LSI N
11,31 350 3 65 Hlice de 4 aspa 45 Agua sobre la fase oleosa 30

CRE MA
11,31 250 25 Ancla Nanoemulsin sobre el gel 60

78

HLB para la emulsin base, para este estudio se tom en cuenta el

comportamiento de fase de los sistemas a 25 y 50 C. El anlisis se realiz a valores de HLB superiores a 11,16 con la finalidad de obtener sistemas O/W, y as trabajar con tensiones interfaciales bajas a 65 C. Se llevo a cabo la formulacin de diferentes emulsiones, cuyo intervalo de HLB estudiado fue de 11,20 11,31, utilizando mezclas de los surfactantes no inicos Sp60/Tw80, (mezcla obtenida del estudio correspondiente a la seccin 8.4), observndose el mejor resultado en la tabla 19. Tabla 19. Emulsiones bases obtenidas a partir de los sistemas Sp60Tw80/agua/aceite de maz-parafina presentes en el estudio de optimizacin.
S u r f.
Sp60/ Tw80 Sp60/ Tw80 Sp60/ Tw80 Sp60/ Tw80 Sp60/ Tw80 Sp60/ Tw80 Sp60 / Tw80 Sp60/ Tw80

Sur f. %
8 8 8 8 8 8 8 8

HLB
11,20 11,20 11,20 11,30 11,30 11,31 11,31 11,31

Agu a%
80,00 80,00 80,00 80,00 80,00 80,00 80,00 80,00

Aceites (M:P) %
2,0:10,0 2,0:10,0 2,0:10,0 2,0:10,0 2,0:10,0 2,0:10,0 2,0:10,0 2,0:10,0

(rp m ) 250 350 450 250 350 250 350 450

VA

Dg
(m) ---1 (Bm) 1 (Bm) > 20 0,12 (Um) 0,12 (Um)

E s tabilida d
Coalesce Coalesce Coalesce, espuma Estable Estable Coalesce Estable Estable, Espuma

Aparienc ia
Blancaamarilla Blancaamarilla Blancaamarilla Blancaazulada Blancaazulada Blancaamarilla Transp. azulada Blanca. azulada

n = 3, = mejor resultado, Bm= bimodal, Um= unimodal

Velocidad de agitacin, son las revoluciones por minuto que va ha permitir

una buena incorporacin y distribucin de la fase interna en la fase continua. Mediante un estudio de velocidad se usaron 3 revoluciones distintas menores a 800 r.p.m. debido a que se trabaj cerca de la formulacin ptima y en esta zona se presentan viscosidades muy bajas, para lo cual, una agitacin muy rpida incorporara aire al sistema. La presencia de espuma en el sistema produce 79

interferencia sobre la medida del dimetro de gota, viscosidad y densidad. Las velocidades estudiadas fueron 250, 350 y 450 r.p.m. (ver tabla 19), observndose que a 250 r.p.m no se formaban las emulsiones, la velocidad suministrada para agitar el cristal lquido que se forma en la primera etapa de la formulacin era insuficiente. Por otra parte a 450 r.p.m. se present formacin de espuma, mientras que 350 r.p.m. result ser la velocidad ideal debido a que permite lograr la nanoemulsin con baja espuma. Del mismo modo, se estableci la velocidad de mezclado en la incorporacin de la nanoemulsin en el gel, se ensayaron 2 velocidades 250 y 350 r.p.m., a esta ltima se observ incorporacin de aire, caso contrario a 250 r.p.m. se obtiene un buen mezclado, sin aire.

Velocidad de adicin del agua a la fase oleosa, es el volumen de agua

agregado a la fase oleosa por minuto, capaz de formar la emulsin. Es de suma importancia ya que se observ que al variar el caudal se obtenan diferentes tamaos de gotas. Se estudiaron 3 caudales: 0,75; 3 y 6 mL por minuto. Adems se empleo el mtodo utilizado por Fernndez(80) (adicin de la fase acuosa sobre la fase oleosa durante un minuto bajo agitacin). Los resultados obtenidos fueron: a una velocidad de 0,75 mL/min se obtuvo la nanoemulsin al igual que adicionando 3 mL/min, mientras que a 6 mL/min se forma una emulsin de tamao de gota grande 20 m y polidisperso, al cabo de media hora coalesce. Con el mtodo empleado por Fernndez se form la nanoemulsin pero presentaba una distribucin bimodal en el tamao de gota. Por lo que se trabaj a un caudal de 3 mL/min para la obtencin de la nanoemulsin debido a que es el tiempo de formulacin ms corto.

Temperatura, a travs de los barridos unidimensionales se estableci un las propiedades hidroflicas de los surfactantes no inicos son

rango de temperatura de 50 80 C, debido a que a temperatura mayores de 50 modificadas(57,191); la hidrofilicidad decrece a medida que la temperatura incrementa. Se observ que por debajo de 50 C no se forma la emulsin y por encima de 80 C se presenta una prdida significativa de agua por efecto de la evaporacin; por lo tanto se trabajo a 65 C la fase oleosa y 70 C el bao Mara,

80

lo que garantiz una temperatura constante durante la formacin de la nanoemulsin. Tambin se a realiz un estudio colocando un bao de hielo (12 C) al finalizar la emulsionacin, para llevar a temperatura ambiente, de forma ms rpida pero este ensayo no result satisfactorio porque la emulsin coalescia, debido al cambio tan brusco de temperatura.

Tipo de turbina, se eligi una turbina de hlice con 4 aspas con ngulos de

45 con la finalidad de mezclar e incorporar los componentes de la nanoemulsin sin producir cizallamiento de la gota. Por otro lado para mezclar la nanoemulsin con el gel se empleo una turbina tipo ancla, para obtener una buena homogenizacin del lote.

Orden de adicin, este parmetro es determinante en el momento de

formular, debido a que aqu el orden de los factores si afecta el producto, es decir, la incorporacin de la fase acuosa y oleosa para la formacin de la nanoemulsin, y el momento en que se incorpora el gel para la formacin de la crema. El mejor resultado obtenido fue adicionar el agua a la fase oleosa; y ya formada la nanoemulsin dermocosmtica, sta es vertida sobre el gel en forma continua y bajo agitacin.

Tiempo de mezclado, se realiz un estudio para optimizar el tiempo de

mezclado en el procedimiento de la formulacin. Para ello se evaluaron los diferentes analitos que se encuentran presentes en la crema dermocosmtica en tres lotes elaborados a diferentes tiempos de mezclado (15 a 60 minutos). Cada muestra se analiz por triplicado. Los resultados se exponen en la grfica (figura 22). Al graficar el tiempo de mezclado en funcin del porcentaje de analito presente en 100 g de muestra, se observ que estos presentan menor dispersin, a medida que aumenta el tiempo de mezclado. Por lo que se considera un tiempo de 60 minutos el ms apto para llevar a cabo la mejor homogeneizacin de la muestra (crema). De esta manera se puede comprobar que estos sistemas son homogneos, ya que presentan tamaos de gota pequeos que la hacen ver como una nica fase.

81

104 102 100 98 96 94 92 90 88 86 0 10 20 30 40 50 60 70

% Analitos en Crema

MP PP VitA VitE

Tiempo de Mezclado (min)

Figura 22. Estudio de homogeneidad de la crema dermocosmtica. Por otro lado se llev a cabo un estudio estadstico donde se realiz un Anlisis de Varianza (ANDEVA) para cada analito, para as optimizar el tiempo de mezclado, a continuacin se expone la siguiente prueba de hiptesis, la cual se estableci para cada uno de los analitos de la crema. Los resultados obtenidos para este estudio se muestran en la tabla 20. A.- Hiptesis: Ho= 15 = 30 = 60 H1 = al menos una de las xj es diferente La hiptesis nula presume que el % de MP, PP, VitA VitE bien sea su caso en la crema es la misma para todos los tiempos de mezclado. B.- Nivel de aceptacin de Ho= 1- = 0,95 C.- Estadstico de prueba: Fo = CMEG/CMDG (11) D.- Procesamiento de datos para calcular las sumas de cuadrado, los cuadrados medios y el valor de F para cada analito en estudio, se encuentran en las tablas 21, 23, 25 y 27.

Tabla 20. Porcentajes de analitos en crema dermocosmtica en distintos tiempos de mezclado.

82

T m ( m in)
15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60

MP
103,97 96,25 94,32 93,02 101,91 86,39 97,81 98,52 95,26 92,65 92,86 98,96 99,38 97,35 96,96 96,58 96,52 95,55 98,54 99,49 99,89 99,27 99,87 99,82 101,53 100,97 102,03 100,90 101,48 103,63 102,33 100,64 102,73 101,42 100,53 102,18

% ANALITOS EN CREMA PP Vit A

97,83 96,12 94,65 93,88 102,05 83,73 92,21 93,62 87,52 85,70 87,01 90,94 103,31 101,20 100,98 100,95 98,23 98,66 100,37 101,58 102,63 101,58 103,79 105,89 100,64 99,86 102,12 100,73 102,32 102,13 103,36 101,19 103,53 102,50 98,09 101,50 103,29 93,07 92,48 92,02 99,89 79,50 102,12 102,51 99,79 97,70 98,54 103,26 100,54 99,44 97,46 98,53 98,09 97,21 100,30 99,89 101,68 97,04 99,98 99,61 104,21 100,88 104,38 101,86 103,71 104,09 101,52 102,38 102,13 103,10 102,64 103,55

VitE
87,82 82,05 81,39 80,62 86,28 67,71 91,89 92,41 89,68 89,00 90,91 95,10 103,42 102,38 101,29 101,96 101,22 98,68 103,65 103,30 103,87 93,26 100,38 102,66 100,73 93,09 102,62 99,52 101,62 99,32 101,48 101,43 95,97 101,23 100,51 100,22

E.- Resumen de Anlisis de Varianza (ANDEVA). Tablas 22, 24, 26 y 28. F.- Zona de aceptacin (ZA) para la hiptesis de igualdad de las varianzas:

83

ZA:{F/F<f[0,95;2/33]}={F/F<3,3} Tabla 21. Clculos necesarios para el ANDEVA del MP.

Tm (m in)
Media Varianza Desv, Estndar Xij Xij
2 2

15
95,99 22,05 4,70 1151,92 110819,22 110576,641

30
98,27 2,48 1,57 1179,22 115907,24 115879,984

60
101,70 0,85 0,92 1220,36 124116,49 124107,154

Gran Tota l
---3551,50 350842,96 350563,779

( Xij) /n

Tabla 22. ANDEVA del MP.

Fuente d e v a r i a c i n
Entre grupos Dentro de grupos Total

Su m a d e cu adr a d os
197,85 279,18 477,03

Grad os d e lib erta d

2 33 35

Cua dr a dos m e d i os
98,93 8,46

Fo
11,69

Tabla 23. Clculos necesarios para el ANDEVA del PP.

Tm (m in)
Media Varianza Desv, Estndar Xij Xij
2 2

15
92,11 29,02 5,39 1105,26 102119,21 101799,97

30
101,60 4,51 2,12 1219,17 123914,29 123864,62

60
101,50 2,34 1,53 1217,97 123646,69 123620,91

Gran Tota l
---3542,40 349680,19 349285,51

( Xij) /n

Tabla 24. ANDEVA del PP.

Fuente d e v a r i a c i n
Entre grupos Dentro de grupos Total

Su m a d e cu adr a d os
713,35 394,68 1108,03

Grad os d e lib erta d

2 33 35

Cua dr a dos m e d i os
356,67 11,96

Fo
29,82

84

Tabla 25. Clculos necesarios para el ANDEVA de VitA.

Tm (m in)
Media Varianza Desv. Estndar Xij Xij
2 2

15
97,01 47,38 6,88 1164,17 113462,23 112940,98

30
99,15 2,16 1,47 1189,77 117986,49 117962,72

60
102,87 1,30 1,14 1234,45 127003,33 126988,90

Gran Tota l
---3588,39 358452,05 357892,60

( Xij) /n

Tabla 26. ANDEVA de VitA.

Fuente d e v a r i a c i n
Entre grupos Dentro de grupos Total

Su m a d e cu adr a d os
210,86 559,44 770,30

Grad os d e lib erta d

2 33 35

Cua dr a dos m e d i os
105,43 16,95

Fo
6,22

Tabla 27. Clculos necesarios para el ANDEVA de VitE.

Tm (m in)
Media Varianza Desv. Estndar Xij Xij
2 2

15
86,24 55,30 7,43 1034,86 89852,87 89244,60

30
101,34 8,76 2,96 1216,07 123331,93 123235,52

60
99,81 7,30 2,70 1197,74 119628,76 119548,43

Gran Tota l

3448,67 332813,57 332028,55

( Xij) /n

Tabla 28. ANDEVA de VitE.

Fuente d e v a r i a c i n
Entre grupos Dentro de grupos Total

Su m a d e cu adr a d os
1658,42 785,02 2443,44

Grad os d e lib erta d

2 33 35

Cua dr a dos m e d i os
829,21 23,79

Fo
34,86

G.- Decisin: Como el valor del estadstico de prueba Fo para todos los analitos es mayor que el lmite crtico (f=3,3), se rechaza Ho, por lo tanto se acepta la

85

hiptesis alternativa, que propone que al menos una de las muestras proviene de una poblacin de valores con una media diferente. H.- Conclusin: La distribucin uniforme del MP, PP, VitA y VitE en la crema presenta un valor distinto en al menos uno de los tiempos de mezclado ensayado. El tiempo correspondiente a 60 minutos es el perodo ms apto para encontrar la mayor homogeneidad de los analitos en la matriz, por presentar una varianza y una desviacin estndar baja con respecto a las obtenidas con los otros tiempos de mezclado.

13.4. ESTUDI O MA Z/PARAFINA

DE

LA

RE LACI N

DE

ACE IT E

DE

Este estudio se realiz con la finalidad de demostrar la influencia de la relacin maz/parafina sobre el tamao de gota a un HLB de 11,31. Se pudo observar que a mayor porcentaje de aceite de maz (2 - 100%) el sistema presentaba un incremento en el dimetro de gota hacindola ms inestable, esto puede deberse a la complejidad de la molcula, ya que se trata de un triglicrido. Esta inestabilidad se puede controlar aumentando el porcentaje de surfactante a medida que se va incrementando el porcentaje de aceite de maz en la formulacin; en cosmticos se utilizan generalmente porcentajes superiores al 15 %. La nanoemulsin se logr obtener con slo un 8% de la mezcla de los surfactantes no inicos. Por otro lado (ver seccin 8.7.1), se encontr que a mayor cantidad de parafina y menor cantidad de aceite de maz se alcanzaban dimetros de gota pequeos presentando una estabilidad aceptable, es por esta razn que se plante trabajar a una relacin 2/10 (maz/parafina) debido a que se logr obtener una relacin idnea dando un tamao de gota menor a 500 nm. Como se puede observar en la tabla 19 el sistema Sp60-Tw80/agua/aceite de maz-parafina a un HLB 11,31 present la emulsin ms estable con respecto a las otras emulsiones.

86

13.5. ESTUDI O DE L TAMAO DE G OTA DE LA EMU LSI N BASE CON R ESPECTO A LA ME ZCLA Y T IP O DE SURFACTANTES NO I N ICOS
Este ensayo se realiz con el propsito de demostrar la influencia de la estructura molecular de dos surfactantes no inicos presentes en diferentes mezclas con respecto al tamao de gota a un HLB de 11,31. Los resultados que se encuentran en la tabla 29 muestran que el sistema Span 60/Tween 80 produce nanoemulsiones de tamao ms pequeo. Esto podra explicarse debido a la presencia de dobles enlaces en la estructura de uno de los surfactantes no inico de la mezcla, lo que permite obtener un mejor resultado (menor dimetro de gota con apariencia traslcida), que con mezclas de surfactantes completamente saturados(191). Por esta razn la mezcla Span 60/Tween 80 fue la que se emple para la formulacin de la nanoemulsin base. El sistema Tween 85/Tween 80 se descart debido a que no se obtuvo nanoemulsin. Tabla 29. Variacin del tamao de gota con respecto a las diferentes mezclas de surfactantes no inicos a un mismo HLB.
SURFACTA NTE S
Sp60/Tw80 Sp20/Tw60 Sp60/Tw 60 Tw85/Tw80
(a)

Sp:Tw (a)
35,80:64,20 42,40:57,60 35,25:64,75 92,25:7,75
(c)

H L B (b)
11,31 11,31 11,31 11,31

TAMAO D E GOTA ( m)/ 65 C (C)

0,10 0,74 1,21 -(b)

Sp/Tw= es la relacin de porcentaje en masa de Span y Tween.

Valores de HLB que fueron

calculados por la ecuacin (1).

Temperatura de emulsificacin. *Fase lquida con birrefringencia.

13.6. E LABORACI N DE LA NANOE MULSI N Y DE LA CREMA

Para la obtencin de la nanoemulsin y de la crema dermocosmtica propuesta para este estudio se cont con una serie de ingredientes cosmticos apropiados (ver tabla 30) que fueron mezclados y formulados bajo una optimizacin previa de los parmetros de emulsionacin.

87

Tabla 30. Composicin porcentual de los ingredientes empleados en la formulacin de la nanoemulsin y de la crema dermocosmtica.
INGRE DI E NT ES NA NO E MU LSI N (g)
1,00 0,10 3,13 5,61 2,00 10,00 0,15 0,05 10,00 --100,00

CRE MA (g)
1,00 0,10 3,13 5,61 2,00 10,00 0,15 0,05 10,00 0,38 0,20 100,00

Vitamina E
Vitamina A Span 60 Tween 80 Aceite de maz Parafina Metilparabeno Propilparabeno Propilenglicol Carbopol 940 Trietanolamina Agua destilada c.s.p.
c.s.p. = cantidad suficiente para

13.7. ESTUDI O 13.7.1.

DE

LAS

PROP I EDADES

DE

LA

NANOEMU LSI N Y LA CR EMA DERMOCOSMT ICA Tamao de go ta

Considerando que el tamao de gota es un parmetro determinante que favorece al pasaje transdrmico de los principios activos en la piel, se decidi conocer el dimetro de la fase interna en las emulsiones y as poder elegir la emulsin base; estas fueron medidas con el difractmetro Beckman coulter; se consider para el anlisis el dimetro medio de Sauter D[3,2], definido como el dimetro de la esfera que posee la misma rea especfica que la poblacin, es decir, la relacin superficie a volumen del sistema. Se encontr que el D[3,2] varia favorablemente (menor dimetro) al incrementar la cantidad de parafina en la relacin maz/parafina para la formulacin de las emulsiones base; como se muestra en la figura 23. En las figuras 24, 25, 26, 27 y 28 se observan las distribuciones de tamaos de gotas correspondientes a las emulsiones E1, E2, E3, E4 y E5.

88

En las emulsiones E1, el tamao result ser grande con respecto al dimetro de gota fijado (< 0,500 m), se pudo apreciar una distribucin bimodal, en la que un primer modo representa las partculas desagregadas y el segundo modo constituye las partculas aglomeradas. En las emulsiones E2 y E3 se obtuvo una distribucin de tres modas, presentando un D[3,2] pequeo (< 0,500 m), sin embargo estas presentaron inestabilidad debido, probablemente, a la maduracin de Ostwald. Por otra parte, para las nanoemulsiones E4 y E5 se observ un tamao de gota pequeo de 0,123 y 0,121 m, con una distribucin monodispersa, hacindola muy estable cinticamente. Debido a que se trabaj con una mezcla de cidos grasos presentes en el aceite de maz se observ un incremento del tamao de gota lo que es proporcional a la inestabilidad, caso contrario para los sistemas E4 y E5 que contenan mayor cantidad de parafina (cadena hidrocarbonada lineal) las cuales mostraron menor tamao de gota y mayor estabilidad.

Figura 23. Dimetro de gota de emulsiones base (Sp60-Tw80/agua/aceite de maz-parafina).

89

Figura 24. Histograma de la emulsin E1.

Figura 25. Histograma de la emulsin E2.

90

Figura 26. Histograma de la emulsin E3.

Figura 27. Histograma de la emulsin E4.

91

Figura 28. Histograma de la emulsin E5.

13.7.2.

E stab ilidad

Se realiz un estudio el cual consisti en preparar una serie de emulsiones tal como se indica en la tabla 31 en tres das diferentes, para observar cual de ellas presentaba mayor estabilidad y menor tamao (< 500 nm). Dentro de este estudio las E4 y E5 se obtienen al primer momento (de 0,5 mL hasta 12 mL) de la incorporacin del agua a la mezcla de aceites y surfactante una emulsin de tipo W/O, pasando luego a estructuras laminares (cristales lquidos, geles) y finalmente se obtienen emulsiones del tipo O/W cuando se le adiciona el total del agua al sistema bajo las condiciones de temperatura y velocidad optimizadas; lo que asegura un tamao de gota pequeo, por lo tanto mayor estabilidad segn Sagitani y Suzuki(94,152,153,154). En las figuras 29 y 30 se representan las curvas de estabilidad de las emulsiones O/W donde Vclarificado es el volumen de fase clarificada y Vtotal del sistema es el volumen total del sistema emulsionado en funcin del tiempo. Durante el tiempo de estudio, las emulsiones O/W (E1, E2, E3) obtenidas (sistema Sp60-Tw80/agua/aceite de maz-parafina), se desestabilizaron por el mecanismo de sedimentacin inversa, tambin conocido como cremado.

92

Tabla 31. Relacin aceite maz/parafina en sistemas Sp60-Tw80/agua/aceite de maz-parafina emulsionados.

E m u lsion es Span 6 0 / Tw8 0 (%)
8 8 8 8 8

Ma z (%)
12 6 5 2 0

P ar a fin a (%)
0 6 7 10 12

Agua D esti l a d a (%)

80 80 80 80 80

E1 E2 E3 E4 E5

La curva de Vclarificado/Vtotal del sistema en funcin del tiempo para los sistemas Sp 60-Tw 80/agua/aceite de maz-parafina (E4 y E5), S=8%; WOR= 4 (8/2); HLB= 11,31, Tfinal= 25 y 45C no se han reportado debido a que experimentalmente fue imposible visualizar la separacin de las fases, debido a que se tratan de nanoemulsiones, slo despus del 5to mes en la estufa se present una ligera turbidez en el tubo, signo de inestabilidad.

Vclarificado/Vtotal del sistema

9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 Tiempo (horas)
E1 D[3,2] = 1,782 !m E2 D[3,2] = 0,322 !m E3 D[3,2] = 0,289 !m E4 D[3,2] = 0,123 !m E5 D[3,2] = 0,121 !m

Figura 29. Estabilidad de los sistemas E1, E2, E3, E4 y E5. S=8%; WOR=4 (8/2), HLB= 11,31. Tfinal = 45 C. Tipo de emulsin: O/W. n = 3.

93

Vclarificado/Vtotal del sistema

9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 Tiempo (horas)
E1 D[3,2] = 1,782 !m E2 D[3,2] = 0,322 !m E3 D[3,2] = 0,289 !m E4 D[3,2] = 0,123 !m E5 D[3,2] = 0,121 !m

Figura 30. Estabilidad de los sistemas E1, E2, E3, E4 y E5. S=8%; WOR=4 (8/2); HLB= 11,31. Tfinal = 25 C. Tipo de emulsin: O/W. n = 3. El estudio de estabilidad muestra que las emulsiones fase externa agua (O/W) obtenidas aumentan su estabilidad al aumentar la viscosidad de la fase continua. Esto confirma que el comportamiento expuesto por la Ley de Stokes (de la cual se deduce que al aumentar la viscosidad de la fase externa, se producir un aumento de la estabilidad del sistema, si el tamao de las gotas es constante). Sin embargo, formular cerca del HLB ptimo da como resultado viscosidades bajas y tamao de gotas pequeas con una distribucin de gota monodisperso. En los mtodos fisicoqumicos, los pequeos valores de tensin interfacial son mucho ms determinantes sobre el tamao de las gotas de la emulsin obtenida, que la relacin de viscosidades entre la fase continua y dispersa. No obstante, en las emulsiones O/W obtenidas con altos porcentajes de aceite de maz se observ mayor tamao de gota de la fase interna, mayor viscosidad de la fase externa y una menor estabilidad. Paralelo a este estudio se realiz la estabilidad a la nanoemulsin y a las cremas tanto en estufa (45 C) como en nevera (8 C) para observar su comportamiento a diferentes temperaturas, como resultado no se present

94

separacin de fases en el transcurso de 5 meses ni cambios en su apariencia (color, viscosidad).

13.7. 3 .

Visco sidad

Es importante establecer una viscosidad que caracterice el producto final, debido a que su consistencia va a trascender a travs del tiempo en la mente del consumidor, de all su importancia. En el estudio realizado para fijar un rango de viscosidad, se obtuvo como resultado para la nanoemulsin valores entre 4 y 6 cps y para la crema 650 750 cps.

13.7.4.

pH

El intervalo de pH es de 4,5 6,5, debido al pH de la piel, es por esta razn que se encontr una media de la poblacin de pH para la nanoemulsin de 5,5 y para la crema 5,7 (sin diluir) y 5,6 (diluida 1:9). Adems la nanoemulsin present una densidad de 1,09 g/mL y para la crema 1,07 g/mL

13.8. DET ERMINACI N PRESENTE EN LA CR EMA 13.8.1.

Q U M ICA

DE

LOS

ANALIT OS

Separacin en la co lumna analti c a

Es importante sealar que adems de la vitamina A (VitA) y la vitamina E (VitE), tanto la nanoemulsin como la crema contiene agentes conservadores tales como metilparabeno (MP) y propilparabeno (PP), los cuales deben ser tomados en cuenta al momento de optimizar los parmetros involucrados para la separacin de estos en la columna analtica. Para la determinacin de las vitaminas liposolubles se han utilizado columnas en fase normal y en fase reversa(195). Sin embargo, los parabenos por ser polares, han sido estudiados en mayor escala en columnas de fase reversa ya que, en las columnas en fase normal son fuertemente retenidos, originando tiempos de anlisis muy largos. Por esta razn y segn estudios realizados por Kollmorgen and Kraut(160) donde demostr tiempos de retencin para el metil y propil parabeno menores con respecto a otras columnas en estudio. Con la 95

finalidad de obtener una buena resolucin de los analitos de inters en un tiempo de anlisis corto se trabaj con:

para

Una columna apolar del tipo C-18 Nova-pak (Waters) de 15 cm de

longitud, 3,9 mm dimetro interno (DI) y 4m de dimetro de partcula (dp), Y con cromatografa de reparto en fase reversa como la ms apropiada la determinacin de los analitos objetos de

estudio(14,57,80,94,152,153,154,190,191,192.193,194). La retencin en cromatografa de fases ligadas no polares se debe a las interacciones hidrofbicas no especficas soluto-fase estacionaria. En lo que respecta a la selectividad se basa en las interacciones especficas entre el soluto y la fase mvil, ya sea del tipo polar o de formacin de enlaces de hidrgeno(196). Por ello, una separacin con una buena resolucin y en un tiempo del anlisis corto se logra optimizando la composicin de la fase mvil, definiendo el tipo de rgimen de elucin (isocrtico o gradiente) y el flujo de circulacin de la fase mvil. En este sentido la naturaleza, la composicin y el pH de la fase mvil son las nicas variables que se pueden emplear para optimizar el factor de capacidad o retencin (k) de los analitos y la selectividad () entre ellos. Tomando en cuenta las estructuras de las vitaminas A, E y de los parabenos se pudo deducir que los valores de k de las vitaminas seran muy elevados para la fase estacionaria seleccionada, comparadas con la de los parabenos. En base a la revisin bibliogrfica realizada, para la elucin de las vitaminas liposolubles(176,177,178,179,180,181) y los parabenos(63,155,156,157,158,159,160) se requiere de solventes orgnicos. Por otro lado, el pH de la fase mvil acuosa utilizado en estudios de parabenos es ajustado a un intervalo de 2,0 5,0 para obtener la separacin ptima de los componentes, el pH con mejor resultado segn Rauha y col.(158) es 3,9, porque a pH por debajo de este los tiempos de retencin muy cortos y separacin inadecuada y a pH por encima tiempos de retencin muy largo y picos anchos, es decir, el pH de la fase mvil acuosa afecta la resolucin y el tiempo de

96

elucin(80,191). Es por ello que en el proceso de optimizacin de la separacin fueron seleccionadas fases mviles con solventes de gran poder de elucin tales como metanol y/o acetonitrilo. En este sentido para el presente estudio se ensayaron diferentes gradientes de elucin utilizando las siguientes soluciones y solventes y mezclas de los mismos en diferentes proporciones: buffer fosfato 0,01 M pH 3,5, trietilamina 0,015 M pH 3,9, metanol y acetonitrilo. Adems, con el fin disminuir el tiempo de anlisis el flujo de circulacin se vari entre 1,0 1,5 mL/min. El mejor resultado que signific un buen compromiso entre buena resolucin, eficiencia de la columna y un tiempo de anlisis corto se logr para fase A: trietilamina 0,015 M pH 3,9 5% acetonitrilo y una fase B: acetonitrilo en rgimen de gradiente de elucin el cual se muestra en la tabla 32 a un flujo de 1 mL/min. Bajo estas condiciones en la figura 31 se muestra el cromatograma obtenido para la separacin de una mezcla de VitA, VitE, MP y PP en metanol, sin embargo, es importante sealar que los parabenos y la VitA se encuentran en menor proporcin, ya que estos han sido evaluados a otras longitudes de onda, donde cada uno de ellos presenta su mxima absorcin.

Figura 31. Cromatograma obtenido bajo las condiciones optimizadas para un volumen de inyeccin de 0,010 mL de una solucin de patrones de VitA 2,00 g/mL, VitE 20,00 g/mL, MP 30,00 g/mL, PP 10,00 g/mL. =291 nm. Se puede observar que bajo las condiciones optimizadas las vitaminas liposolubles y los parabenos se separan con una resolucin mayor a 1 y en un tiempo menor a 20 minutos. 97

Tabla 32. Gradiente utilizado para la separacin de los analitos en estudio. TIEMPO ( min.)
0 2,5 5,0 20,0 23,0

% A
55 55 0 0 55

% B
45 45 100 100 45

13.8.2.

E stud ios de re cupera cin

Para poder evaluar la eficiencia de extraccin slido-lquido de los analitos bajo las condiciones optimizadas se procedi a estimar la exactitud del mtodo y se realiz un estudio de recuperacin. Para ello se inyectaron en el sistema muestras de cremas enriquecidas con los analitos (VitA, VitE, MP y PP) a diferentes niveles de concentracin. Posteriormente se compararon las reas de los picos obtenidas con aquellas del patrn de la misma concentracin. Los resultados obtenidos en la tabla 33 indican los valores de recuperacin. Tabla 33. Estudios de recuperacin en muestras de crema.
A NALITO CONC E NTRACIN (g/ m L) A adi d a
10,00 15,00 20,00 50,00 100,00 200,00 10,00 20,00 30,00 2,50 5,00 7,50

% DE R ECUP E RACI N
93,36 96,14 100,70 103,54 101,52 97,83 103,90 106,21 102,55 102,69 103,34 103,16

Vitamina A (acetato)

Vitamina E ( -tocoferol)

Metilparabeno

Propilparabeno

Estos estudios muestran valores de recuperacin para los analitos estudiados desde 93,36 % hasta 106,21%, los cuales son cuantitativos para todos

98

los casos, debido que la USP establece para los principios activos de los medicamentos un intervalo de 90,00 110,00 %.

13.8. 3 .

Valida cin del mtodo Efecto de mat riz

13.8. 3 .1.

Como se dijo anteriormente, para evaluar el efecto de la matriz en el anlisis se realizaron curvas de calibracin de soluciones patrones de los analitos en metanol y en muestras de crema tratadas segn el procedimiento descrito, utilizando el mtodo de adicin de estndar. Los intervalos de concentracin estudiados para las muestras de crema enriquecidas fueron para la VitA entre 10,00 y 30,00 g/mL, VitE entre 50,00 y 400,00 g/mL, MP entre 10,00 y 50,00 g/mL y PP entre 2,50 y 15,00 g/mL, con un volumen de inyeccin de 0,010 mL. En las figuras desde 32 a la 35 se muestran los grficos de calibracin para todos los analitos y en la tabla 34, se presentan las ecuaciones de regresin lineal del rea de pico de la VitA, VitE, MP y PP en funcin de la concentracin (g/mL).

Vitamina A
rea de pico Unidades Arbitrarias
800000 600000 400000 200000 0 0 10 20 30 40

Concentracin ( g/mL)

Figura 32. Curva de calibracin para la VitA en el intervalo de concentracin estudiado en ( ) una mezcla acetonitrilo-trietilamina 0,015 M, pH 3,9 (5:95) y en crema enriquecida con los analitos. ( )

99

rea de pico Unidades Arbitrarias

Vitamina E
2500000 2000000 1500000 1000000 500000 0 0 100 200 300 400 500

Concentracin ( g/mL)

Figura 33. Curva de calibracin para la VitE en el intervalo de concentracin estudiado en ( ) una mezcla acetonitrilo-trietilamina 0,015 M, pH 3,9 (5:95) y ( ) en crema enriquecido con los analitos.

Metilparabeno
rea de pico Unidades Arbitrarias
4000000 3000000 2000000 1000000 0 0 10 20 30 40 50 60

Concentracin (mg/mL)

Figura 34. Curva de calibracin para el MP en el intervalo de concentracin estudiado en ( ) una mezcla acetonitrilo-trietilamina 0,015 M, pH 3,9 (5:95) y ( ) en crema enriquecido con los analitos.

100

Propilparabeno
rea de pico Unidades Arbitrarias
1000000 800000 600000 400000 200000 0 0 5 10 15 20

Concentracin (mg/mL)

Figura 35. Curva de calibracin para PP en el intervalo de concentracin estudiado en ( ) una mezcla acetonitrilo-trietilamina 0,015 M, pH 3,9 (5:95) y ( ) en crema enriquecido con los analitos. Tabla 34.Caractersticas de las rectas de calibrado para la VitA, VitE, MP y PP.
A NALITO MATRIZ ECUACIN (a) r (b) INT E RVA L O DI NMICO (g/ m L)
10,0 30,0 10,0 30,0 50,0 400,0 50,0 400,0 10,0 50,0 10,0 50,0 2,5 15,0 2,5 15,0

VitA

Patrn orgnico Crema

A=11870 x C A=11028x C + 273896 A=3845,4 x C A=3871x C + 661046 A=37911x C A=40321x C + 1E+06 A=32751 x C A=33167x C + 326909

0,9970 0,9987 0,9978 0,9937 0,9977 0,9945 0,9998 0,9970

VitE

Patrn orgnico Crema

MP

Patrn orgnico Crema

PP

Patrn orgnico Crema

(a) (b)

Ecuacin de regresin lineal, A= rea de pico C= concentracin del analito Coeficiente de regresin

Se puede observar que para los cuatro analitos existe linealidad en la respuesta del detector con relacin al intervalo de concentraciones estudiado. El coeficiente de correlacin lineal fue > 0,9937 para todos los casos. Por otra parte, se aplic la prueba estadstica t para una probabilidad de un 99 % a los valores de las pendientes de las curvas de calibrado para las soluciones de patrones y la de

101

las muestras de cremas enriquecidas y los resultados indicaron que no difieren significativamente. Este comportamiento permite concluir que no existe interferencia de matriz en el anlisis y es posible evaluar el nivel de VitA, VitE, MP y PP de las muestras de crema dermocosmtica utilizando una curva de calibrado de los cuatro analitos en fase orgnica (metanol). Del mismo modo en las figuras 36, 37 y 38 se muestran los cromatogramas y los espectros UV a diferentes longitudes de onda para cada analito obtenidos en el mximo del pico que confirman su presencia.

Figura 36. Cromatogramas obtenidos bajo las condiciones optimizadas para un volumen de inyeccin de 0,010 mL de: (a) metanol, (b) una solucin patrn de VitA de concentracin 2,00 g/mL respectivamente, (c) muestra de crema con los analitos en estudio (2,00 g/mL). Tiempo de retencin: VitA 8,50 min. =325 nm.

102

Figura 37. Cromatogramas obtenidos bajo las condiciones optimizadas para un volumen de inyeccin de 0,010 mL de: (a) metanol, (b) una solucin patrn de VitE de concentracin 20,00 g/mL respectivamente, (c) muestra de crema con los analitos en estudio 20,00 g/mL. Tiempo de retencin: VitE 16,99 min. =291 nm.

103

Figura 38. Cromatogramas obtenidos bajo las condiciones optimizadas para un volumen de inyeccin de 0,010 mL de: (a) metanol, (b) una solucin patrn de MP y PP de concentracin 30,00 y 10,00 g/mL respectivamente, (c) muestra de crema con los analitos en estudio 30,00 y 10,00 g/mL. Tiempo de retencin: MP 1,57 min. y PP 2,59 min. =245 nm.

13.8. 3 .2.

P recisin del mtodo

104

La precisin del mtodo se estim por la medicin del rea del pico de los analitos de cinco rplicas de soluciones de patrones de VitA, VitE, MP y PP y de cremas enriquecidas con los analitos a diferentes niveles de concentracin en un mismo da (n=5) y en das diferentes (n=5). Los resultados se muestran en la tabla 35. Tabla 35. Estudio de la precisin del mtodo para la cuantificacin de VitA, VitE, MP y PP.
A NALITO CONC E NTRACIN (g/ m L)
10,00 15,00 20,00 10,00 15,00 20,00 50,00 100,00 200,00 50,00 100,00 200,00 10,00 20,00 30,00 10,00 20,00 30,00 2,50 5,00 7,50 2,50 5,00 7,50

D .E .R % * Dur ante un d a
0,53 0,85 1,51 0,85 1,45 0,38 0,25 0,08 0,03 0,67 0,78 0,73 0,33 0,28 1,10 0,03 0,47 0,51 1,08 0,91 0,62 0,23 0,26 0,30

D .E .R % ** Entr e d as
0,48 0,83 0,31 0,82 0,95 0,57 0,93 1,44 1,54 0,46 0,70 0,91 0,42 0,57 1,24 0,10 0,52 0,78 0,98 0,34 1,40 0,85 1,24 0,70

Estndar

Vitamina A (acetato)
Crema

Estndar

Vitamina E ( -tocoferol)
Crema

Estndar

Metilparabeno
Crema

Estndar

Propilparabeno
Crema *, ** (n=5)

Los resultados muestran una buena reproducibilidad, la desviacin estndar relativa tanto en un da como en das diferentes, fueron menores al 2 % en todos

105

los casos. Esto indica una buena precisin del mtodo utilizado as como tambin una muy buena estabilidad del sistema cromatogrfico empleado.

13.8.4. homogneos

E stud io de las nanoemulsiones c omo sistemas

Este estudio se llev a cabo analizando cada uno de los analitos en 12 muestras tomadas aleatoriamente de una misma nanoemulsin. Los resultados expresados en porcentajes de recuperacin se muestran en la tabla 36. Tabla 36. Porcentaje de recuperacin de los analitos en la nanoemulsin dermocosmtica MUESTRA
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 MEDIA DESV. ESTNDAR %CV
*(n=3)

MP (%)*
100,05 100,03 100,32 100,55 100,83 100,48 101,21 101,06 101,03 100,82 100,10 100,00 100,54 0,44 0,20

PP (%)*
100,53 100,77 100,87 100,38 100,31 100,43 101,11 100,02 100,16 102,45 99,70 101,83 100,71 0,77 0,60

Vit A (%)*
101,34 100,09 100,44 100,45 100,12 100,32 100,90 100,34 100,60 100,95 99,95 101,07 100,55 0,43 0,19

VitE (%)*
101,96 102,43 101,77 102,35 101,51 101,04 100,27 101,28 100,25 100,60 100,70 100,18 101,20 0,81 0,66

Como se puede observar, existe una excelente uniformidad en los resultados obtenidos, el coeficiente de variacin fue < 0,66 % en todos los casos.

106

Esto nos indica que la nanoemulsin formulada tiene el comportamiento de un sistema homogneo.

13.8.5 .

Homogeneidad de la c rema dermo cosmtica

Del mismo modo se evalu la homogeneidad de la crema dermocosmtica. Para ello se analizaron 12 muestras tomadas de una misma formulacin siguiendo el protocolo de muestreo aleatorio especificado en la Seccin 9.3.4 (pg. 65). Los resultados obtenidos se resumen en la tabla 37. Tabla 37. Porcentaje de recuperacin de los analitos en la crema

dermocosmtica. MUESTRA
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 MEDIA DESV. ESTNDAR %CV
*n=3

MP (%)*
101,53 100,97 102,03 100,90 101,48 103,63 102,33 100,64 102,73 101,42 100,53 102,18 101,70 0,92 0,85

PP (%)*
100,64 99,86 102,12 100,73 102,32 102,13 103,36 101,19 103,53 102,50 98,09 101,50 101,42 1,58 1,26

Vit A (%)*
104,21 100,88 104,38 101,86 103,71 104,09 101,52 102,38 102,13 103,10 102,64 103,55 102,87 1,15 1,31

VitE (%)*
100,73 99,69 102,62 99,52 101,62 99,32 101,48 101,43 99,97 101,23 100,51 100,22 100,70 1,00 1,01

Una vez ms se puede constatar la homogeneidad de la crema formulada ya que los coeficientes de variacin de los % de recuperacin de todos los analitos

107

estudiados fueron inferiores a 1,31 % en todos los casos. Esto nos indica que la crema formulada es homognea.

13.8.6.

Rep roducib ilidad de la fo rmulacin

Para evaluar la precisin del procedimiento de la formulacin de la crema dermocosmtica se evaluaron todos los analitos presentes en diferentes lotes de cremas. Este estudio se realiz con la finalidad de confirmar y garantizar que durante el proceso de manufactura se obtena siempre el mismo producto (crema) bajo las condiciones optimizadas previamente. Las muestras de crema se analizaron por el procedimiento analtico propuesto y se encontraron valores para todos los analitos en estudio dentro del intervalo: 90 110 % establecido por la USP para principios activos con efectos teraputicos. Como puede apreciarse en la tabla 38 el porcentaje de recuperacin para cada analito en estudio es reproducible, lo que establece que la formulacin de la crema con una nanoemulsin base es siempre la misma, esto indica que al agregarle el polmero, la nanoemulsin base no pierde sus propiedades (tablas 36 y 37). Tabla 38. Porcentaje de recuperacin de los analitos en la crema dermocosmtica a un tiempo de mezclado final de 60 min. LOTE*
1 2 3 4 5 6 7 MEDIA
*(n= 6)

MP %
101,51 102,00 101,90 101,37 100,60 101,51 99,93 101,26

PP %
100,87 101,73 102,69 100,70 100,00 101,22 100,40 101,09

Vit A %
103,16 103,22 102,01 103,10 101,52 100,47 100,19 101,95

VitE %
98,81 100,16 99,63 100,65 101,32 100,23 100,20 100,14

108

11. CONCLUSI ON ES
Por medio de los resultados obtenidos se puede concluir que:

Empleando el concepto de Formulacin ptima fue posible conseguir la

relacin aceite de maz/parafina, y la temperatura mnima del proceso de emulsionacin de baja energa para obtener la nanoemulsin base. Este concepto permiti obtener la nanoemulsin sin recurrir a la elaboracin de complejos diagramas de fases del sistema estudiado.

Con el protocolo de emulsionacin a baja energa optimizado se logr

obtener una nanoemulsin base y una crema dermocosmtica, cuyo tamao de gota fue en promedio alrededor de 100 nm, lo que favorecera el pasaje transdrmico. Estas formulaciones presentaron alta estabilidad cintica, tanto a temperatura ambiente como a alta temperatura.

El mtodo analtico desarrollado es cuantitativo, rpido y preciso para la

determinacin de vitaminas A y E y parabenos (metil y propil) en muestras de nanoemulsin y crema dermocosmticas. Se comprob que no hay efecto de matriz en el anlisis, por lo tanto es posible evaluar el nivel de VitA, VitE, MP y PP de las muestras de crema dermocosmticas utilizando una curva de calibrado de los cuatro analitos en fase orgnica (metanol). Por otra parte, los resultados mostraron una buena reproducibilidad, la Desviacin Estndar Relativa (DER) tanto en un da como en das diferentes, fue menores al 2 % en todos los casos. Esto indica una buena precisin del mtodo analtico empleado y una muy buena estabilidad del sistema cromatogrfico. Los estudios de exactitud, mostraron valores de recuperacin para las VitA, VitE, MP y PP desde 93,36 % hasta 106,21 %, los cuales son cuantitativos para todos los casos, debido a que la USP establece un intervalo de 90 110 % para principios activos de uso teraputicos.

109

El procedimiento propuesto para realizar el muestreo aleatorio y tratamiento

de muestra, demostr ser efectivo, ya que se obtuvo muy buena reproducibilidad de los resultados.

Se pudo demostrar a travs del mtodo analtico empleado, que tanto la

nanoemulsin como la crema dermocosmtica se comportan como sistemas homogneos.

El porcentaje de recuperacin para cada analito en estudio fue el

reproducible, lo que establece que la formulacin de la crema con una nanoemulsin base es siempre la misma, esto indica que al adicionarle polmero (Carbopol 940), la nanoemulsin no pierde sus propiedades

fisicoqumicas, slo cambia su aspecto de traslcida pasa a blanco perlado y aumenta su viscosidad.

110

12. RECOMENDACI ONES Realizar estudios in vitro para la verificacin del pasaje transdrmico de las
vitaminas que estn disueltas en la fase interna de la crema, y que presentan un dimetro de gota de 100 nm.

Evaluar la sensacin de la crema sobre la piel en un nmero significativo de

personas.

Elaborar un estudio reolgico completo de la nanoemulsin y la crema

dermocosmtica.

Efectuar barridos unidimensionales tanto para el aceite de maz como para la

parafina empleando la mezcla de surfactantes no inicos Span 60/ Tween 80, para observar su formulacin ptima.

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